本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)微生物領(lǐng)域，具體涉及一種基于代謝互養(yǎng)的植物抗病益生復(fù)合菌劑及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、現(xiàn)代農(nóng)業(yè)面臨的一個重大挑戰(zhàn)是控制植物病害，尖孢鐮刀菌是一種普遍存在的土壤傳播病原菌，因其引起多種作物的萎蔫病而廣為人知，導(dǎo)致全球范圍內(nèi)的嚴(yán)重產(chǎn)量損失。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中農(nóng)民大多依賴于化工產(chǎn)品如化肥和化學(xué)農(nóng)藥來達(dá)到防控病害、作物增產(chǎn)的目的。但長期施用化工產(chǎn)品對土壤造成了嚴(yán)重的損害，如肥力下降、土壤板結(jié)、連作障害、防蟲害能力差，而且作物上殘留的化學(xué)農(nóng)藥也威脅著人類健康。因此，開發(fā)一種環(huán)保、高效且可持續(xù)的植物病害防控方法顯得尤為重要。

2、近年來，微生物群落研究的進(jìn)展突顯了合成菌群在增強(qiáng)植物病害抵抗力方面的潛力。復(fù)合菌劑是由兩種或多種微生物聯(lián)合組成，通過人工設(shè)計(jì)，創(chuàng)建新型微生物生態(tài)系統(tǒng)，形成具有特定功能的復(fù)合產(chǎn)品。與單一菌劑或自然微生物群落相比，復(fù)合菌劑因其較低的復(fù)雜性、高度的可控性和優(yōu)良的穩(wěn)定性而具備顯著優(yōu)勢。在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域，復(fù)合菌劑的應(yīng)用研究尚處于起步階段。未來的研究重點(diǎn)在于如何借助現(xiàn)有的生態(tài)學(xué)理論，設(shè)計(jì)和構(gòu)建穩(wěn)定且高效的復(fù)合菌劑，以確保其生物學(xué)功能的持久發(fā)揮。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的第一個目的是提供一種植物抗病益生復(fù)合菌劑，不僅能夠抑制植物枯萎病，還能通過代謝互養(yǎng)和共同形成生物膜，顯著促進(jìn)植物的生長和健康，為科學(xué)設(shè)計(jì)復(fù)合菌劑產(chǎn)品提供理論和技術(shù)支持。

2、本發(fā)明的又一目的是提供該復(fù)合菌劑的應(yīng)用。

3、本發(fā)明的目的可通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

4、第一方面，本發(fā)明保護(hù)一種基于代謝互養(yǎng)的植物抗病益生復(fù)合菌劑，所述菌劑的活性成分由貝萊斯芽孢桿菌(bacillus?velezensis)sqr9和產(chǎn)酶溶桿菌(lysobacterenzymogenes)xl8混合而成；所述的貝萊斯芽孢桿菌sqr9保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2012年2月27日，保藏編號為cgmcc?no.5808，因貝萊斯芽孢桿菌sqr9在現(xiàn)有技術(shù)中多次公開，所以本申請未提供保藏證明；所述的產(chǎn)酶溶桿菌xl8保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏日期為2024年7月29日，保藏號為gdmcc?no：64920。

5、在具體的實(shí)施方案中，所述復(fù)合菌劑由貝萊斯芽孢桿菌sqr9和產(chǎn)酶溶桿菌xl8的菌液按體積比1：1制備而成。

6、由于貝萊斯芽孢桿菌sqr9在保藏時以解淀粉芽孢桿菌sqr9進(jìn)行的保藏，后來技術(shù)進(jìn)步后經(jīng)鑒定為貝萊斯芽孢桿菌，因此在本文中不管是貝萊斯芽孢桿菌sqr9還是解淀粉芽孢桿菌sqr9都是指保藏編號為cgmcc?no.5808的這株菌。

7、第二方面，本發(fā)明所述的植物抗病復(fù)合菌劑主要通過以下方法制備：將解淀粉芽孢桿菌sqr9和產(chǎn)酶溶桿菌xl8分別接種于胰蛋白胨大豆肉湯(tsb)培養(yǎng)基中，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，條件為：ph?7.0，發(fā)酵溫度30℃，轉(zhuǎn)速為170r/min，發(fā)酵時間為24h；離心、清洗得菌體，用等量0.9％氯化鈉溶液重懸菌體；調(diào)節(jié)菌液od600至2，等量混合兩種菌液即為所述的植物抗病復(fù)合菌劑。

8、所用tsb培養(yǎng)液配制方法為，以配制1l培養(yǎng)基為例：tsb粉劑30g，定容至1000ml，115℃滅菌30min。

9、第三方面，本發(fā)明保護(hù)前文所述的植物抗病益生復(fù)合菌劑在促進(jìn)黃瓜生長中的應(yīng)用。

10、第四方面，本發(fā)明保護(hù)前文所述的植物抗病益生復(fù)合菌劑在制備促進(jìn)黃瓜生長的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

11、第五方面，本發(fā)明保護(hù)前文所述的植物抗病益生復(fù)合菌劑在防控黃瓜枯萎病中的應(yīng)用。

12、第六方面，本發(fā)明保護(hù)前文所述的植物抗病益生復(fù)合菌劑在制備防控黃瓜枯萎病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

13、有益效果：在尖孢鐮刀菌侵染的黃瓜根際施用由解淀粉芽孢桿菌sqr9和產(chǎn)酶溶桿菌xl8組成的復(fù)合菌劑(blf)能夠顯著改善黃瓜的生長和健康狀況。具體來說，與單獨(dú)接種尖孢鐮刀菌的對照組f相比，施用復(fù)合菌劑后，黃瓜的株高和鮮重分別提高了100％和127％，發(fā)病率降低了80％。相比之下，單獨(dú)接種解淀粉芽孢桿菌sqr9的菌劑(bf)在黃瓜株高和鮮重的改善效果上分別提高了55％和97％，發(fā)病率降低了46％；而單獨(dú)接種產(chǎn)酶溶桿菌xl8的菌劑(lf)則在黃瓜株高和鮮重上分別提高了64％和112％，發(fā)病率降低了60％。

14、生物材料保存信息

15、菌種名稱：產(chǎn)酶溶桿菌；

16、拉丁文名：lysobacter?enzymogenes；

17、菌株編號：xl8；

18、保藏機(jī)構(gòu)：廣東省微生物菌種保藏中心；

19、保藏機(jī)構(gòu)簡稱：gdmcc；

20、保藏地址：廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓廣東省微生物研究所；

21、保藏日期：2024年7月29日；

22、保藏中心登記入冊編號：gdmcc?no：64920。

技術(shù)特征：

1.一種基于代謝互養(yǎng)的植物抗病益生復(fù)合菌劑，其特征在于，所述復(fù)合菌劑由貝萊斯芽孢桿菌(bacillus?velezensis)sqr9和產(chǎn)酶溶桿菌(lysobacter?enzymogenes)xl8的菌液混合組成，所述的貝萊斯芽孢桿菌sqr9保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2012年2月27日，保藏編號為cgmcc?no.5808，所述的產(chǎn)酶溶桿菌xl8保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏日期為2024年7月29日，保藏號為gdmcc?no：64920。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌劑，其特征在于，所述復(fù)合菌劑由貝萊斯芽孢桿菌sqr9和產(chǎn)酶溶桿菌xl8的菌液按體積比1：0.5～5制備而成。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合菌劑，其特征在于，所述復(fù)合菌劑由貝萊斯芽孢桿菌sqr9和產(chǎn)酶溶桿菌xl8的菌液按體積比1：1制備而成。

4.權(quán)利要求1所述的植物抗病益生復(fù)合菌劑在促進(jìn)黃瓜生長中的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求1所述的植物抗病益生復(fù)合菌劑在制備促進(jìn)黃瓜生長的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求1所述的植物抗病益生復(fù)合菌劑在防控黃瓜抗枯萎病中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1所述的植物抗病益生復(fù)合菌劑在制備防控黃瓜抗枯萎病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求1所述的植物抗病益生復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述的植物益生復(fù)合菌劑通過以下方法制備得到：分別將活化后的所述菌株sqr9和xl8接種于胰蛋白胨大豆肉湯液體培養(yǎng)基25～35℃150～200r?min-1培養(yǎng)15～30小時；離心、清洗獲得菌體，用等量0.9％氯化鈉重懸菌體；調(diào)節(jié)菌液od600至2，等量混合兩種菌液即為所述的植物促生抗病復(fù)合菌劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述胰蛋白胨大豆肉湯液體培養(yǎng)基如下：tsb粉劑30g，定容至1000ml，115℃滅菌30min。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種基于代謝護(hù)養(yǎng)的植物抗病益生復(fù)合菌劑及其制備方法和應(yīng)用，該復(fù)合菌劑由解淀粉芽孢桿菌SQR9和產(chǎn)酶溶桿菌XL8構(gòu)成，所述菌株XL8從黃瓜根際分離獲得，能夠利用菌株SQR9的代謝產(chǎn)物生長，雙菌發(fā)酵液能顯著抑制病原菌尖孢鐮刀菌的生長。該植物抗病益生復(fù)合菌劑不僅能夠顯著促進(jìn)黃瓜生長，還能顯著防控由尖孢鐮刀菌引起的植物枯萎病。

技術(shù)研發(fā)人員：沈其榮,徐志輝,孫新麗,吳凱,夏日妍
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9