本發(fā)明涉及分子遺傳，具體地說(shuō)，涉及一種與豬脂肪細(xì)胞生成相關(guān)的rna甲基化修飾的circrna標(biāo)志物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、真核生物中最常見(jiàn)的表觀遺傳修飾是n6-甲基腺苷（m6a）甲基化修飾，其在脂肪生成中的作用逐漸被揭示，但在非編碼rnas（noncoding?rna,?ncrnas）上是否存在m6a修飾來(lái)調(diào)控脂肪發(fā)育尚未得到闡明。環(huán)狀rnas（circular?rna,?circrnas）因其良好的穩(wěn)定性和rnase?r酶抗性已成為解析動(dòng)物經(jīng)濟(jì)性狀的重要工具。研究表明circrnas在細(xì)胞增殖中發(fā)揮著調(diào)控作用，但是在豬脂肪發(fā)育過(guò)程中的研究較少，并且m6a修飾是否通過(guò)circrna調(diào)控成脂分化尚有待研究。研究rna?m6a甲基化修飾通過(guò)circrna對(duì)豬脂肪細(xì)胞生成的調(diào)控作用，可以為提高豬肉品質(zhì)和畜牧業(yè)健康生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種與豬脂肪細(xì)胞生成相關(guān)的rna甲基化修飾的circrna標(biāo)志物及其應(yīng)用。

2、為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，第一方面，本發(fā)明提供rna?m6a甲基化修飾相關(guān)蛋白mettl3的以下任一應(yīng)用：

3、（1）用于調(diào)控豬脂肪細(xì)胞增殖和成脂分化；

4、具體地，所述調(diào)控是指正調(diào)控豬脂肪細(xì)胞增殖和負(fù)調(diào)控成脂分化；

5、（2）用于正調(diào)控豬circigf1r的m6a修飾水平。

6、第二方面，本發(fā)明提供rna?m6a甲基化修飾相關(guān)蛋白mettl3的抑制劑的以下任一應(yīng)用：

7、（1）用于抑制豬脂肪細(xì)胞增殖和促進(jìn)成脂分化；

8、（2）用于降低豬circigf1r的m6a修飾水平。

9、所述抑制劑可選自shrna、sirna、dsrna、mirna、cdna、反義rna/dna、低分子化合物、肽、抗體等中的至少一種。

10、優(yōu)選地，所述抑制為stm-2457，化學(xué)式為c25h28n6o2（cas號(hào)為2499663-01-1）。

11、第三方面，本發(fā)明提供rna?m6a甲基化修飾相關(guān)蛋白fto的以下任一應(yīng)用：

12、（1）用于調(diào)控豬脂肪細(xì)胞增殖和成脂分化；

13、具體地，所述調(diào)控是指正調(diào)控豬脂肪細(xì)胞增殖和成脂分化；

14、（2）用于負(fù)調(diào)控豬circigf1r的m6a修飾水平。

15、第四方面，本發(fā)明提供rna?m6a甲基化修飾相關(guān)蛋白fto的抑制劑的以下任一應(yīng)用：

16、（1）用于抑制豬脂肪細(xì)胞增殖和成脂分化；

17、（2）用于提高豬circigf1r的m6a修飾水平。

18、所述抑制劑可選自shrna、sirna、dsrna、mirna、cdna、反義rna/dna、低分子化合物、肽、抗體等中的至少一種。

19、優(yōu)選地，所述抑制為stm-2457，分子式為c18h15cl2n3o3（cas號(hào)為2243736-45-8）。

20、本發(fā)明中，蛋白mettl3在ncbi中的參考序列編號(hào)為np_062695.2；蛋白fto在ncbi中的參考序列編號(hào)為np_001106162.1；豬circigf1r的序列如seq?id?no:1所示。

21、第五方面，本發(fā)明提供一種與豬脂肪細(xì)胞生成相關(guān)的rna甲基化修飾的circrna標(biāo)志物，其為豬circigf1r。

22、第六方面，本發(fā)明提供豬circigf1r在促進(jìn)豬脂肪細(xì)胞成脂分化中的應(yīng)用。

23、借由上述技術(shù)方案，本發(fā)明至少具有下列優(yōu)點(diǎn)及有益效果：

24、本發(fā)明提供一種與豬脂肪細(xì)胞生成相關(guān)的rna甲基化修飾的circrna標(biāo)志物，并且首次發(fā)現(xiàn)可以通過(guò)改變r(jià)na?m6a修飾水平，來(lái)影響豬脂肪細(xì)胞增殖和成脂分化的功能。在豬脂肪細(xì)胞中添加m6a甲基轉(zhuǎn)移酶mettl3的特異性抑制劑stm-2457和m6a去甲基化酶fto的特異性抑制劑fb23-2后，流式細(xì)胞術(shù)和edu染色發(fā)現(xiàn)處于細(xì)胞增殖階段的細(xì)胞數(shù)減少，qrt-pcr結(jié)果顯示增殖相關(guān)基因的表達(dá)均極顯著降低（ p<0.01），該結(jié)果表明stm-2457/fb23-2可以抑制豬脂肪細(xì)胞增殖。對(duì)細(xì)胞進(jìn)行成脂誘導(dǎo)后，通過(guò)油紅o染色和qrt-pcr結(jié)果發(fā)現(xiàn)，stm-2457促進(jìn)細(xì)胞成脂，而fb23-2則得到相反的表型。此外，利用sramp在線網(wǎng)站預(yù)測(cè)出circigf1r具有多個(gè)m6a修飾位點(diǎn)，并通過(guò)qrt-pcr和merip-qpcr結(jié)果表明，添加stm-2457極顯著降低了circigf1r的m6a修飾水平（ p<0.01）。在細(xì)胞中干擾circigf1r并進(jìn)行成脂分化誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)脂滴明顯減少、成脂關(guān)鍵基因表達(dá)極顯著降低（ p<0.01）；設(shè)計(jì)挽救試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)干擾circigf1r的表達(dá)后降低了stm-2457對(duì)細(xì)胞促進(jìn)成脂分化的效果。本發(fā)明為rna甲基化修飾的circrna標(biāo)志物在改善豬肉質(zhì)品質(zhì)中的應(yīng)用提供新的理論依據(jù)。

技術(shù)特征：

1.rna?m6a甲基化修飾相關(guān)蛋白mettl3的以下任一應(yīng)用：

2.rna?m6a甲基化修飾相關(guān)蛋白mettl3的抑制劑的以下任一應(yīng)用：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抑制劑，其特征在于，所述抑制劑選自shrna、sirna、dsrna、mirna、cdna、反義rna/dna、低分子化合物、肽、抗體中的至少一種；

4.rna?m6a甲基化修飾相關(guān)蛋白fto的以下任一應(yīng)用：

5.rna?m6a甲基化修飾相關(guān)蛋白fto的抑制劑的以下任一應(yīng)用：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抑制劑，其特征在于，所述抑制劑選自shrna、sirna、dsrna、mirna、cdna、反義rna/dna、低分子化合物、肽、抗體中的至少一種；

7.與豬脂肪細(xì)胞生成相關(guān)的rna甲基化修飾的circrna標(biāo)志物，其為豬circigf1r；

8.豬circigf1r在促進(jìn)豬脂肪細(xì)胞成脂分化中的應(yīng)用；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了與豬脂肪細(xì)胞生成相關(guān)的RNA甲基化修飾的circRNA標(biāo)志物及其應(yīng)用。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)RNA甲基化修飾可以調(diào)控豬的circRNA??circIGF1R的表達(dá)，并且具有調(diào)控豬脂肪細(xì)胞成脂分化的功能。本發(fā)明為了解RNA甲基化修飾通過(guò)circRNA在調(diào)控豬細(xì)胞成脂分化中的作用奠定理論基礎(chǔ)，為利用RNA甲基化修飾改善豬肉品質(zhì)提供新的理論依據(jù)。

技術(shù)研發(fā)人員：榮曉音,楊陽(yáng),郭曉紅,李步高,李萌,曹果清
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2