本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及靶向gfr3α的抗體及其制備方法和在抗癌中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、腫瘤是嚴(yán)重危害人類和其他哺乳動物的健康和生命的主要重大疾病之一。例如，肝癌是最常見的惡性腫瘤之一，也是全球癌癥死亡主要因素之一。目前，治療肝癌的主要方法仍然以手術(shù)、放療、化療等為主，但這些傳統(tǒng)的治療效果往往不盡人意。多數(shù)病人就診時已處于肝癌晚期，不符合手術(shù)治療指征及存在術(shù)后高復(fù)發(fā)率等問題；而且大多數(shù)肝癌患者出現(xiàn)肝功能異常，對放療、化療耐受性差。

2、近年來，腫瘤的生物治療，如靶向治療、免疫治療在腫瘤治療中取得了令人矚目的療效。其中，免疫治療(如免疫檢查點抑制劑、細(xì)胞免疫治療、抗體免疫治療、非特異性免疫調(diào)節(jié)劑等)在腫瘤的臨床試驗中取得了很好的療效。然而，這些生物治療方法也面臨著關(guān)鍵瓶頸問題，如毒副作用、臨床反應(yīng)率低等。例如，靶向檢查點(checkpoint)抗體療法在肝癌免疫治療中的有效率，僅為15-20％(lancet?2017,389:2492-2502)。因此，研發(fā)新的免疫治療藥物以及尋找新的治療靶點對于腫瘤的治療、降低藥物的毒副作用具有重要意義。

3、gfrα3是artemin(artn)(一種神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞系衍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子配體)受體，通過受體-配體的結(jié)合，激活ret信號，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。在急性髓細(xì)胞性白血病(aml)中，artn/gfrα3復(fù)合物通過活化ret-mtorc1信號途徑，抑制aml細(xì)胞的自噬，促進(jìn)aml的進(jìn)展(leukemia,2018,32(10):2189-2202)。artn-gfrα3-erk信號可促進(jìn)胰腺導(dǎo)管腺癌(pdac)細(xì)胞的增殖和侵襲，可作為pdac的診斷標(biāo)志物(int?j?cancer,2021,148(7):1756-1767)。gfrα3促進(jìn)了尿路上皮癌(uc)細(xì)胞的遷移和侵襲，其表達(dá)與uc總生存率呈負(fù)相關(guān)(minervaurol?nefrol,2018,70(1):79-86)。在肝癌中g(shù)frα3表達(dá)及其介導(dǎo)的信號與肝癌的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)，肝癌細(xì)胞表達(dá)的受體gfrα3與ter細(xì)胞產(chǎn)生的大量artn結(jié)合，促進(jìn)肝癌的生長和轉(zhuǎn)移(cell,2018,173(3):634-648)，提示gfrα3可作為肝癌的重要靶標(biāo)。

4、綜上所述，靶向gfrα3的抗體免疫治療在肝癌等腫瘤臨床治療中具有重要應(yīng)用前景和意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本技術(shù)正是提供了一種靶向gfrα3的抗體和其抗原結(jié)合片段，其在腫瘤臨床預(yù)防、治療和/或檢測中具有重要應(yīng)用前景和意義。

2、在本技術(shù)的第一方面中，提供了一種靶向gfrα3的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體包含重鏈互補決定區(qū)(vh?cdr)和輕鏈互補決定區(qū)(vl?cdr)，所述vh?cdr和vl?cdr分別具有選自下組的氨基酸序列：vh?cdr1：seq?id?no:1；vh?cdr2：seq?id?no:2；vh?cdr3：seq?id?no:3；vl?cdr1：seq?id?no:4；vl?cdr2：seq?id?no:5；以及vl?cdr3：seq?id?no:6。

3、在一些實施方式中，抗體包含重鏈可變區(qū)(vh)和輕鏈可變區(qū)(vl)，所述vh和vl分別具有選自下組的氨基酸序列：vh：(a)seq?id?no:7所示序列；或(b)與seq?id?no:7所示序列具有至少80％序列相同性的序列；以及vl：(a’)seq?id?no:8所示序列；或(b’)與seq?idno:8所示序列具有至少80％序列相同性的序列。

4、在一些實施方式中，本技術(shù)的抗體包含所述vh?cdr1、vh?cdr2、vh?cdr3、vl?cdr1、vl?cdr2和vl?cdr3的組合。在一些實施方式中，本技術(shù)的抗體包含序列如seq?id?no:7所示的vh和序列如seq?id?no:8所示的vl序列。在一些實施方式中，本技術(shù)的抗體的vh與seq?idno:7所示序列具有至少80％序列相同性和/或所述抗體的vl與seq?id?no:8所示序列具有至少80％序列相同性，且氨基酸殘基的差異不位于cdr中，且所述抗體具有靶向和阻斷gfrα3的活性。在一些實施方式中，本技術(shù)的vh和/或vl在其非cdr區(qū)中包含一個或多個氨基酸殘基的替代(例如人源化設(shè)計和替代)。

5、可采用本領(lǐng)域中已知的抗體編號系統(tǒng)對抗體序列進(jìn)行編號，例如kabat、chothia、imgt、aho等編號系統(tǒng)。本技術(shù)中采用了imgt編號系統(tǒng)。應(yīng)理解，也可采用其他的編號系統(tǒng)對本技術(shù)的抗體進(jìn)行編號而不脫離本技術(shù)的發(fā)明實質(zhì)。

6、在一些實施方式中，本技術(shù)的抗體或其抗原結(jié)合片段選自：單克隆抗體、多克隆抗體、fab、fab'、f(ab')2、fd、scfv、二硫鍵連接的fv、v-nar結(jié)構(gòu)域、ignar、胞內(nèi)抗體、iggδch2、小抗體、f(ab')3、四抗體、三抗體、雙特異性抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、dvd-ig、fcab、mab2、(scfv)2或scfv-fc。

7、在一些實施方式中，本技術(shù)的抗體具有選自下組的一個或多個特征：

8、(i)其特異性結(jié)合gfrα3，例如通過表面等離子共振spr測定，其與gfrα3的結(jié)合親和力kd為0.1nm～0.2nm；

9、(ii)其特異性阻斷artn與gfrα3的結(jié)合，例如通過elisa檢測，其對artn與gfrα3結(jié)合的阻斷的ic50為200nm～400nm；

10、(iii)其可抑制癌細(xì)胞增殖和/或侵襲，尤其是artn與gfrα3通路相關(guān)活化的癌細(xì)胞(如肝癌細(xì)胞)的增殖和/或侵襲。

11、在本技術(shù)的一些方面中，提供了一種核酸分子，其編碼本技術(shù)的抗體或其抗原結(jié)合片段。

12、在一些實施方式中，本技術(shù)的核酸分子包含選自下組中的一個或多個序列：seqid?no:9、seq?id?no:10、seq?id?no:11、seq?id?no:12、seq?id?no:13、seq?id?no:14、seqid?no:15和seq?id?no:16。在一些實施方式中，本技術(shù)的核酸分子包含如下所示序列：seqid?no:9、seq?id?no:10、seq?id?no:11、seq?id?no:12、seq?id?no:13和seq?id?no:14；或者，seq?id?no:15和seq?id?no:16。在一些實施方式中，本技術(shù)的核酸分子經(jīng)密碼子優(yōu)化。

13、在本技術(shù)的一些方面中，提供了一種載體或宿主細(xì)胞，其包含本技術(shù)的核酸分子。

14、在本技術(shù)的一些方面中，提供了一種產(chǎn)品，其包含本技術(shù)的抗體或其抗原結(jié)合片段、核酸分子、和/或載體或宿主細(xì)胞。

15、在本技術(shù)的一些方面中，提供了本技術(shù)抗體或其抗原結(jié)合片段、核酸分子、載體或宿主細(xì)胞在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用，其中所述產(chǎn)品：

16、(a)用于預(yù)防和/或治療artn-gfrα相關(guān)疾病(例如實體瘤，如肝癌、胰腺癌(例如胰腺導(dǎo)管腺癌)、尿路上皮癌(例如膀胱癌、腎盂癌和輸尿管癌)；非實體瘤，如白血病(例如急性髓細(xì)胞性白血病))；和/或

17、(b)用于檢測artn、gfrα3或兩者的結(jié)合產(chǎn)物存在與否、其水平或活性。

18、在一些實施方式中，本技術(shù)的產(chǎn)品為藥物或試劑盒。

19、在本技術(shù)的一些方面中，提供了一種治療腫瘤的方法，所述方法包括給予有需要的對象治療有效量的本技術(shù)的抗體或其抗原結(jié)合片段、核酸分子、和/或載體或宿主細(xì)胞、或產(chǎn)品。

20、本領(lǐng)域的技術(shù)人員可對前述的技術(shù)方案和技術(shù)特征進(jìn)行任意組合而不脫離本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思和保護范圍。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。