本公開涉及種質(zhì)資源鑒定領(lǐng)域，特別涉及一種鑒定云芒4號(hào)的引物組、試劑盒及方法。

背景技術(shù)：

1、芒果是熱帶水果中的代表性水果之一，因其獨(dú)特的風(fēng)味和營養(yǎng)價(jià)值受到全球消費(fèi)者的青睞。為了滿足國內(nèi)外市場(chǎng)的需求，我國芒果產(chǎn)業(yè)在面積和產(chǎn)量上均有顯著增長，已成為全球芒果生產(chǎn)的重要國家之一。但目前我國現(xiàn)行的芒果品種產(chǎn)量和品質(zhì)都有待提高。若想提高芒果產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，必須加快芒果品種選育并推廣芒果新品種。

2、云芒4號(hào)是以球芒為母本，以紅云為父本，雜交后經(jīng)過選育，定向培育而成的芒果新品種。云芒4號(hào)因其具有產(chǎn)量高和品質(zhì)優(yōu)等特點(diǎn)，以后市場(chǎng)上可能會(huì)出現(xiàn)用其他品種假冒該品種銷售的現(xiàn)象，但因無性繁殖苗期的外部形態(tài)特征難以區(qū)分辨別品種的真實(shí)性，難以有效地監(jiān)督和仲裁，會(huì)給該品種的推廣、利用和保護(hù)帶來不良影響。

3、目前，鑒定芒果新品種面臨著諸多挑戰(zhàn)，主要體現(xiàn)在以下四個(gè)方面：一是品種多樣，芒果品種數(shù)量眾多，且不同品種間在外觀、風(fēng)味、成熟期等方面存在細(xì)微差異，這增加了準(zhǔn)確鑒定的難度；二是形態(tài)特征相似，許多芒果品種在外觀上具有相似性，如果實(shí)大小、性狀和顏色，這使得僅憑肉眼觀察難以區(qū)分；三是遺傳背景復(fù)雜，芒果的遺傳背景復(fù)雜，不同品種間可能存在雜交和異交，導(dǎo)致品種間界限模糊；四是環(huán)境影響，環(huán)境因素如氣候、土壤條件等對(duì)芒果的生長和果實(shí)品質(zhì)有很大影響，這可能導(dǎo)致同一品種在不同環(huán)境下表現(xiàn)出差異，從而增大了鑒定難度。因此，亟需一種真實(shí)有效、不受環(huán)境影響，且能夠準(zhǔn)確鑒定芒果新品種的簡(jiǎn)單、快速和有效的鑒別技術(shù)。

4、公開內(nèi)容

5、為了解決快速有效鑒定和品種保護(hù)的問題，本公開實(shí)施例提供了一種鑒定云芒4號(hào)的引物組、試劑盒及方法。所述技術(shù)方案如下：

6、一方面，本公開提供了一種鑒定云芒4號(hào)的引物組，所述引物組包括：6個(gè)引物對(duì)，每個(gè)所述引物對(duì)均包括正向引物和反向引物，所述第1引物對(duì)的正向引物、所述第1引物對(duì)的反向引物、所述第6引物對(duì)的正向引物和第6引物對(duì)的反向引物依次如序列表中seq?idno：1至seq?id?no：12所示。

7、另一方面，本公開提供了一種鑒定云芒4號(hào)的試劑盒，所述試劑盒包括上述引物組。

8、又一方面，本公開提供了一種鑒定云芒4號(hào)的方法，所述方法包括：

9、提取待測(cè)樣品的基因組dna；

10、以所述基因組dna作為模板，利用上述6個(gè)引物對(duì)分別進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到擴(kuò)增產(chǎn)物；

11、將所述6個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物分別進(jìn)行熒光毛細(xì)管電泳檢測(cè)，得到6個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物的峰值；

12、將所述6個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物的峰值分別與對(duì)應(yīng)的所述引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值進(jìn)行比對(duì)，從而判斷所述待測(cè)樣品是否為云芒4號(hào)。

13、具體地，所述第1引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為206和210，所述第2引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為172和175，所述第3引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為175，所述第4引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為150，所述第5引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為159，所述第6引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為113，若所述待測(cè)樣品的6個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物的峰值與對(duì)應(yīng)的所述引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值一致，則所述待測(cè)樣品為所述云芒4號(hào)，若所述待測(cè)樣品的6個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物的峰值與對(duì)應(yīng)的所述引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值中的至少一個(gè)不一致，則所述待測(cè)樣品不是所述云芒4號(hào)。

14、本公開實(shí)施例提供的技術(shù)方案帶來的有益效果是：本實(shí)施例提供的引物組，通過檢測(cè)mil035、mil053、mil074、mil083、mil117和mil173標(biāo)記，能夠克服基于芒果外部形態(tài)特征進(jìn)行品種鑒定的不確定性，在116份待測(cè)樣品中準(zhǔn)確鑒定出芒果新品種云芒4號(hào)，且鑒定過程操作簡(jiǎn)便、成本低、效率高、結(jié)果直觀可靠。為芒果新品種云芒4號(hào)的保護(hù)提供了科學(xué)的技術(shù)保障，有利于該芒果品種的推廣和應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

技術(shù)特征：

1.一種鑒定云芒4號(hào)的引物組，其特征在于，所述引物組包括：6個(gè)引物對(duì)，每個(gè)所述引物對(duì)均包括正向引物和反向引物，所述第1引物對(duì)的正向引物、所述第1引物對(duì)的反向引物、所述第6引物對(duì)的正向引物和第6引物對(duì)的反向引物依次如序列表中seq?id?no：1至seq?idno：12所示。

2.一種鑒定云芒4號(hào)的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如權(quán)利要求1所述的引物組。

3.一種鑒定云芒4號(hào)的方法，其特征在于，所述方法包括：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述第1引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為206和210，所述第2引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為172和175，所述第3引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為175，所述第4引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為150，所述第5引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為159，所述第6引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值為113，若所述待測(cè)樣品的6個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物的峰值與對(duì)應(yīng)的所述引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值一致，則所述待測(cè)樣品為所述云芒4號(hào)，若所述待測(cè)樣品的6個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物的峰值與對(duì)應(yīng)的所述引物對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)峰值中的至少一個(gè)不一致，則所述待測(cè)樣品不是所述云芒4號(hào)。

技術(shù)總結(jié)
本公開提供了一種鑒定云芒4號(hào)的引物組、試劑盒及方法，屬于種質(zhì)資源鑒定領(lǐng)域。所述引物組包括：6個(gè)引物對(duì)，所述每個(gè)引物對(duì)均包括正向引物和反向引物，所述第1引物對(duì)的正向引物、所述第1引物對(duì)的反向引物、所述第6引物對(duì)的正向引物和第6引物對(duì)的反向引物依次如序列表中SEQ?ID?NO：1至SEQ?ID?NO：12所示。本實(shí)施例提供的引物組及相應(yīng)的方法，能夠克服基于芒果外部形態(tài)特征進(jìn)行品種鑒定的不確定性，準(zhǔn)確鑒定出芒果新品種云芒4號(hào)，并且操作簡(jiǎn)便、成本低、效率高、結(jié)果直觀可靠。本公開為芒果新品種云芒4號(hào)的保護(hù)提供了科學(xué)的技術(shù)保障，有利于該芒果品種的推廣和應(yīng)用。

技術(shù)研發(fā)人員：龍青姨,柳覲,牛迎鳳,毛常麗,李開雄,鄭誠,劉紫艷
受保護(hù)的技術(shù)使用者：云南省熱帶作物科學(xué)研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2