本發(fā)明屬于分子生物，具體涉及一種惡性血液腫瘤染色體易位t(5；8)的檢測試劑及其應用。

背景技術(shù)：

1、多發(fā)性骨髓瘤(mm)是僅次于淋巴瘤的第二大血液系統(tǒng)惡性腫瘤，是一種具有高度異質(zhì)性的惡性漿細胞疾病。目前研究表明，大部分mm病例都有細胞遺傳學的異常，表現(xiàn)為igh基因的增強子易位、超二倍體和亞二倍體核型，其中以位于14號染色體的igh基因增強子發(fā)生易位為主。igh基因增強子可與不同染色體發(fā)生易位融合，其易位的結(jié)果是導致不同的原癌基因過表達。目前，mm患者的治療方案及預后評估主要依賴于igh基因增強子易位的基因分型來確定。而目前臨床上用于檢測igh基因增強子易位的基因分型十分有限。目前報道了用于預后評估的特異性標記包括t(4；14)、t(11；14)、t(14；16)、17p13缺失、13q14缺失及1q21擴增。但臨床上仍有許多染色體易位未被發(fā)現(xiàn)，新型的染色體易位對于準確基因分型及制定有效的治療策略顯得尤為重要。

2、nccn多發(fā)性骨髓瘤臨床實踐指南認為初始診斷中的骨髓檢查應包括對骨髓穿刺所取細胞進行常規(guī)染色體核型分析和熒光原位雜交檢測(fish)。雖然fish作為目前臨床上檢測igh基因增強子易位的基因分型最常用的手段，但是fish檢測是基于已知的染色體易位的具體序列設計得到，對于未知的染色體易位因無法提前設計檢測探針，導致患者中相當大一部分未知的染色體易位用現(xiàn)有技術(shù)無法檢測到。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種新型的惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)，是8號染色體上的一個增強子易位到5號染色體cpeb4基因的上游，使cpeb4基因表達上調(diào)，為檢測多發(fā)性骨髓瘤患者的分子分型提供了新的檢測靶點。

2、本發(fā)明提供了一種惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)，是以人基因組版本號grch38為基礎，8號染色體在第127798852位斷裂得到的上游序列與5號染色體在第173708142位斷裂得到的下游序列重連形成；

3、所述上游序列是包含核苷酸序列如seq?id?no:1所示的dna序列；

4、所述下游序列是包含核苷酸序列如seq?id?no:2所示的dna序列。

5、優(yōu)選的，8號染色體上的上游序列還包含增強子的序列；

6、所述增強子的核苷酸序列如seq?id?no:3所示；

7、5號染色體上的下游序列還包含cpeb4基因啟動子的序列；

8、所述cpeb4基因啟動子的核苷酸序列如seq?id?no:4所示。

9、本發(fā)明提供了一種檢測所述惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)的試劑，包括基于pcr擴增檢測用試劑和/或基于fish技術(shù)檢測用試劑。

10、優(yōu)選的，所述基于pcr擴增檢測用試劑包括擴增惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)的引物。

11、優(yōu)選的，所述擴增惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)的引物包括以下至少一對引物：t58-f1/t58-r1、t58-f3/t58-r3和t58-f4/t58-r4；

12、所述t58-f1的核苷酸序列如seq?id?no:5所示；

13、所述t58-r1的核苷酸序列如seq?id?no:6所示；

14、所述t58-f3的核苷酸序列如seq?id?no:7所示；

15、所述t58-r3的核苷酸序列如seq?id?no:8所示；

16、所述t58-f4的核苷酸序列如seq?id?no:9所示；

17、所述t58-r4的核苷酸序列如seq?id?no:10所示。

18、本發(fā)明提供了一種檢測所述惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)的試劑盒，其特征在于，包括所述試劑和與所述試劑配套使用的檢測試劑。

19、優(yōu)選的，包括實時熒光定量pcr檢測cpeb4基因表達水平的引物。

20、優(yōu)選的，所述實時熒光定量pcr檢測cpeb4基因表達水平的引物的核苷酸序列如seq?id?no:11和seq?id?no:12所示。

21、本發(fā)明提供了所述惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)作為檢測靶點在制備多發(fā)性骨髓瘤分子分型的試劑盒中的應用。

22、本發(fā)明提供了所述試劑在制備多發(fā)性骨髓瘤分子分型的試劑盒中的應用。

23、本發(fā)明提供了一種惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)，是以人基因組版本號grch38為基礎，8號染色體在第127798852位斷裂得到的上游序列與5號染色體在第173708142位斷裂后得到的下游序列重連形成；所述上游序列是包含核苷酸序列如seq?idno:1所示的dna序列；所述下游序列是包含核苷酸序列如seq?id?no:2所示的dna序列。本發(fā)明利用生物信息學技術(shù)對測序數(shù)據(jù)識別到一種新型的染色體易位，具體為8號染色體在第127798852位斷裂得到的上游序列與5號染色體在第173708142位斷裂后得到的下游序列，即惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)。本發(fā)明利用pcr擴增和sanger測序結(jié)果顯示，在重連點的上游序列與8號染色體序列完全匹配，重連點的下游序列與5號染色體序列完全匹配，證明上述染色體易位的發(fā)生。生物信息學分析表明，重連點發(fā)生在8號染色體的增強子附近與5號染色的cpeb4基因附近。因此，本發(fā)明為了驗證該惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)引起潛在的癌基因表達上調(diào)，利用實時熒光定量pcr檢測cpeb4基因表達水平，結(jié)果表明，與對照gm12878細胞和b淋巴細胞相比，多發(fā)性骨髓瘤患者細胞中cpeb4基因的mrna表達量顯著上調(diào)，這表明8號染色體的增強子易位提高了5號染色體中cpeb4基因的表達水平，而cpeb4基因上調(diào)表達常常發(fā)生在多發(fā)性骨髓瘤的冒煙型多發(fā)性骨髓瘤(smm)和意義未明的單克隆丙種球蛋白血癥(mgus)階段中。因此，所述惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)可以作為新型檢測靶點在多發(fā)性骨髓瘤分子分型中應用。

技術(shù)特征：

1.一種惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)，其特征在于，是以人基因組版本號grch38為基礎，8號染色體在第127798852位斷裂得到的上游序列與5號染色體在第173708142位斷裂得到的下游序列重連形成；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)，其特征在于，8號染色體上的上游序列還包含增強子的序列；

3.一種檢測權(quán)利要求1或2所述惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)的試劑，其特征在于，包括基于pcr擴增檢測用試劑和/或基于fish技術(shù)檢測用試劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述試劑，其特征在于，所述基于pcr擴增檢測用試劑包括擴增惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)的引物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑，其特征在于，所述擴增惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)的引物包括以下至少一對引物：t58-f1/t58-r1、t58-f3/t58-r3和t58-f4/t58-r4；

6.一種檢測權(quán)利要求1或2所述惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求3～5任意一項所述試劑和與所述試劑配套使用的檢測試劑。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述試劑盒，其特征在于，包括實時熒光定量pcr檢測cpeb4基因表達水平的引物。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述試劑盒，其特征在于，所述實時熒光定量pcr檢測cpeb4基因表達水平的引物的核苷酸序列如seq?id?no:11和seq?id?no:12所示。

9.權(quán)利要求1或2所述惡性血液腫瘤患者染色體易位t(5；8)作為檢測靶點在制備多發(fā)性骨髓瘤分子分型的試劑盒中的應用。

10.權(quán)利要求3～5中任意一項所述試劑在制備多發(fā)性骨髓瘤分子分型的試劑盒中的應用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種惡性血液腫瘤染色體易位t(5；8)的檢測試劑及其應用，屬于腫瘤診斷技術(shù)領域。本發(fā)明在多發(fā)性骨髓瘤患者中檢測到一種新型的增強子染色體易位，具體是8號染色體127798852位斷裂形成的上游序列與5號染色體173708142位斷裂形成的下游序列重連形成。本發(fā)明通過PCR和Saner測序驗證了染色體易位的發(fā)生，利用雙熒光素酶報告實驗驗證了增強子具有上調(diào)基因表達的功能，并利用qPCR技術(shù)驗證了多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位導致CPEB4基因的上調(diào)表達?？梢?，本發(fā)明為多發(fā)性骨髓瘤的分子分型提供了新的檢測靶點和檢測方式。

技術(shù)研發(fā)人員：孫露洋,陳河兵,王冀川,何林,鄭恩潤,李清華,劉揚,周建
受保護的技術(shù)使用者：北京大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2