本發(fā)明屬于分子生物，具體涉及一種多發(fā)性骨髓瘤染色體易位t(1；22)的檢測試劑及其應用。

背景技術：

1、染色體易位是惡性腫瘤重要的分子遺傳學改變之一，一方面染色體易位可以使原癌基因異常表達；另一方面，染色體易位后相鄰的基因融合并表達相關產物，可導致細胞生長和分化等生物學行為的改變，特異性的易位或易位基因產物可作為腫瘤特異性標志，有利于腫瘤的診斷。

2、在多發(fā)性骨髓瘤(mm)發(fā)病的分子遺傳學改變中以t(11；14)(q13；q32)最常見，該易位導致cyclin?d1基因表達上調，與cdk4或cdk6結合，導致rb蛋白磷酸化，促進細胞有g1期進入s期，促進細胞向惡性轉變，導致細胞黏附分子(cam)表達下降。在mm中，染色體易位通常涉及igh，igh中的增強子易位到某些癌基因上游，如t(6；14)(p21；q32)易位后使cyclin?d3表達上調，cyclin?d3在調節(jié)細胞分裂方面的作用和機制與cyclin?d1蛋白相同。染色體易位產生一些新的融合基因或上調某些蛋白的表達。這些融合基因或蛋白的表達不僅反映了惡性腫瘤的發(fā)病分子機制，而且對多發(fā)性骨髓瘤的診斷和分型具有重要的價值。

3、目前，隨著醫(yī)學水平的提高，越來越多的染色體易位類型被報道，不斷補充著惡性腫瘤染色體易位類型，為相關腫瘤分子分型的確定以及制定針對性腫瘤治療策略以及預后措施十分有幫助。因此，開發(fā)和豐富特異性染色體易位對多發(fā)性骨髓瘤的診斷和臨床治療意義重大。

技術實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種新型的多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)，不僅豐富了染色體易位類型，而且為多發(fā)性骨髓瘤患者的分子分型提供了可靠檢測靶點。

2、本發(fā)明提供了一種多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)，是在人的基因組版本grch38的基礎上，22號染色體在39280931位點斷裂得到的上游序列與1號染色體在178385884位點斷裂得到的下游序列重連形成；

3、所述上游序列是包含核苷酸序列如seq?id?no：1所示的dna序列；

4、所述下游序列是核苷酸序列如seq?id?no：2所示的dna序列。

5、優(yōu)選的，22號染色體上的上游序列還包含apobec3a基因啟動子的序列；1號染色體上的下游序列還包括增強子的序列；

6、所述增強子的核苷酸序列如seq?id?no：3所示；

7、所述apobec3a基因啟動子的核苷酸序列如seq?id?no：4所示。

8、本發(fā)明提供了一種檢測所述多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)的試劑，包括基于pcr擴增檢測用試劑和/或基于fish技術檢測用試劑。

9、優(yōu)選的，所述基于pcr擴增檢測用試劑包括擴增所述多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)的引物；

10、所述擴增多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)的引物包括t122-f1/t122-r1和/或t122-f2/t122-r2；

11、所述t122-f1的核苷酸序列如seq?id?no:5所示；

12、所述t122-r1的核苷酸序列如seq?id?no:6所示；

13、所述t122-f2的核苷酸序列如seq?id?no:7所示；

14、所述t122-r2的核苷酸序列如seq?id?no:8所示。

15、優(yōu)選的，所述基于fish技術檢測用試劑包括fish探針；

16、所述fish探針的核苷酸序列如seq?id?no:9～seq?id?no:30所示。

17、本發(fā)明提供了一種檢測所述多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)的試劑盒，包括所述試劑和與所述試劑配套使用的試劑。

18、優(yōu)選的，還包括qpcr檢測apobec3a基因表達量的試劑；

19、所述qpcr檢測apobec3a基因表達量的試劑為核苷酸序列如seq?id?no:31所示的正向引物和核苷酸序列如seq?id?no:32所示的反向引物。

20、本發(fā)明提供了所述多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)作為檢測靶點在制備檢測多發(fā)性骨髓瘤分子分型的試劑盒中的應用。

21、本發(fā)明提供了所述試劑在制備檢測多發(fā)性骨髓瘤分子分型的試劑盒中的應用。

22、本發(fā)明提供了一種多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)，是在人的基因組版本grch38的基礎上，22號染色體在39280931位點斷裂得到的上游序列與1號染色體在178385884位點斷裂得到的下游序列重連形成，所述上游序列是包含核苷酸序列如seq?idno：1所示的dna序列；所述下游序列是核苷酸序列如seq?id?no：2所示的dna序列。本發(fā)明分別利用生物信息學技術識別到一種新型的染色體易位，具體為22號染色體127798852位斷裂后與1號染色體第173708142位斷裂后的序列發(fā)生重連。本發(fā)明利用pcr擴增和sanger測序檢測染色體易位情況，結果顯示在重連點的上游序列與22號染色體序列完全匹配，重連點的下游序列與1號染色體序列完全匹配，證明上述染色體易位的發(fā)生。生物信息學分析表明，重連點發(fā)生在22號染色的apobec3a基因附近和1號染色體的增強子的附近，因此，本發(fā)明為了驗證染色體易位t(1；22)引起潛在癌基因上調表達，利用實時熒光定量pcr檢測潛在癌基因apobec3a的表達水平，結果表明，與對照gm12878細胞相比，多發(fā)性骨髓瘤患者細胞中apobec3a基因的表達量顯著上調，這表明1號染色體中的增強子易位提高了22號染色體中apobec3a基因的表達量，可能是引起多發(fā)性骨髓瘤發(fā)生的分子機制。因此，所多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)可以作為新型檢測靶點在多發(fā)性骨髓瘤分子分型中應用。

技術特征：

1.一種多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)，其特征在于，是在人的基因組版本grch38的基礎上，22號染色體在39280931位點斷裂得到的上游序列與1號染色體在178385884位點斷裂得到的下游序列重連形成；

2.根據(jù)權利要求1所述多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)，其特征在于，22號染色體上的上游序列還包含apobec3a基因啟動子的序列；1號染色體上的下游序列還包括增強子的序列；

3.一種檢測權利要求1或2所述多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)的試劑，其特征在于，包括基于pcr擴增檢測用試劑和/或基于fish技術檢測用試劑。

4.根據(jù)權利要求3所述試劑，其特征在于，所述基于pcr擴增檢測用試劑包括擴增多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)的引物。

5.根據(jù)權利要求4所述試劑，其特征在于，所述擴增多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)的引物包括t122-f1/t122-r1和/或t122-f2/t122-r2；

6.根據(jù)權利要求4所述試劑，其特征在于，所述基于fish技術檢測用試劑包括fish探針；

7.一種檢測權利要求1～3中任意一項所述多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)的試劑盒，其特征在于，包括權利要求4～6中任意一項所述試劑和與所述試劑配套使用的試劑。

8.根據(jù)權利要求7所述試劑盒，其特征在于，還包括qpcr檢測apobec3a基因表達量的試劑；

9.權利要求1～3中任意一項所述多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)作為檢測靶點在制備檢測多發(fā)性骨髓瘤分子分型的試劑盒中的應用。

10.權利要求4～6中任意一項所述試劑在制備檢測多發(fā)性骨髓瘤分子分型的試劑盒中的應用。

技術總結
本發(fā)明提供了一種多發(fā)性骨髓瘤染色體易位t(1；22)的檢測試劑及其應用，屬于疾病診斷技術領域。本發(fā)明利用生物信息學技術識別得到一種新型的染色體易位，具體為22號染色體在39280931位點斷裂形成的上游序列與1號染色體在178385884位點斷裂形成的下游序列重連。1號染色體的增強子易位到22號染色的APOBEC3A基因附近引起APOBEC3A潛在癌基因上調表達。因此，所述多發(fā)性骨髓瘤患者染色體易位t(1；22)可以作為新型檢測靶點在多發(fā)性骨髓瘤分子分型中應用，可用于疾病診斷和預后評估。

技術研發(fā)人員：孫露洋,陳河兵,路瑾,李清華,鄭恩潤,尚永豐,竇雪琳,曹藝平
受保護的技術使用者：北京大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6