本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測(cè)，尤其涉及一種與牦牛免疫球蛋白m相關(guān)的snp分子標(biāo)記的克隆及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、牦牛是高原地區(qū)重要的家畜之一，也是高原牧區(qū)牧民重要的生產(chǎn)資源。牦牛具有獨(dú)特的生物學(xué)特性，包括抗病能力強(qiáng)、肉質(zhì)好、毛皮優(yōu)良等特點(diǎn)，但疾病對(duì)牦牛健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，并導(dǎo)致了顯著的經(jīng)濟(jì)損失。盡管通過(guò)改進(jìn)飼養(yǎng)管理和使用藥物、疫苗等措施可以預(yù)防部分疾病，但這些措施并未能有效控制傳染病的傳播。與此同時(shí)，廣泛使用藥物可能導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生，進(jìn)而影響畜產(chǎn)品的安全性。牦牛育種中抗病能力的提升，是從根本上解決這些問(wèn)題的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

2、免疫球蛋白是一組具有抗體活性的蛋白質(zhì)，主要存在于血漿中，也見(jiàn)于其他體液、組織和一些分泌液中。免疫球蛋白分為五類(lèi)，即免疫球蛋白g(igg)、免疫球蛋白a(iga)、免疫球蛋白m(igm)、免疫球蛋白d(igd)和免疫球蛋白e(ige)。其中，igm是五類(lèi)免疫球蛋白中分子量最大的一種。其分子量為9×105道爾頓，故又稱(chēng)為巨球蛋白。igm的升高常見(jiàn)于巨球蛋白血癥、細(xì)菌和寄生蟲(chóng)傳染病、肝臟疾病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及膽囊纖維癥等。igm的減少常見(jiàn)于原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥，非iga和igg型多發(fā)性骨髓瘤，霍奇金病，慢性淋巴細(xì)胞白血病，蛋白喪失性胃腸病等。

3、igm也是初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體，是機(jī)體抗感染的“先頭部隊(duì)”；血清中檢出igm提示新近發(fā)生感染，可用于感染的早期診斷。膜表面igm是b細(xì)胞抗原受體的主要成分。只表達(dá)migm是未成熟b細(xì)胞的標(biāo)志。所以，igm可以作為一種免疫指標(biāo)來(lái)評(píng)估牦牛的抗病能力和健康狀況。通過(guò)監(jiān)測(cè)免疫指標(biāo)igm的變化，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)牦牛的免疫問(wèn)題，并采取相應(yīng)的措施來(lái)提高牦牛抗病能力，預(yù)防和治療疾病。

4、隨著dna分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，研究牦牛抗病能力的遺傳基礎(chǔ)成為可能，篩選出與牦?？共∠嚓P(guān)的分子標(biāo)記將有助于抗病育種的推進(jìn)。當(dāng)前，抗病育種不僅可以提高牦牛對(duì)病原體的抵抗力，還能減少藥物的使用，保障畜產(chǎn)品的安全性。通過(guò)在分子層面上對(duì)抗病相關(guān)基因進(jìn)行選擇，并在早期對(duì)牦牛個(gè)體進(jìn)行精準(zhǔn)篩選，將極大提升牦?？共∮N的效率，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和研究應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供與牦牛免疫性狀相關(guān)的snp分子標(biāo)記及其應(yīng)用。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種與牦牛免疫球蛋白m相關(guān)的snp分子標(biāo)記，所述snp分子標(biāo)記位于牦牛參考基因組lu_bosgru_v3.0版本第28號(hào)染色體上第35789017個(gè)堿基處，突變堿基為c或t。

4、作為優(yōu)選，突變堿基為c的牦牛的基因型為cc或ct；突變堿基為t的牦牛的基因型為tt；基因型為cc的牦牛個(gè)體中免疫球蛋白m含量高于基因型為tt或ct的牦牛個(gè)體中免疫球蛋白m的含量。

5、本發(fā)明還提供了所述的snp分子標(biāo)記在制備檢測(cè)牦牛免疫力的產(chǎn)品或牦牛輔助育種的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

6、本發(fā)明還提供了擴(kuò)增所述的snp分子標(biāo)記的引物對(duì)，所述引物對(duì)的序列如seq?idno:1～2所示。

7、本發(fā)明還提供了所述的引物對(duì)在制備檢測(cè)牦牛免疫力的產(chǎn)品或牦牛輔助育種的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

8、本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)牦牛免疫力的試劑盒，包括檢測(cè)所述的snp分子標(biāo)記的試劑或所述的引物對(duì)。

9、本發(fā)明還提供了一種牦牛輔助育種的試劑盒，包含檢測(cè)所述的snp分子標(biāo)記的試劑或所述的引物對(duì)。

10、本發(fā)明還提供了一種非診斷目的的牦牛免疫性狀標(biāo)記輔助選擇的方法，包括如下步驟：

11、(1)提取牦?；蚪Mdna；

12、(2)以步驟(1)得到的牦牛基因組dna為模板，利用所述的引物對(duì)進(jìn)行擴(kuò)增，得到擴(kuò)增產(chǎn)物；

13、(3)對(duì)所述的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行基因型分析，得到不同基因型的牦牛；將牦牛的基因型與免疫指標(biāo)關(guān)聯(lián)；所述免疫指標(biāo)包括免疫球蛋白m。

14、作為優(yōu)選，步驟(2)所述的擴(kuò)增體系共25μl，包括：2×l-exp?taq?master?mix12.5μl、rnase?free?water8.5μl、上游引物1μl、下游引物1μl、模板2μl；

15、作為優(yōu)選，步驟(2)所述的擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃1min，98℃10s，58℃30s，72℃1min，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸2min。

16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：

17、本發(fā)明提供了一種與牦牛免疫球蛋白m相關(guān)的snp分子標(biāo)記的克隆及應(yīng)用，通過(guò)本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，與牦牛免疫相關(guān)的snp位點(diǎn)位于牦牛參考基因組lu_bosgru_v3.0版本第28號(hào)染色體上第35789017個(gè)堿基處，變異類(lèi)型為c/t，存在3個(gè)基因型，當(dāng)?shù)?8號(hào)染色體上第35789017個(gè)堿基為c時(shí)，基因型為cc或ct：當(dāng)28號(hào)染色體上第35789017個(gè)堿基為t時(shí)，基因型為tt；通過(guò)不同基因型與免疫球蛋白m含量的關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)cc基因型的牦牛個(gè)體的免疫球蛋白m顯著高于tt和ct基因型個(gè)體(p<0.05)，tt和ct基因型個(gè)體間免疫球蛋白并未表現(xiàn)出顯著差異(p>0.05)。

18、本發(fā)明通過(guò)檢測(cè)牦牛第28號(hào)染色體上第35789017個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基，能夠判斷牦牛個(gè)體的免疫球蛋白m含量，本發(fā)明為用于非診斷目的的牦牛免疫性狀標(biāo)記輔助選擇提供了新的snp分子標(biāo)記資源，為高免疫力的牦牛育種提供依據(jù)。

技術(shù)特征：

1.一種與牦牛免疫球蛋白m相關(guān)的snp分子標(biāo)記，其特征在于，所述snp分子標(biāo)記位于牦牛參考基因組lu_bosgru_v3.0版本第28號(hào)染色體上第35789017個(gè)堿基處，突變堿基為c或t。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的snp分子標(biāo)記，其特征在于，突變堿基為c的牦?；蛐蜑閏c或ct；突變堿基為t的牦?；蛐蜑閠t；基因型為cc的牦牛個(gè)體中免疫球蛋白m含量高于基因型為tt或ct的牦牛個(gè)體中免疫球蛋白m的含量。

3.權(quán)利要求1或2所述的snp分子標(biāo)記在制備檢測(cè)牦牛免疫力的產(chǎn)品或牦牛輔助育種的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

4.擴(kuò)增權(quán)利要求1或2所述的snp分子標(biāo)記的引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)的序列如seq?id?no:1～2所示。

5.權(quán)利要求4所述的引物對(duì)在制備檢測(cè)牦牛免疫力的產(chǎn)品或牦牛輔助育種的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

6.一種檢測(cè)牦牛免疫力的試劑盒，其特征在于，包括檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述的snp分子標(biāo)記的試劑或權(quán)利要求4所述的引物對(duì)。

7.一種牦牛輔助育種的試劑盒，其特征在于，包含檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述的snp分子標(biāo)記的試劑或權(quán)利要求4所述的引物對(duì)。

8.一種非診斷目的的牦牛免疫性狀標(biāo)記輔助選擇的方法，其特征在于，包括如下步驟：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述的擴(kuò)增體系共25μl，包括：2×l-exp?taq?mastermix12.5μl、rnase?free?water8.5μl、上游引物1μl、下游引物1μl、模板2μl。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述的擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃1min，98℃10s，58℃30s，72℃1min，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸2min。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種與牦牛免疫性狀相關(guān)的SNP分子標(biāo)記的克隆及其應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)篩選得出與牦牛免疫性狀相關(guān)的SNP分子標(biāo)記位于牦牛參考基因組LU_Bosgru_v3.0第28號(hào)染色體上第35789017個(gè)堿基處，突變堿基為C或T，該分子標(biāo)記能夠判斷牦牛個(gè)體的免疫球蛋白M含量，本發(fā)明為用于非診斷目的的牦牛免疫性狀標(biāo)記輔助選擇提供了新的SNP分子標(biāo)記資源，為高免疫力的牦牛育種提供依據(jù)。

技術(shù)研發(fā)人員：梁春年,余道寧,馬曉明,扎西塔,喇永富,吳曉云,閻萍,褚敏,郭憲,包鵬甲,楊焱,秦玉峰,葛倩蕓,裴杰,熊琳
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2