本發(fā)明屬于生物，具體涉及蛋白質(zhì)dcft1在抑制植物開花和生長中的應用。

背景技術(shù)：

1、胡蘿卜（daucus?carota?var.?sativa?hoffm.）為綠體春化長日照作物，在營養(yǎng)生長期并有一定大小時，在春夏季遇到一定時期的低溫而先期通過春化，從而引起抽薹甚至開花，這種現(xiàn)象稱為未熟抽薹。胡蘿卜未熟抽薹后，肉質(zhì)根迅速變硬，失去食用價值，給廣大種植戶帶來很大的經(jīng)濟損失。挖掘胡蘿卜開花調(diào)控相關(guān)基因，對于快速有效解決胡蘿卜未熟抽薹問題具有重要意義。

2、ft與tfl同屬于pebps（phosphatidyl?ethanolamine-binding?proteins）。pebp家族蛋白在細菌、動物和植物中廣泛存在，主要在生長和分化途徑中的信號傳導途徑中發(fā)揮作用。被子植物中，ft/tfl在蛋白序列和功能上都很保守，例如擬南芥atft的同源蛋白蘋果mdft1、mdft2、楊樹pnft1、pnft2、豌豆psfta1、psfta2促進花芽分化，而attfl1的同源蛋白蘋果mdtfl1、豌豆pstfl1a、pstfl1c延遲花芽的分化。ft同源基因在進化過程中，部分基因進化得到了抑制花器官分化的功能。例如野生向日葵基因組只有一個促進花芽分化的haft1基因，而栽培向日葵基因組中含有四個ft基因，其中一個ft1等位基因為haft1基因的移碼突變體，功能是抑制花芽分化。甜菜基因組含有兩個ft同源基因，兩者在誘導開花的過程中功能是相反的。bvft1抑制花芽分化，bvft2促進花芽的分化。截止目前，胡蘿卜中dcft1基因的具體功能并不清楚。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是抑制植物開花或使植物的開花時間推遲。

2、本發(fā)明首先保護蛋白質(zhì)dcft1的應用，可為s1）或s2）或s3）或s4）：

3、s1）抑制植物開花；

4、s2）培育開花時間推遲的轉(zhuǎn)基因植物；

5、s3）抑制植物生長；

6、s4）培育生長受到抑制的轉(zhuǎn)基因植物。

7、本發(fā)明還保護編碼蛋白質(zhì)dcft1的核酸分子的應用，可為s1）或s2）或s3）或s4）：

8、s1）抑制植物開花；

9、s2）培育開花時間推遲的轉(zhuǎn)基因植物；

10、s3）抑制植物生長；

11、s4）培育生長受到抑制的轉(zhuǎn)基因植物。

12、上述任一所述的應用中，所述抑制植物開花可表現(xiàn)為植物開花時間推遲。

13、上述任一所述的應用中，所述抑制植物生長可表現(xiàn)為植物的株高降低和/或葉片面積減小。

14、上述任一所述的應用中，所述生長可為株高和/或葉片。

15、上述任一所述的應用中，所述植物可為如下c1）至c8）中的任一種：c1）雙子葉植物；c2）單子葉植物；c3）茄科植物；c4）煙草；c5）本氏煙草；c6）十字花科植物；c7）擬南芥；c8）野生型擬南芥columbia-0亞型。

16、本發(fā)明還保護一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，可包括如下步驟：提高出發(fā)植物中蛋白質(zhì)dcft1的表達量和/或活性，得到轉(zhuǎn)基因植物；與出發(fā)植物相比，轉(zhuǎn)基因植物的開花時間推遲和/或生長受到抑制。

17、上述方法中，所述提高出發(fā)植物中蛋白質(zhì)dcft1的表達量和/或活性可通過轉(zhuǎn)基因、多拷貝、改變啟動子、調(diào)控因子等本領(lǐng)域熟知的方法，達到提高出發(fā)植物中蛋白質(zhì)dcft1的表達量和/或活性的效果。

18、上述方法中，所述提高出發(fā)植物中蛋白質(zhì)dcft1的表達量和/或活性通過向出發(fā)植物中導入編碼蛋白質(zhì)dcft1的核酸分子實現(xiàn)。

19、上述方法中，所述向出發(fā)植物中導入編碼蛋白質(zhì)dcft1的核酸分子可通過向出發(fā)植物中導入重組載體實現(xiàn)；所述重組載體可為向表達載體插入編碼蛋白質(zhì)dcft1的核酸分子，得到的重組質(zhì)粒。所述表達載體具體可為超表達載體sup1300。

20、上述方法中，所述重組載體具體可為重組質(zhì)粒sup1300-dcft1。所述重組質(zhì)粒sup1300-dcft1具體可為將超表達載體sup1300的限制性內(nèi)切酶hindⅲ和kpni的識別序列之間的dna小片段替換為seq?id?no：1自5’末端起第1至531位所示的dna分子，得到的重組質(zhì)粒。

21、所述轉(zhuǎn)基因植物具體可為實施例2提及的 oedcft1-2或 oedcft1-4；此時出發(fā)植物為野生型擬南芥（ arabidopsis?thaliana）（columbia-0亞型）。

22、所述轉(zhuǎn)基因植物具體可為實施例3提及的 oedcft1-1、 oedcft1-2和 oedcft1-4；此時出發(fā)植物為本氏煙草。

23、本發(fā)明還保護植物育種方法，可包括如下步驟：增加植物中蛋白質(zhì)dcft1的含量和/或活性，從而推遲開花時間和/或抑制生長。

24、上述任一所述的方法中，所述生長可為株高和/或葉片。

25、上述任一所述的方法中，所述抑制生長可表現(xiàn)為株高降低和/或葉片面積減小。

26、上述任一所述蛋白質(zhì)dcft1可為a1）或a2）或a3）：

27、a1）氨基酸序列是seq?id?no：2所示的蛋白質(zhì)；

28、a2）在a1）所示的蛋白質(zhì)的n端或/和c端連接標簽得到的融合蛋白質(zhì)；

29、a3）將a1）或a2）所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與植物開花和/或生長相關(guān)的蛋白質(zhì)。

30、所述a2）中，標簽可為poly-arg標簽（rrrrr）、flag標簽（dykddddk）、strep-tag標簽（wshpqfek）或c-myc標簽（eqkliseedl）。

31、所述a3）中，所述一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。

32、所述a3）中的蛋白質(zhì)dcft1可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進行生物表達得到。

33、所述a3）中的蛋白質(zhì)dcft1可通過將seq?id?no:1所示的dna序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5′端和/或3′端連上上述任一所述的標簽的編碼序列得到。

34、其中，seq?id?no：2由177個氨基酸殘基組成。

35、上述任一所述編碼蛋白質(zhì)dcft1的核酸分子可為如下b1）或b2）或b3）或b4）所示的dna分子：

36、b1）編碼區(qū)是seq?id?no：1所示的dna分子；

37、b2）核苷酸序列是seq?id?no：1所示的dna分子；

38、b3）與b1）或b2）限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性，且編碼蛋白質(zhì)dcft1的dna分子；

39、b4）在嚴格條件下與b1）或b2）限定的核苷酸序列雜交，且編碼蛋白質(zhì)dcft1的dna分子。

40、其中，所述核酸分子可以是dna，如cdna、基因組dna或重組dna；所述核酸分子也可以是rna，如mrna或hnrna等。

41、其中，seq?id?no：1由534個核苷酸組成，seq?id?no：1所示的dna分子編碼seq?idno：2所示的氨基酸序列。

42、本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以很容易地采用已知的方法，例如定向進化和點突變的方法，對本發(fā)明的編碼所述蛋白質(zhì)dcft1的核苷酸序列進行突變。那些經(jīng)過人工修飾的，具有與本發(fā)明分離得到的編碼所述蛋白質(zhì)dcft1的核苷酸序列75%或者更高同一性的核苷酸，只要編碼所述蛋白質(zhì)dcft1，均是衍生于本發(fā)明的核苷酸序列并且等同于本發(fā)明的序列。

43、這里使用的術(shù)語“同一性”指與天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括與本發(fā)明的編碼氨基酸序列如seq?id?no:2所示的蛋白質(zhì)dcft1的核苷酸序列具有75%或更高，或80%或更高，或85%或更高，或90%或更高，或95%或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或計算機軟件進行評價。使用計算機軟件，兩個或多個序列之間的同一性可以用百分比（%）表示，其可以用來評價相關(guān)序列之間的同一性。

44、上述任一所述植物可為如下c1）至c8）中的任一種：c1）雙子葉植物；c2）單子葉植物；c3）茄科植物；c4）煙草；c5）本氏煙草；c6）十字花科植物；c7）擬南芥；c8）野生型擬南芥columbia-0亞型。

45、實驗證明，在野生型擬南芥中過表達 dcft1基因可以抑制開花和生長，抑制開花表現(xiàn)為開花時間推遲和開花時的蓮座葉片數(shù)量增加，抑制生長表現(xiàn)為株高降低；在本氏煙草中過表達 dcft1基因可以抑制開花和生長，抑制開花表現(xiàn)為開花時間推遲，抑制生長表現(xiàn)為株高降低和葉片面積減小。由此可見，蛋白質(zhì)dcft1可以調(diào)控植物開花和生長。本發(fā)明具有重要的應用價值。