本申請屬于生物，具體涉及一種抗兔igg的山羊重組單克隆抗體及其制備與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、人和動物發(fā)生疾病時需要依賴自身免疫應(yīng)答反應(yīng)，特異性免疫發(fā)揮了重要作用，特異性免疫中體液免疫占據(jù)了一定地位，體液免疫主要依靠各種免疫球蛋白，其中igg約占75％～80％，是二次免疫應(yīng)答的主要抗體，也是血清學(xué)診斷和疫苗免疫后檢測的主要靶抗體。

2、兔源抗體以其高親和力、特異性和多樣性而聞名，此外兔子和大小鼠在進(jìn)化上有差異，因此兔源抗體能夠識別在小鼠中不具免疫原性的人類抗原表位，增加可靶向表位總數(shù)，有助于產(chǎn)生與人類抗原交叉反應(yīng)抗體。抗兔igg抗體在免疫學(xué)中作為二抗使用，用于檢測兔源一抗，他可以與標(biāo)記物結(jié)合，幫助檢測和定量兔源抗體與特定抗原的結(jié)合情況。因此，制備高靈敏度和準(zhǔn)確性的抗兔igg抗體對于科學(xué)研究、診斷檢測和治療應(yīng)用具有顯著意義。

3、羊源抗體作為二抗具有獨(dú)特優(yōu)勢，羊有5種免疫球蛋白同種型，由5個重鏈類(igm,igg,iga,igd和ige)組成，igg類進(jìn)一步細(xì)分為3個亞型(igg1,igg2，igg3)。與其他物種一樣，重鏈與2條輕鏈(lambda和kappa)結(jié)合在一起。igg-λ占綿羊中igg的95％。羊抗體的親和力通常比嚙齒動物抗體高10到100倍；其次，羊單克隆抗體僅結(jié)合一個特定區(qū)域，并目能夠精確區(qū)分密切相關(guān)的分子(例如衍生物)，可能產(chǎn)生針對所需靶標(biāo)的高度特導(dǎo)性抗體；除此之外，羊具有獨(dú)特的免疫系統(tǒng)，羊抗體能識別其他抗體技術(shù)失敗的“困難”靶標(biāo)，并且天然羊抗體可識別多種異源表位。

4、在當(dāng)前的技術(shù)領(lǐng)域中，genetex提供的山羊抗兔igg抗體(dylight488)為多克隆抗體，特異性較低；碧云天提供的生物素標(biāo)記山羊抗兔igg(h+l)，其制備是利用兔igg免疫山羊，然后用親和純化柱對獲得的抗血清進(jìn)行純化，并經(jīng)過人igg、小鼠igg和大鼠igg吸附純化后獲得，仍非單克隆抗體，因此其特異性仍有提升空間。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、1.發(fā)明目的

2、本申請目的是提供一種抗兔igg的山羊重組單克隆抗體及其制備與應(yīng)用，通過單b細(xì)胞pcr技術(shù)成功制備了一種新的抗兔igg的山羊重組單克隆抗體，該重組單克隆抗體能夠特異性識別組織內(nèi)兔igg蛋白，可單獨(dú)或利用辣根過氧化物酶(hrp)進(jìn)行標(biāo)記后應(yīng)用于免疫組織化學(xué)、(間接/直接)elisa、蛋白質(zhì)免疫印跡等方式檢測兔igg蛋白中，該重組單克隆抗體與兔igg的結(jié)合親和力更高，使得檢測兔igg的能力得到顯著提升，為精準(zhǔn)的兔源抗體檢測提供了更為可靠的工具。

3、2.技術(shù)方案

4、為了達(dá)到上述目的，本申請所采用的技術(shù)方案如下：

5、本申請?zhí)峁┝艘环N抗兔igg的山羊重組單克隆抗體，該重組單克隆抗體能特異性的與兔igg蛋白結(jié)合，其重鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.1所示，輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

6、進(jìn)一步地，上述一種抗兔igg的山羊重組單克隆抗體，其重鏈恒定區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.5所示，輕鏈恒定區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.6所示。

7、本申請還提供了一種核酸，該核酸編碼上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)。

8、進(jìn)一步地，上述核酸還編碼上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的重鏈恒定區(qū)和/或輕鏈恒定區(qū)。

9、進(jìn)一步地，上述編碼抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的核苷酸序列包括：

10、如seq?id?no.3所示的核苷酸序列，用于編碼上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的seq?id?no.1所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；

11、如seq?id?no.4所示的核苷酸序列，用于編碼上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的seq?id?no.2所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。

12、進(jìn)一步地，上述核酸還包括：

13、如seq?id?no.7所示的核苷酸序列，用于編碼上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的seq?id?no.5所示的氨基酸序列的重鏈恒定區(qū)；

14、如seq?id?no.8所示的核苷酸序列，用于編碼上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的seq?id?no.6所示的氨基酸序列的輕鏈恒定區(qū)。

15、本申請還提供了一種重組表達(dá)載體，該重組表達(dá)載體含有上述編碼抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的核酸，可以表達(dá)抗兔igg的山羊重組單克隆抗體。

16、進(jìn)一步地，上述重組表達(dá)載體包括：含有上述編碼抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的核酸的pcdna3.4質(zhì)粒。

17、本申請還提供了一種重組表達(dá)細(xì)胞，該細(xì)胞包括：上述重組表達(dá)載體，或上述編碼抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的核酸，可以用于表達(dá)抗兔igg的山羊重組單克隆抗體。

18、進(jìn)一步地，上述重組表達(dá)細(xì)胞包括：293f細(xì)胞系。

19、本申請還提供了上述核酸、重組表達(dá)載體、重組表達(dá)細(xì)胞在制備抗兔igg的山羊重組單克隆抗體中的應(yīng)用。

20、本申請還提供了一種上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的制備方法，包括：采用上述重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到細(xì)胞獲得重組表達(dá)細(xì)胞；培養(yǎng)轉(zhuǎn)染后的重組表達(dá)細(xì)胞；收集上清液并純化，得到抗兔igg的山羊重組單克隆抗體。

21、本申請還提供了一種上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的制備方法，包括：培養(yǎng)重組表達(dá)細(xì)胞；收集上清液并純化，得到抗兔igg的山羊重組單克隆抗體。

22、本申請還提供了一種hrp標(biāo)記的上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體。

23、本申請還提供了上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體、核酸、重組表達(dá)載體、重組表達(dá)細(xì)胞、抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的制備方法或hrp標(biāo)記的上述抗兔igg的山羊重組單克隆抗體在檢測兔igg，或制備檢測兔igg產(chǎn)品中的應(yīng)用。

24、進(jìn)一步地，上述檢測兔igg包括免疫組織化學(xué)、elisa、蛋白質(zhì)免疫印跡等檢測方法中任意一種或多種。

25、3.有益效果

26、本申請與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果在于：

27、本申請?zhí)峁┑囊环N抗兔igg的山羊重組單克隆抗體及其制備與應(yīng)用，通過與市售抗體進(jìn)行比較，均表明本申請?zhí)峁┑目雇胕gg的山羊重組單克隆抗體與兔igg蛋白分子的結(jié)合具有高特異性和高靈敏度，能夠特異性地識別和檢測兔igg蛋白，在檢測兔igg蛋白時呈陽性高表達(dá)，因此該重組單克隆抗體可應(yīng)用于免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)免疫印跡和間接elisa等實(shí)驗(yàn)中。

技術(shù)特征：

1.一種抗兔igg的山羊重組單克隆抗體，其特征在于，所述重組單克隆抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.1所示，輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗兔igg的山羊重組單克隆抗體，其特征在于，所述重組單克隆抗體的重鏈恒定區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.5所示，輕鏈恒定區(qū)氨基酸序列如seqid?no.6所示。

3.一種核酸，其特征在于，所述核酸編碼權(quán)利要求1或2所述的抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種核酸，其特征在于，所述核酸包括：

5.一種重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體含有權(quán)利要求3或4所述的核酸。

6.一種重組表達(dá)細(xì)胞，其特征在于，所述重組表達(dá)細(xì)胞包括權(quán)利要求5所述的重組表達(dá)載體，或權(quán)利要求3或4所述的核酸。

7.權(quán)利要求3或4所述的核酸、或權(quán)利要求5所述的重組表達(dá)載體、或權(quán)利要求6所述的重組表達(dá)細(xì)胞在制備抗兔igg的山羊重組單克隆抗體中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求1所述的抗兔igg的山羊重組單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述方法包括：

9.一種hrp標(biāo)記的抗兔igg的山羊重組單克隆抗體，其特征在于，所述重組單克隆抗體為權(quán)利要求1或2所述的抗兔igg的山羊重組單克隆抗體。

10.權(quán)利要求1或2或9所述的重組單克隆抗體、或權(quán)利要求3或4所述的核酸、或權(quán)利要求5所述的重組表達(dá)載體、或權(quán)利要求6所述的重組表達(dá)細(xì)胞、或權(quán)利要求8所述的制備方法在檢測兔igg，或制備檢測兔igg產(chǎn)品中的應(yīng)用。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測兔igg包括免疫組織化學(xué)法、蛋白免疫印跡法或elisa法中任意一種或多種。

技術(shù)總結(jié)
本申請公開了一種抗兔IgG的山羊重組單克隆抗體及其制備與應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。該重組單克隆抗體是以純化兔血清IgG作為免疫原，免疫山羊，經(jīng)過特異性B細(xì)胞篩選和RT?PCR獲得抗體的重鏈可變區(qū)及輕鏈可變區(qū)，將可變區(qū)序列分別插入帶有恒定區(qū)(重鏈、輕鏈)基因的載體質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染表達(dá)后純化獲得重組單克隆抗體。本申請?zhí)峁┑闹亟M單克隆抗體，與兔IgG具有高親和力，可高特異性和高靈敏度地識別和檢測兔IgG，經(jīng)過HRP交聯(lián)后可作為二抗，應(yīng)用于蛋白質(zhì)免疫印跡、免疫組織化學(xué)和ELISA等方法檢測兔IgG，有利于獲得更準(zhǔn)確的檢測和評估結(jié)果，并降低檢測成本和背景信號的干擾。

技術(shù)研發(fā)人員：應(yīng)煜,霍娜,魏力,章紅芳
受保護(hù)的技術(shù)使用者：杭州斯達(dá)特生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2