本發(fā)明涉及雜交瘤細(xì)胞株，特別是涉及分泌抗a型塞內(nèi)卡病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、a型塞內(nèi)卡病毒(sva)，也稱為塞內(nèi)卡谷病毒(svv)，是一種以豬為主要天然宿主的病毒。sva感染導(dǎo)致的水皰病與口蹄疫、豬水皰病、水皰性口炎或水皰疹的臨床癥狀無法區(qū)分。感染sva的豬的臨床癥狀包括充滿液體和破裂的囊泡、鼻子和冠狀動(dòng)脈帶上的潰瘍性病變、跛行、厭食、嗜睡、皮膚充血和發(fā)燒等。在感染sva母豬的豬群中，sva感染也與新生仔豬死亡(流行性短暫性新生兒損失(etnls))相關(guān)。無論疾病的臨床表現(xiàn)如何，sva感染都會(huì)在母豬和育肥豬中產(chǎn)生快速的中和抗體(na)反應(yīng)。由于缺乏可用的商業(yè)疫苗，并且sva未包含在oie陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典中，意味著不同國家豬感染sva的發(fā)病率不斷增加。為了應(yīng)對這種威脅，各級(jí)畜牧管理部門應(yīng)當(dāng)注意監(jiān)測sva的流行情況，保持警惕，并研究有效的控制措施。sva的診斷可以通過檢測病毒、病毒抗原或病毒rna來進(jìn)行。

2、但是，上述檢測方法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)，且需要專門的儀器設(shè)備和技術(shù)人員，均不適用于現(xiàn)場檢測和基層獸醫(yī)診斷部門臨床檢測。因此，研制出快捷、準(zhǔn)確、簡便的檢測方法，用于sva抗原的檢測，有利于準(zhǔn)確區(qū)分感染或疫苗接種動(dòng)物，及時(shí)淘汰感染的種畜，達(dá)到種群凈化目的，有利于動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供分泌抗a型塞內(nèi)卡病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，雜交瘤細(xì)胞株1e5分泌的單克隆抗體能與vp2蛋白及a型塞內(nèi)卡病毒發(fā)生特異性反應(yīng)，可將該單克隆抗體應(yīng)用于sva免疫檢測產(chǎn)品的研制中，為快速現(xiàn)場檢測sva病毒提供一種免疫檢測抗體原料。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

3、本發(fā)明提供一株分泌抗a型塞內(nèi)卡病毒vp2蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株sva1e5，所述雜交瘤細(xì)胞株sva?1e5（hybridoma?cell?line?sva?1e5）的保藏編號(hào)為cctcc?no：c2024263，保藏日期為2024年09月24號(hào)，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)。

4、本發(fā)明還提供一種抗a型塞內(nèi)卡病毒vp2蛋白的單克隆抗體，所述單克隆抗體是由所述的雜交瘤細(xì)胞株sva?1e5分泌產(chǎn)生。

5、進(jìn)一步地，所述單克隆抗體與a型塞內(nèi)卡病毒的vp2蛋白抗原特異性結(jié)合。

6、本發(fā)明還提供所述的單克隆抗體的制備方法，包括利用所述的雜交瘤細(xì)胞株sva1e5分泌產(chǎn)生所述單克隆抗體的步驟。

7、本發(fā)明還提供所述的雜交瘤細(xì)胞株或所述的單克隆抗體在制備檢測a型塞內(nèi)卡病毒的試劑或者試劑盒中的應(yīng)用。

8、進(jìn)一步地，包括利用所述的單克隆抗體以膠體金免疫層析法檢測a型塞內(nèi)卡病毒。

9、本發(fā)明還提供所述的雜交瘤細(xì)胞株或所述的單克隆抗體在制備抗a型塞內(nèi)卡病毒的抗體或疫苗中的應(yīng)用。

10、本發(fā)明還提供一種檢測a型塞內(nèi)卡病毒的試劑或者試劑盒，包括所述的單克隆抗體。

11、本發(fā)明還提供一種抗a型塞內(nèi)卡病毒的抗體或疫苗，包括所述的單克隆抗體。

12、本發(fā)明公開了以下技術(shù)效果：

13、本發(fā)明利用分子生物學(xué)技術(shù)，采用大腸桿菌原核表達(dá)體系，成功表達(dá)和純化了一種重組sva?vp2蛋白。

14、本發(fā)明使用重組sva?vp2蛋白免疫小鼠，經(jīng)過細(xì)胞融合及克隆篩選，獲得分泌抗sva?vp2蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株1e5，雜交瘤細(xì)胞株1e5分泌的單克隆抗體效價(jià)可達(dá)1:6553600倍稀釋，能與vp2蛋白及a型塞內(nèi)卡病毒發(fā)生特異性反應(yīng)，可將該單克隆抗體應(yīng)用于sva免疫檢測產(chǎn)品的研制中，比如，可用于膠體金平臺(tái)檢測vp2蛋白，為快速現(xiàn)場檢測sva病毒提供一種免疫檢測抗體原料。

技術(shù)特征：

1.一株分泌抗a型塞內(nèi)卡病毒vp2蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株sva?1e5，其特征在于，所述雜交瘤細(xì)胞株sva?1e5的保藏編號(hào)為cctcc?no：c2024263。

2.一種抗a型塞內(nèi)卡病毒vp2蛋白的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體是由權(quán)利要求1所述的雜交瘤細(xì)胞株sva?1e5分泌產(chǎn)生。

3.如權(quán)利要求2所述的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體與a型塞內(nèi)卡病毒的vp2蛋白抗原特異性結(jié)合。

4.如權(quán)利要求2或3所述的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括利用權(quán)利要求1所述的雜交瘤細(xì)胞株sva?1e5分泌產(chǎn)生所述單克隆抗體的步驟。

5.如權(quán)利要求1所述的雜交瘤細(xì)胞株或權(quán)利要求2-3任一項(xiàng)所述的單克隆抗體在制備檢測a型塞內(nèi)卡病毒的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，包括利用所述的單克隆抗體以膠體金免疫層析法檢測a型塞內(nèi)卡病毒。

7.如權(quán)利要求1所述的雜交瘤細(xì)胞株或權(quán)利要求2-3任一項(xiàng)所述的單克隆抗體在制備抗a型塞內(nèi)卡病毒的抗體或疫苗中的應(yīng)用。

8.一種檢測a型塞內(nèi)卡病毒的試劑或試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求2或3所述的單克隆抗體。

9.一種抗a型塞內(nèi)卡病毒的抗體或疫苗，其特征在于，包括權(quán)利要求2或3所述的單克隆抗體。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了分泌抗A型塞內(nèi)卡病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用，屬于雜交瘤細(xì)胞株技術(shù)領(lǐng)域。所述雜交瘤細(xì)胞株SVA?1E5的保藏編號(hào)為CCTCC?NO：C2024263，保藏日期為2024年09月24號(hào)，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明提供的雜交瘤細(xì)胞株1E5分泌的單克隆抗體效價(jià)可達(dá)1:6553600倍稀釋，能與VP2蛋白及A型塞內(nèi)卡病毒發(fā)生特異性反應(yīng)，可將該單克隆抗體應(yīng)用于SVA免疫檢測產(chǎn)品的研制中，比如，可用于膠體金平臺(tái)檢測VP2蛋白，為快速現(xiàn)場檢測SVA病毒提供一種免疫檢測抗體原料。

技術(shù)研發(fā)人員：裴曉萌,吳萌,王靜,魏治靜,劉昱,劉園園
受保護(hù)的技術(shù)使用者：河北省科學(xué)院生物研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6