本發(fā)明屬于甾體激素制備，具體涉及一種醋酸阿奈可他脫氫的方法。

背景技術(shù)：

1、醋酸阿奈可他是一種廉價(jià)且用途廣泛的甾體中間體，其c(1,2）位脫氫物是制備3tr的重要中間體，但因?yàn)槠錁O強(qiáng)的疏水性及分子空間結(jié)構(gòu)，無(wú)論是酶催化或生物轉(zhuǎn)化，一方面，疏水性導(dǎo)致其非常容易起泡，嚴(yán)重影響傳質(zhì)，因此投料濃度低下，另一方面，使用節(jié)桿菌或者脫氫酶催化，轉(zhuǎn)化率較低；均無(wú)法形成高效的轉(zhuǎn)化。

2、專利申請(qǐng)cn112375114a公開(kāi)了一種醋酸潑尼松龍的制備方法，其中醋酸阿奈可他經(jīng)過(guò)生物發(fā)酵得到脫氫脫酯物，然后經(jīng)過(guò)酯化反應(yīng)得到脫氫物，其總收率和純度還有待提高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種醋酸阿奈可他脫氫的方法，提高收率和純度，同時(shí)降低生產(chǎn)成本。

2、本發(fā)明實(shí)施例提供一種醋酸阿奈可他脫氫的方法，以醋酸阿奈可他為底物，以簡(jiǎn)單諾卡氏菌 nocardioides?simplex為發(fā)酵菌株，進(jìn)行生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化，得到產(chǎn)物c，所述產(chǎn)物c的結(jié)構(gòu)式為：

3、；

4、所述生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化時(shí)，還加入有吐溫80、甲醇和ppe，所述醋酸阿奈可他和吐溫80的重量比為200:0.2-2，所述醋酸阿奈可他和甲醇的重量比為200:10-30，所述醋酸阿奈可他和ppe的重量比為200:10-50。

5、反應(yīng)路線為：

6、。

7、優(yōu)選的，所述醋酸阿奈可他和吐溫80的重量比為200:0.5-1.5，所述醋酸阿奈可他和甲醇的重量比為200:15-25。

8、優(yōu)選的，所述醋酸阿奈可他和ppe的重量比為200:20-40。

9、優(yōu)選的，簡(jiǎn)單諾卡氏菌 nocardioides?simplex在進(jìn)行種子培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中加入有ppe。

10、優(yōu)選的，簡(jiǎn)單諾卡氏菌 nocardioides?simplex在進(jìn)行種子培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中不加入醋酸阿奈可他。

11、優(yōu)選的，產(chǎn)物c和二氯甲烷、4-二甲氨基吡啶混合，加入醋酐，反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，過(guò)濾，濃縮，抽濾，得到濾餅1和濾液1，濾餅1中含有產(chǎn)物b，產(chǎn)物b的結(jié)構(gòu)式為：

12、；

13、所述濾餅1、丙酮和水混合，升溫回流，析晶，抽濾，得到濾餅2和濾液2；

14、所述濾液2減壓濃縮，抽濾，得到濾餅3，所述濾餅3中含有產(chǎn)物b；

15、所述濾液1和濾餅2混合，得到母液料，母液料作為底物，返投到以簡(jiǎn)單諾卡氏菌 nocardioides?simplex為發(fā)酵菌株的生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化中，得到產(chǎn)物c。

16、優(yōu)選的，產(chǎn)物c和二氯甲烷的重量體積比為1g：6-10ml，所述產(chǎn)物c和4-二甲氨基吡啶的重量比為1：0.02-0.1。

17、優(yōu)選的，所述濾餅1和丙酮的重量體積比為1g：20-40ml，所述濾餅1和水的重量體積比為1g：1-4ml。

18、優(yōu)選的，升溫回流的升溫溫度為60℃，降溫至40℃后析晶。

19、優(yōu)選的，所述濾液2減壓濃縮，用水置換濃縮干丙酮，降溫至30℃，抽濾，得到濾餅3

20、本發(fā)明的有益效果是，本發(fā)明使用簡(jiǎn)單諾卡氏菌（ nocardioides?simplexaccc10205），使用ppe、吐溫80和甲醇做輔料，促進(jìn)醋酸阿奈可他的轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化過(guò)程中，21位醋酸酯水解和c(1,2)位脫氫同時(shí)進(jìn)行，主要產(chǎn)物為產(chǎn)物c。其投料濃度可以高達(dá)200g/l，脫氫轉(zhuǎn)化率達(dá)到90%左右，是一種高效穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化方案。

21、生物轉(zhuǎn)化得到的粗品，烘干，酯化得到醋酸阿奈可他脫氫物（產(chǎn)物b）和醋酸阿奈可他（底物a）的混合物，其中脫氫物的含量為91%左右，所得到的粗品使用丙酮精制，得到99%純度的醋酸阿奈可他脫氫物的精品，單次精品收率70%以上。

22、精制所得母液料為醋酸阿奈可他脫氫物和醋酸阿奈可他的混合物，該混合物進(jìn)行返投。相比較于其他單獨(dú)進(jìn)行甾體c(1,2)位生物轉(zhuǎn)化脫氫工序精制的母液料，因?yàn)?1位醋酸酯水解反應(yīng)的存在，被包裹在晶體內(nèi)部的未脫氫的底物更易溶出，提高了c(1,2)位脫氫轉(zhuǎn)化的效率，僅經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單處理即可實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)化，投料濃度100g/l的情況下，脫氫率達(dá)到88%以上。

23、整個(gè)工藝流程綜合收率達(dá)到90%以上，成品液相檢測(cè)純度達(dá)到99%以上。

24、通常來(lái)說(shuō)，醋酸阿奈可他直接轉(zhuǎn)化得到產(chǎn)物b較為困難，轉(zhuǎn)化率低，投料濃度也較低。本發(fā)明先將其轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物c，再將產(chǎn)物c酯化得到產(chǎn)物b。底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物c的過(guò)程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，如果提高底物的投料量，那么產(chǎn)物的收率和轉(zhuǎn)化率會(huì)明顯下降，如果不提高底物的投料量，那么成本將難以進(jìn)一步降低，產(chǎn)能無(wú)法有效提高。為了在降低成本、提升產(chǎn)能的同時(shí)，提高底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物c的效果，本發(fā)明在生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化體系中加入有輔料，特別是加入有ppe，ppe和甲醇、吐溫80的組合同時(shí)提高了投料濃度和產(chǎn)物收率、純度。

25、一般來(lái)說(shuō)，產(chǎn)物c在酯化后，進(jìn)行c(1,2)位脫氫轉(zhuǎn)化得到的是產(chǎn)物b，技術(shù)人員并不知曉簡(jiǎn)單諾卡氏菌 nocardioides?simplex還可以將產(chǎn)物b轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物c，其也不知道，產(chǎn)物c中還含有部分的底物a，因此，其沒(méi)有動(dòng)力將酯化后的產(chǎn)物進(jìn)行處理，返投到發(fā)酵底物中進(jìn)行轉(zhuǎn)化。本發(fā)明在酯化后，將分離得到的母液料再次轉(zhuǎn)化，得到產(chǎn)物c。母液料是底物a和產(chǎn)物b的混合物，區(qū)別于其它甾體中間體單脫氫母液料反應(yīng)（單脫氫母液料反應(yīng)需要其中未脫氫底物含量達(dá)到一定比例才能順利轉(zhuǎn)化），這種返投轉(zhuǎn)化解決了母液料因?yàn)榫w包裹造成的無(wú)法轉(zhuǎn)化，原因?yàn)椋?1位醋酸酯的水解反應(yīng)促進(jìn)了晶體崩解，被包裹在混合晶體中的未脫氫物快速?gòu)哪敢毫匣旌暇w中得到釋放，進(jìn)行脫氫反應(yīng)，c(1,2)脫氫反應(yīng)，提高轉(zhuǎn)化速度、轉(zhuǎn)化率和收率，進(jìn)一步降低了生產(chǎn)成本。

技術(shù)特征：

1.一種醋酸阿奈可他脫氫的方法，其特征是，以醋酸阿奈可他為底物，以簡(jiǎn)單諾卡氏菌nocardioides?simplex為發(fā)酵菌株，進(jìn)行生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化，得到產(chǎn)物c，所述產(chǎn)物c的結(jié)構(gòu)式為：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述醋酸阿奈可他和吐溫80的重量比為200:0.5-1.5，所述醋酸阿奈可他和甲醇的重量比為200:15-25。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述醋酸阿奈可他和ppe的重量比為200:20-40。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，簡(jiǎn)單諾卡氏菌nocardioides?simplex在進(jìn)行種子培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中加入有ppe。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，簡(jiǎn)單諾卡氏菌nocardioides?simplex在進(jìn)行種子培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中不加入醋酸阿奈可他。

6.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征是，產(chǎn)物c和二氯甲烷、4-二甲氨基吡啶混合，加入醋酐，反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，過(guò)濾，濃縮，抽濾，得到濾餅1和濾液1，濾餅1中含有產(chǎn)物b，產(chǎn)物b的結(jié)構(gòu)式為：

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征是，產(chǎn)物c和二氯甲烷的重量體積比為1g：6-10ml，所述產(chǎn)物c和4-二甲氨基吡啶的重量比為1：0.02-0.1。

8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征是，所述濾餅1和丙酮的重量體積比為1g：20-40ml，所述濾餅1和水的重量體積比為1g：1-4ml。

9.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征是，升溫回流的升溫溫度為60℃，降溫至40℃后析晶。

10.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征是，所述濾液2減壓濃縮，用水置換濃縮干丙酮，降溫至30℃，抽濾，得到濾餅3。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于甾體激素制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種醋酸阿奈可他脫氫的方法，以醋酸阿奈可他為底物，以簡(jiǎn)單諾卡氏菌Nocardioides?simplex為發(fā)酵菌株，進(jìn)行生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化，得到產(chǎn)物C，所述產(chǎn)物C的結(jié)構(gòu)式為：；所述生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化時(shí)，還加入有吐溫80、甲醇和PPE，所述醋酸阿奈可他和吐溫80的重量比為200:0.2?2，所述醋酸阿奈可他和甲醇的重量比為200:10?30，所述醋酸阿奈可他和PPE的重量比為200:10?50；本發(fā)明提高收率和純度，同時(shí)降低生產(chǎn)成本。

技術(shù)研發(fā)人員：孟浩,楊芳,趙小娟,劉喜榮,曾春玲,王敬華,彭麗芬
受保護(hù)的技術(shù)使用者：湖南新合新生物醫(yī)藥有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9