本發(fā)明屬于植物基因工程，具體涉及一種利用oftps6基因體外合成萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)的方法。

背景技術(shù)：

1、近年來(lái)，香精香料行業(yè)發(fā)展迅猛，中國(guó)傳統(tǒng)芳香植物的精油市場(chǎng)潛力巨大。2022年，國(guó)內(nèi)精油銷(xiāo)售額突破105億元，且從2016年開(kāi)始以每年20％以上的增長(zhǎng)速度在食品、化妝品和康養(yǎng)市場(chǎng)廣泛應(yīng)用。桂花不僅是中國(guó)十大名花之一，也是重要的傳統(tǒng)芳香植物。研究表明，芳樟醇及其氧化物、β-月桂烯、順式-β-羅勒烯、d-檸檬烯等萜烯類(lèi)化合物是桂花精油及鮮花中最重要的香氣活性物質(zhì)，對(duì)產(chǎn)品的香型和香味濃郁度發(fā)揮關(guān)鍵作用。萜烯類(lèi)化合物是一類(lèi)以異戊二烯(c5)為基本結(jié)構(gòu)單元形成的烴類(lèi)化合物，是花香中含量豐富且種類(lèi)多樣的關(guān)鍵香氣活性物質(zhì)，同時(shí)具有緩解焦慮、殺菌、抗氧化等康養(yǎng)價(jià)值，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品等領(lǐng)域。

2、萜烯合成酶(terpene?synthase，tps)是合成萜烯類(lèi)物質(zhì)的最后一步關(guān)鍵酶，可催化多種底物生成單萜、倍半萜和二萜化合物。tps基因結(jié)構(gòu)的變化可產(chǎn)生差異的催化功能和活性，是自然界萜烯類(lèi)化合物結(jié)構(gòu)多樣性的重要原因。tps具有功能多樣化，可催化多種底物生成單萜、二萜和倍半萜化合物，例如hctps7催化香葉基二磷酸(gpp)可產(chǎn)生香檜烯、α-萜烯、γ-萜烯、α-蒎烯等多種產(chǎn)物。因此，tps是植物中產(chǎn)生多種萜烯類(lèi)化合物的決定因素。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在從桂花中篩選出關(guān)鍵萜烯合成酶基因oftps6，通過(guò)原核表達(dá)關(guān)鍵萜烯合成酶oftps6體外合成萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、oftps6蛋白在催化香葉基二磷酸合成萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)中的應(yīng)用，所述oftps6蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示，所述萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)包括芳樟醇、β-月桂烯、α-蒎烯和順式-β-羅勒烯、d-檸檬烯。

4、利用oftps6基因體外合成萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)的方法，包括體外表達(dá)oftps6蛋白，利用oftps6蛋白催化香葉基二磷酸合成萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)。具體地，將含有oftps6基因的原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，擴(kuò)大培養(yǎng)并誘導(dǎo)oftps6蛋白表達(dá)，通過(guò)oftps6蛋白催化香葉基二磷酸合成芳樟醇、β-月桂烯、α-蒎烯和順式-β-羅勒烯、d-檸檬烯等萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)。

技術(shù)特征：

1.oftps6蛋白在催化香葉基二磷酸合成萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)中的應(yīng)用，其特征在于，所述oftps6蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)包括芳樟醇、β-月桂烯、α-蒎烯和順式-β-羅勒烯、d-檸檬烯。

3.利用oftps6基因體外合成萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)的方法，其特征在于，包括體外表達(dá)oftps6蛋白，利用oftps6蛋白催化香葉基二磷酸合成萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)，所述oftps6蛋白的編碼基因序列如seq?id?no.1所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，將含有oftps6基因的原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，擴(kuò)大培養(yǎng)并誘導(dǎo)oftps6蛋白表達(dá)。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種利用OfTPS6基因體外合成萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)的方法，從桂花中篩選出關(guān)鍵萜烯合成酶基因OfTPS6，利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)關(guān)鍵萜烯合成酶OfTPS6，純化后的OfTPS6蛋白以香葉基二磷酸（geranylpyrophosphate，GPP）為底物進(jìn)行體外酶活實(shí)驗(yàn)，使用頂空固相微萃取結(jié)合GC?MS檢測(cè)產(chǎn)物，結(jié)果證明OfTPS6可催化GPP產(chǎn)生芳樟醇、β?月桂烯、α?蒎烯、順式?β?羅勒烯和D?檸檬烯等萜烯類(lèi)香氣物質(zhì)。

技術(shù)研發(fā)人員：谷云,譚亞菲,雷國(guó)泰,席婉
受保護(hù)的技術(shù)使用者：泛亞香料（武漢） 科技股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6