本發(fā)明涉及生物科學和檢測，具體涉及一種抗原、重組表達載體、抗體及其制備方法和應用。

背景技術：

1、線粒體復合物iv，即細胞色素c氧化酶，簡寫為cox，在細胞線粒體呼吸鏈中處于系統(tǒng)的末端，是催化電子與o2結合形成水的場所。在正常細胞中，細胞色素c氧化酶常作為電子傳遞效率的重要監(jiān)測點。

2、活性氧ros是細胞呼吸不斷產生的副產物，主要包括超氧陰離子o2-、過氧化氫h2o2和羥自由基ho-，能夠氧化損傷機體大分子物質如脂質、蛋白質、核酸等，導致很多疾病的發(fā)生，包括老年癡呆、帕金森以及糖尿病等發(fā)生。細胞內ros來源于不同的部位，同時有多個酶催化。研究表明，約90％的ros來源于線粒體。細胞色素氧化酶亞基iv，簡寫為coxiv，coxiv在cox的組裝和活性調控方面起著決定性作用，在哺乳動物細胞中已經證實coxiv表達的改變，能夠直接影響線粒體活性和ros的生成。但是，詳細的調控機制并不清楚。

3、為了更好地研究在昆蟲中coxiv在ros發(fā)生中的作用及機制，需要開發(fā)合適的coxiv抗原以誘導產生特異性抗體。

技術實現思路

1、為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種抗原、重組表達載體、抗體及其制備方法和應用。

2、一種昆蟲coxiv抗原，所述昆蟲coxiv抗原的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

3、優(yōu)選的，所述昆蟲coxiv抗原的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。為有效促進誘導表達，對昆蟲coxiv抗原的氨基酸序列進行優(yōu)化，得到昆蟲coxiv抗原的核苷酸序列。

4、一種所述的昆蟲coxiv抗原的制備方法，構建含有如seq?id?no.2所示核苷酸序列的重組表達載體，將所述重組表達載體轉化入大腸桿菌感受態(tài)細胞，并進行誘導表達，獲得所述抗原。

5、一種含有所述的昆蟲coxiv抗原的核苷酸序列的重組表達載體。

6、優(yōu)選的，通過將如seq?id?no.2所示的核苷酸序列插入基礎表達載體并轉化到大腸桿菌中獲得。

7、優(yōu)選的，所述基礎表達載體為pet-32a。

8、優(yōu)選的，所述的大腸桿菌為bl21(de3)。

9、一種昆蟲coxiv多克隆抗體的制備方法，通過用所述的抗原免疫新西蘭大白兔制得。

10、優(yōu)選的，具體包括：將昆蟲coxiv多克隆抗體的抗原免疫新西蘭大白兔；四次免疫后采血，獲取血清，純化獲得昆蟲coxiv多克隆抗體。

11、一種昆蟲coxiv多克隆抗體，其是通過所述制備方法制得的。

12、所述的昆蟲coxiv多克隆抗體在制備檢測coxiv蛋白的試劑中的應用。

13、與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果在于：

14、本發(fā)明首次獲得了用于誘導昆蟲coxiv多克隆抗體的抗原的氨基酸序列和核苷酸序列。

15、本發(fā)明對昆蟲coxiv抗原進行改造得到的昆蟲coxiv抗原的核苷酸序列，用昆蟲coxiv抗原的核苷酸序列與pet-32a構建了重組表達載體，有效促進昆蟲coxiv抗原表達。

16、本發(fā)明將重組表達載體導入bl21(de3)細胞誘導表達；經過蛋白純化、復性后獲得誘導昆蟲coxiv抗原，得到昆蟲coxiv抗原的制備方法。

17、本發(fā)明將抗原蛋白分多次免疫新西蘭大白兔后，獲得多克隆抗體，并檢測了抗體效價，基于抗體對抗原的特異性識別作用，可以將所述的昆蟲coxiv多克隆抗體用于制備檢測coxiv蛋白的試劑。

技術特征：

1.一種昆蟲coxiv抗原，其特征在于，所述昆蟲coxiv抗原的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

2.根據權利要求1所述的昆蟲coxiv抗原，其特征在于，所述昆蟲coxiv抗原的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

3.一種權利要求2所述的昆蟲coxiv抗原的制備方法，其特征在于，構建含有如seq?idno.2所示核苷酸序列的重組表達載體，將所述重組表達載體轉化入大腸桿菌感受態(tài)細胞，并進行誘導表達，獲得所述抗原。

4.一種含有如權利要求2中所述的核苷酸序列的重組表達載體。

5.根據權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于，通過將如seq?id?no.2所示的核苷酸序列插入基礎表達載體并轉化到大腸桿菌中獲得。

6.根據權利要求5所述的重組表達載體，其特征在于，所述基礎表達載體為pet-32a。

7.根據權利要求5所述的重組表達載體，其特征在于，所述的大腸桿菌為bl21(de3)。

8.一種昆蟲coxiv多克隆抗體的制備方法，其特征在于，通過用權利要求1中所述的抗原免疫新西蘭大白兔制得。

9.一種昆蟲coxiv多克隆抗體，其特征在于，其是通過如權利要求8所述制備方法制得的。

10.權利要求9所述的昆蟲coxiv多克隆抗體在制備檢測coxiv蛋白的試劑中的應用。

技術總結
本發(fā)明涉及生物科學和檢測技術領域，具體涉及一種抗原、重組表達載體、抗體及制備方法和應用。所述抗原的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，用所述抗原免疫新西蘭大白兔；采血，收集抗血清，獲得昆蟲COXIV多克隆抗體。本發(fā)明獲得了用于誘導昆蟲COXIV多克隆抗體的抗原蛋白的氨基酸序列和核苷酸序列，可以獲得特異性識別COXIV蛋白的多克隆抗體。

技術研發(fā)人員：耿少雷,趙小杰,王天云,李衛(wèi)東,賈巖龍,趙春澎,米春柳,常新見,曹祥祥
受保護的技術使用者：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6