本發(fā)明涉及生物細(xì)胞，特別是涉及一種靶向人nectin4蛋白的抗體或其片段、生物材料、生物制劑及制備藥物組分的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、凝集素nectin1、nectin2和nectin3在正常成人組織中廣泛表達(dá)，但nectin4，也被稱(chēng)為pvrl4(脊髓灰質(zhì)炎病毒受體樣4)，nectin4僅在胚胎發(fā)生過(guò)程中存在，成年后在正常組織中表達(dá)量減少，但是nectin4在多種腫瘤細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)，比如尿路上皮癌、乳腺癌、胰腺癌、三陰性乳腺癌和膀胱癌等。nectin4通過(guò)激活pi3k/akt途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、分化、遷移、侵襲等。以nectin4為治療靶點(diǎn)，可能成為治療nectin4高表達(dá)癌癥的有效策略，但是在實(shí)際治療過(guò)程中，無(wú)法特異性識(shí)別該靶點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于此，本發(fā)明所要解決的問(wèn)題是提供一種可以特異性識(shí)別nectin4的靶向人nectin4-car的抗體或其片段。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、一種靶向人nectin4-car的抗體或其片段，包括重鏈和輕鏈；重鏈和輕鏈分別包含三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1至3(如，hcdr1、hcdr2和hcdr3)及三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)1至3(如，lcdr1、lcdr2和lcdr3)；其中，所述重鏈互補(bǔ)決定區(qū)和輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)的氨基酸序列分別選自如下組合之一：

4、(i)所述重鏈可變區(qū)hcdr1的氨基酸序列為seq?id?no:11，所述重鏈可變區(qū)hcdr2的氨基酸序列為如seq?id?no:12所示，所述重鏈可變區(qū)hcdr3的氨基酸序列為如seq?idno:13所示；所述輕鏈可變區(qū)lcdr1的氨基酸序列為如seq?id?no:14所示，所述輕鏈可變區(qū)lcdr2的氨基酸序列為如seq?id?no:15所示，所述輕鏈可變區(qū)lcdr3的氨基酸序列為如seqid?no:16所示；或

5、(ii)所述重鏈可變區(qū)hcdr1的氨基酸序列為如seq?id?no:21所示，所述重鏈可變區(qū)hcdr2的氨基酸序列為如seq?id?no:22所示，所述重鏈可變區(qū)hcdr3的氨基酸序列為如seq?id?no:23所示；所述輕鏈可變區(qū)lcdr1的氨基酸序列為如seq?id?no:24所示，所述輕鏈可變區(qū)lcdr2的氨基酸序列為如seq?id?no:25所示，所述輕鏈可變區(qū)lcdr3的氨基酸序列為如seq?id?no:26所示；或

6、(iii)所述重鏈可變區(qū)hcdr1的氨基酸序列為如seq?id?no:31所示，所述重鏈可變區(qū)hcdr2的氨基酸序列為如seq?id?no:32所示，所述重鏈可變區(qū)hcdr3的氨基酸序列為如seq?id?no:33所示；所述輕鏈可變區(qū)lcdr1的氨基酸序列為如seq?id?no:34所示，所述輕鏈可變區(qū)lcdr2的氨基酸序列為如seq?id?no:35所示，所述輕鏈可變區(qū)lcdr3的氨基酸序列為如seq?id?no:36所示；或

7、(i?v)所述重鏈可變區(qū)hcdr1的氨基酸序列為如seq?id?no:41所示，所述重鏈可變區(qū)hcdr2的氨基酸序列為如seq?id?no:42所示，所述重鏈可變區(qū)hcdr3的氨基酸序列為如seq?id?no:43所示；所述輕鏈可變區(qū)lcdr1的氨基酸序列為如seq?id?no:44所示，所述輕鏈可變區(qū)lcdr2的氨基酸序列為如seq?id?no:45所示，所述輕鏈可變區(qū)lcdr3的氨基酸序列為如seq?id?no:46所示；或

8、(v)所述重鏈可變區(qū)hcdr1的氨基酸序列為如seq?id?no:51所示，所述重鏈可變區(qū)hcdr2的氨基酸序列為如seq?id?no:52所示，所述重鏈可變區(qū)hcdr3的氨基酸序列為如seqid?no:53所示；所述輕鏈可變區(qū)lcdr1的氨基酸序列為如seq?id?no:54所示，所述輕鏈可變區(qū)lcdr2的氨基酸序列為如seq?id?no:55所示，所述輕鏈可變區(qū)lcdr3的氨基酸序列為如seq?id?no:56所示。

9、上述抗體或其片段中，所述重鏈和輕鏈分別包含重鏈可變區(qū)(vh)和輕鏈可變區(qū)(vl)；所述重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1至3(hcdr1、hcdr2和hcdr3)來(lái)自重鏈可變區(qū)，所述輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)1至3(lcdr1、lcdr2和lcdr3)來(lái)自輕鏈可變區(qū)；其中：

10、第(i)組中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:10所示；所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:17所示；或

11、第(ii)組中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:20所示；所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:27所示；或

12、第(iii)組中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:30所示；所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:37所示；或

13、第(iv)組中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:40所示；所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:47所示；或

14、第(v)組中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:50所示；所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:57所示。

15、上述抗體或其片段為針對(duì)nectin4蛋白的單克隆抗體、單鏈抗體或雙鏈抗體；優(yōu)選地，所述抗體或其片段為針對(duì)nectin4蛋白的單克隆抗體。

16、較好地，抗體或其片段在進(jìn)行人源化或其他動(dòng)物源性改造時(shí)，三個(gè)重鏈過(guò)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)中，氨基酸序列的改變不超過(guò)20％；或者，單克隆抗體在進(jìn)行人源化或其他動(dòng)物源性改造時(shí)，三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)或三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)的中，氨基酸序列改變?yōu)?。

17、本發(fā)明還提供含有上述抗體或其片段的核酸分子以及含有該核酸分子的表達(dá)盒、重組載體、宿主細(xì)胞、重組微生物和/或重組細(xì)胞系等。

18、本發(fā)明還提供含有抗體或其片段、核酸分子、表達(dá)盒、重組載體、宿主細(xì)胞、重組微生物和/或重組細(xì)胞系等的生物制劑。

19、本發(fā)明還提供一種生物材料，該生物材料包含有由核酸序列或氨基酸序列構(gòu)建的表達(dá)盒、重組載體、重組蛋白、重組微生物或重組細(xì)胞系，且所述核酸序列或氨基酸序列來(lái)源于上述單克隆抗體；所述生物材料中，所述重組載體包括基因重組表達(dá)載體和嵌合抗原受體。

20、優(yōu)選地，該生物制劑、抗體或其片段，都可以被廣泛應(yīng)用于制備預(yù)防和/或治療腫瘤、癌癥藥物組分。

21、較好地，所述生物制劑中包含有檢測(cè)人nectin4蛋白濃度的試劑、檢測(cè)人nectin4蛋白在腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)程度的試劑、抗體偶聯(lián)毒素對(duì)人nectin4陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行殺傷、抗體偶聯(lián)其他抗體制成靶向人nectin4及其他抗原多抗、抗體偶聯(lián)其他蛋白制成靶向人nectin4的功能重組蛋白。

22、本發(fā)明提供靶向人nectin4蛋白的抗體或其片段，包括如下優(yōu)點(diǎn)：

23、1、具有特異性識(shí)別人nectin4蛋白，部分組合具有人鼠雙種屬特異性，人鼠雙特異性在鼠身上療效與毒性會(huì)和在人身上更相似，方便從動(dòng)物身上的反應(yīng)映射到人身上從而能得到一些對(duì)臨床試驗(yàn)的指導(dǎo)信息；

24、2、該抗體具有良好的組織特異性，僅識(shí)別表達(dá)nectin4組織，對(duì)其他組織器官不識(shí)別，具有良好的檢測(cè)用途前景；

25、3、該抗體制備的car-t對(duì)nectin4陽(yáng)性靶細(xì)胞具有特異性殺傷功能，具有良好的細(xì)胞免疫療法應(yīng)用前景；

26、4、該抗體在天然構(gòu)型狀態(tài)及重組構(gòu)型狀態(tài)均具有良好的靶向性，具有制備良好的抗體藥(adc)、多抗藥及重組抗體蛋白的應(yīng)用前景。