本發(fā)明涉及菌絲收集，具體涉及一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法。

背景技術(shù)：

1、叢枝菌根真菌(arbuscular?mycorrhizal?fungi,amf)能與陸地上超過(guò)80％以上的植物共生，可以侵染宿主植物的根系形成叢枝和囊泡結(jié)構(gòu)，根系外的菌絲在土壤中形成密集的菌絲網(wǎng)絡(luò)。通過(guò)菌絲網(wǎng)絡(luò)amf可以將植物所需的90％的磷和20％的氮輸送給植物(smith?et?al.,2003),植物可將高達(dá)30％的光合作用產(chǎn)物供給真菌(nehls&hammpp,2000；nehls?et?al.,2001)。由于amf是一種依賴于寄主植物獲取碳源的共生真菌，很難實(shí)現(xiàn)純培養(yǎng)。雖然有報(bào)道稱肉豆蔻酸鈉可以作為碳源供給，實(shí)現(xiàn)amf在非共生條件下生長(zhǎng)和產(chǎn)孢(sugiura?et?al.,2019)，但是這一發(fā)現(xiàn)并沒(méi)有得到廣泛的應(yīng)用。收集純化菌絲具有一定的難度，因此，在研究amf真菌菌絲的功能性狀方面，存在一定的局限性。

2、hattingh等人首次開(kāi)發(fā)了菌絲分隔室法(hattinghetal,1973)，此方法可以提純菌絲。如玻璃珠裂室培養(yǎng)系統(tǒng)、雙室培養(yǎng)系統(tǒng)等(wangetal,2014)，但是這些方法只適用于溫室盆栽實(shí)驗(yàn)，而不能應(yīng)用在野外實(shí)驗(yàn)。一種改進(jìn)的方法是用填充玻璃珠或沙子的網(wǎng)袋進(jìn)行外生菌根(ectomycorrhizal,em)真菌菌絲體收集(wallanderetal,2001)，但是收集的菌絲沒(méi)有進(jìn)行富集純化。然而只有石英砂的生長(zhǎng)袋缺少土壤中含有的營(yíng)養(yǎng)成分尤其氮磷，不利于大量菌絲體的收集。而且以往的研究使用的菌絲袋網(wǎng)篩的網(wǎng)孔直徑在40μm左右，可能會(huì)有直徑較小的根毛進(jìn)入菌絲袋而影響菌絲的檢測(cè)結(jié)果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，解決現(xiàn)有的叢枝菌根真菌菌絲收集困難的現(xiàn)狀。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，包括以下步驟：

3、s01、石英砂在0.1mol/l的稀鹽酸中浸泡，用自來(lái)水清洗至中性后，放到烘箱進(jìn)行烘干；

4、s02、裁剪孔徑為10-20μm的尼龍網(wǎng)，并使用封口機(jī)對(duì)尼龍網(wǎng)制成尼龍網(wǎng)袋；

5、s03、將70g石英砂和適量的緩釋肥裝入尼龍網(wǎng)袋，然后再通過(guò)封口機(jī)進(jìn)行束口以制成菌絲收集袋。

6、s04、收獲的菌絲袋內(nèi)容物放入較大的容器中使用自來(lái)水進(jìn)行清洗，富集純化菌絲。

7、作為優(yōu)選的，所述步驟s01中的浸泡時(shí)間為50-70min。

8、作為優(yōu)選的，所述步驟s01中烘箱的溫度為120℃。

9、作為優(yōu)選的，所述步驟s03中在將70g石英砂裝入尼龍網(wǎng)袋前，需要先將70g石英砂與0.5g緩釋肥進(jìn)行混合。

10、作為優(yōu)選的，所述步驟s02中的尼龍網(wǎng)選用的孔徑為10μm。

11、在上述技術(shù)方案中，本發(fā)明提供的一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，具備以下有益效果：可獲得的生物量較高的較純的叢枝菌根真菌菌絲體，且實(shí)際操作比較簡(jiǎn)單，盆栽和野外均可以使用，適用性強(qiáng)。

技術(shù)特征：

1.一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，其特征在于能夠高效地收集大量純化的菌絲體，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，其特征在于，所述步驟s01中的浸泡時(shí)間為50-70min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，其特征在于，所述步驟s01中烘箱的溫度為120℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，其特征在于，所述步驟s02中裁剪的尼龍網(wǎng)袋的規(guī)格為長(zhǎng)15cm，寬4cm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，其特征在于，所述步驟s02中的尼龍網(wǎng)選用的孔徑為10μm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，其特征在于，所述步驟s03中將70g石英砂裝入尼龍網(wǎng)袋前，需要先將70g石英砂與0.5g緩釋肥進(jìn)行混合。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，其特征在于，所述步驟s04使用自來(lái)水或者純化水清洗可以提取純化菌絲。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種叢枝菌根真菌菌絲收集方法，具體涉及菌絲收集技術(shù)領(lǐng)域，包括以下步驟：S01、石英砂在0.1mol/L的稀鹽酸中浸泡，再用自來(lái)水清洗至中性，然后用烘箱進(jìn)行烘干；S02、裁剪孔徑為10?20μm的尼龍網(wǎng)，并使用封口機(jī)將尼龍網(wǎng)制成尼龍網(wǎng)袋；S03、將70g石英砂和適量的緩釋肥裝入尼龍網(wǎng)袋，然后通過(guò)封口機(jī)進(jìn)行束口以制成菌絲收集袋。該發(fā)明適用于盆栽和野外實(shí)驗(yàn)，能夠高效收集大量菌絲體，并且可以阻止植物的根系進(jìn)入菌絲袋。

技術(shù)研發(fā)人員：張海洋,張曉靜,呂曉濤,董曉寧,薄雨杉,韓雪,王袼
受保護(hù)的技術(shù)使用者：河北大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2