本發(fā)明屬于植物多糖提取，具體涉及一種螺旋藻多糖的提取方法。

背景技術(shù)：

1、螺旋藻多糖是從螺旋藻中提取出的生理活性多糖，是一種水溶性多糖，是聯(lián)合國糧農(nóng)組織推薦的“21世紀最理想的食品”，其被廣泛應用于化妝、保健、醫(yī)藥等領域；螺旋藻多糖具有抗腫瘤、抗輻射、促進dna合成及免疫增強作用；近年來，螺旋藻多糖還可以作為肝炎、糖尿病、胃潰瘍的輔助治療，有利于機體的延緩衰老作用，其還具有免疫增強、改善造血功能及促進蛋白質(zhì)合成的作用。

2、目前，已有的螺旋藻多糖的提取方法，包括堿浸提取法、超聲波碎裂提取法、微波輔助提取法、反復凍融破壁法、酶輔助提取法或其中兩種方法組合提取；但是其均存在螺旋藻多糖得率低的缺陷；

3、對此，現(xiàn)有技術(shù)公開了以下內(nèi)容：

4、cn108727510a公開了一種螺旋藻多糖提取物及其制備方法和增強免疫功能的應用，具體公開了是將螺旋藻干粉與焦磷酸鈉溶液混合進行破壁處理，然后加入蛋白酶進行酶解，再采用醇沉的方法對多糖進行沉淀，最后經(jīng)洗滌干燥，制得螺旋藻多糖；

5、采用該方法得到的螺旋藻多糖，得率達到10.64%，總含量為25.35%；但是采用該方法提取的螺旋藻多糖總糖含量低。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種螺旋藻多糖的提取方法，螺旋藻多糖的得率高，總糖含量高。

2、針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：

3、一種螺旋藻多糖的提取方法，包括破壁處理、酶解、分離以及純化步驟，具體操作如下：

4、1.破壁處理

5、將螺旋藻干粉置于去離子水中，加入單甘油脂肪酸酯，攪拌0.8-1.2h，然后進行均質(zhì)處理，均質(zhì)時間為4-6min，均質(zhì)壓力為6.2-6.7mpa，均質(zhì)次數(shù)為3次，均質(zhì)處理結(jié)束后，加入10-14wt%氫氧化鈉溶液，控制ph值為9.8-10.2，在78-82℃下水浴5.8-6.2h，制得螺旋藻多糖提取液；

6、所述螺旋藻干粉、去離子水和單甘油脂肪酸酯的質(zhì)量比為8-12:290-310:0.10-0.14；

7、2.酶解

8、向螺旋藻多糖提取液中加入8-12wt%鹽酸溶液，調(diào)節(jié)ph為6.1-6.4，然后加入功能酶進行超聲處理，超聲時間為23-27min，超聲功率為83-88w，超聲頻率為20-25khz，超聲處理結(jié)束后，以1.7-2.2℃/min速率升溫至50-54℃進行酶解，酶解時間為9-12h，酶解結(jié)束后，制得酶解液；

9、所述螺旋藻多糖提取液和功能酶的質(zhì)量比為4.0-4.2kg:3.5-3.7g；

10、所述功能酶的制備方法，包括以下步驟：

11、（1）生物炭預處理

12、將生物炭置于密閉容器中，噴淋預分散液，噴淋的同時控制溫度為43-47℃，攪拌轉(zhuǎn)速為210-230rpm，控制噴淋速率為3.7-4.2g/min，噴淋結(jié)束后，在78-82℃下干燥5.8-6.2h，制得預分散生物炭；將預分散生物炭置于預處理液中，室溫下進行攪拌反應，反應時間為9.8-10.3h，攪拌轉(zhuǎn)速為195-206rpm，攪拌結(jié)束后，經(jīng)過濾洗滌干燥后，制得預處理生物炭；

13、所述生物炭的粒徑為145-155nm；

14、所述生物炭、預分散液的質(zhì)量比為10.3-10.5:82-86；

15、所述預分散液為30-34wt%乙醇溶液、鼠李糖脂和蔗糖脂肪酸酯的混合液，所述30-34wt%乙醇溶液、鼠李糖脂和蔗糖脂肪酸酯的質(zhì)量比為78-83:1.1-1.5:1.5-1.8；

16、所述預分散生物炭與預處理液的質(zhì)量體積比為9.6-10.3g:490-508ml；

17、所述預處理液是由去離子水、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽和鹽酸多巴胺混合均勻制得，所述去離子水、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽和鹽酸多巴胺的質(zhì)量比為495-505:0.63-0.67:2.1-2.3；

18、（2）交聯(lián)

19、將甲殼素置于酸液中，升高溫度至50-54℃，進行超聲處理，超聲時間為18-22min，超聲功率為226-235w，超聲頻率為15-20khz，超聲結(jié)束后，以1.8-2.2℃/min速率升溫至80-84℃，在氮氣氣氛下進行球磨處理，球磨時間為1.4-1.6h，球磨轉(zhuǎn)速為116-124rpm，球料比為3-5:1，球磨結(jié)束后，經(jīng)過濾洗滌干燥，制得預處理甲殼素；將預處理甲殼素和預處理生物炭置于去離子水中，攪拌均勻后加入戊二醛溶液，室溫下攪拌3.8-4.2h，攪拌結(jié)束后，經(jīng)靜置離心洗滌后，進行冷凍干燥，干燥溫度為-34～-30℃，干燥時間為10-13h，干燥結(jié)束后，自然恢復至室溫，制得交聯(lián)載體；

20、所述甲殼素的長度為190-210nm，寬度為35-45nm；

21、所述甲殼素、酸液的質(zhì)量比為10.0-10.5:96-105；

22、所述酸液為鹽酸、水楊酸和去離子水的混合物，所述鹽酸、水楊酸和去離子水的質(zhì)量比為5.0-5.2:1.8-2.2:50-55；

23、所述預處理甲殼素、預處理生物炭、去離子水和戊二醛溶液的質(zhì)量體積比為3.4-3.8g:2.7-3.3g:115-124g:58-63ml；

24、所述戊二醛溶液的質(zhì)量濃度為3.4-3.7%；

25、（3）負載

26、將交聯(lián)載體置于去離子水中，升高溫度至58-62℃，加入木瓜蛋白酶，進行攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速是163-175rpm，攪拌時間為2.0-2.5h，攪拌結(jié)束后，離心后在58-63℃下干燥7.8-8.4h，制得功能酶；

27、所述交聯(lián)載體、去離子水、木瓜蛋白酶的質(zhì)量比為1.1-1.5:17.1-17.8:0.6-0.8；

28、3.分離

29、將酶解液進行離心處理，離心轉(zhuǎn)速為2680-2730rpm，離心時間為12-17min，離心結(jié)束后將上清液進行濃縮，濃縮至上清液原體積的1/4，濃縮溫度為72-75℃，真空度為0.080-0.084mpa，濃縮結(jié)束后，冷卻至室溫，得到濃縮液。

30、4.純化

31、將濃縮液與6-8倍體積的93-97wt%乙醇溶液混合，靜置11-13h，離心后，得到一次上清液和一次沉淀，一次沉淀用2.5-3.5倍質(zhì)量的無水乙醇洗滌、濾干，得到濕態(tài)固體一；將一次上清液與4.8-5.2倍體積的93-97wt%乙醇溶液混合，靜置10-13h后進行離心，得到二次上清液和二次沉淀，將二次沉淀用2.5-3.5倍質(zhì)量的無水乙醇洗滌并濾干，得到濕態(tài)固體二；將濕態(tài)固體一和濕態(tài)固體二混合后進行真空干燥，干燥溫度為58-62℃，真空度為0.088-0.093mpa，干燥時間為8.0-8.4h，干燥結(jié)束后，制得螺旋藻多糖。

32、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明取得了以下有益效果：

33、1.本發(fā)明采用酶解的方法對螺旋藻多糖進行提取，采用特定的載體對酶進行固化，其中的載體是以生物炭和甲殼素作為載體，生物炭是先采用表面活性劑進行分散處理，避免顆粒之間的聚集，然后采用預處理液使其表面引入了較多的氨基，在交聯(lián)步驟中，將預處理的生物炭與甲殼素在戊二醛的作用下進行交聯(lián)，使得預處理的生物炭與甲殼素實現(xiàn)了穩(wěn)定的交聯(lián)結(jié)構(gòu)，一方面提高了交聯(lián)載體的吸附性能，實現(xiàn)較多的酶活性中心在交聯(lián)載體上的均勻分布，充分發(fā)揮酶的催化活性，提高了對于酶的固定化性能，從而使得酶解步驟更加充分，提高了螺旋藻多糖的得率和總糖量；另一方面交聯(lián)載體的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，增強了功能酶的穩(wěn)定性能，從而使得功能酶在多次重復使用后，仍然保證穩(wěn)定的高活性和高催化性能，重復使用性能佳；

34、2.采用本發(fā)明提取螺旋藻多糖的方法，得率為9.28-9.33%，總糖含量為67.6-68.1%；

35、3.對本發(fā)明制得的功能酶進行回收處理，具體是在分離步驟中，將酶解液離心后，采用純化水對沉淀進行洗滌，在溫度為58℃，真空度為0.08mpa下干燥8.0h，然后重復使用20次，并且在每次使用后均進行回收處理，測得第20次提取的螺旋藻多糖，得率為9.10-9.24%，總糖含量為66.0-67.2%。