本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域，尤其涉及一種寬宿主譜的青枯菌噬菌體mulvp3及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、青枯病是一種世界性的植物細(xì)菌病害，被認(rèn)為是“植物的癌癥”，嚴(yán)重威脅著多種農(nóng)作物及重要經(jīng)濟(jì)作物的生長(zhǎng)。造成植物青枯病的是一種土傳的植物病原細(xì)菌，主要分布在熱帶、亞熱帶及部分暖溫帶地區(qū)，感染植物涉及范圍廣泛，包括番茄、馬鈴薯、煙草、香蕉等草本植物，還包括桑樹、柑橘、油橄欖等林木植物。通過傷口、根尖或者次生根萌發(fā)處侵入植物，定殖在根部皮層迅速繁殖，并進(jìn)入維管束繼續(xù)向其它組織蔓延。同時(shí)分泌果膠酶、纖維素酶等分解植物的中膠層，導(dǎo)致植物枯萎直至死亡。青枯病一旦發(fā)病就難以控制，造成的經(jīng)濟(jì)損失難以估量。青枯病對(duì)茄科植物的危害尤為嚴(yán)重，據(jù)統(tǒng)計(jì)，僅在馬鈴薯種植方面，全球每年由青枯病造成的損失高達(dá)10億美元。

2、青枯病菌生命力強(qiáng)，在濕潤(rùn)的土壤以及有水的微環(huán)境中可以存活多年，并隨著水的流動(dòng)而傳播，給植物種植和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來巨大隱患。因此，由青枯病菌引起的植物青枯病的防治面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。對(duì)于青枯病的防治國內(nèi)外已有大量的探索，提出了多種防治措施，包括化學(xué)防治、物理防治、改進(jìn)農(nóng)業(yè)栽培方式以及生物防治等等。如使用化學(xué)熏蒸劑和抗生素處理土壤，種植抗病品種、作物輪作和套種，利用無致病力青枯病菌菌株、芽胞桿菌、鏈霉菌等生防菌等等。雖然這些防治措施有一定效果，但是并不穩(wěn)定，而且化學(xué)農(nóng)藥的殘留對(duì)土壤和水污染嚴(yán)重，危害人畜健康，細(xì)菌也極易對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性，生防菌不能在土壤中穩(wěn)定定殖，并且其生產(chǎn)、儲(chǔ)藏和使用都有一定難度。因此，開發(fā)新型防治技術(shù)勢(shì)在必行。

3、近年來，利用噬菌體療法防控細(xì)菌性病害引起了研究者的廣泛關(guān)注。噬菌體是一類能夠侵染細(xì)菌的病毒，做為細(xì)菌的“捕食者”，可直接被用于防控病原菌。有研究證實(shí)噬菌體雞尾酒療法可抑制霍亂弧菌在小鼠和兔子體內(nèi)的定殖，有效緩解該菌引起的腹瀉癥狀。近年來，利用噬菌體防治植物病原細(xì)菌的報(bào)道也越來越多，田間試驗(yàn)結(jié)果顯示噬菌體對(duì)丁香假單胞菌、鏈霉菌、苛養(yǎng)木桿菌、解淀粉歐文氏菌和黑脛病菌等植物病原菌都有很好的防治效果。也發(fā)現(xiàn)青枯病菌噬菌體фrsl1和pe204等可顯著降低番茄青枯病的發(fā)病率，表明噬菌體療法在防治青枯病方面具有巨大潛力。

4、噬菌體療法具有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，專一性強(qiáng)，對(duì)同一種細(xì)菌的不同菌株也表現(xiàn)出不同的感染效果，這一特性使噬菌體不會(huì)影響周邊其他微生物，對(duì)微生態(tài)環(huán)境無不利影響。但是在噬菌體的應(yīng)用過程中，細(xì)菌也會(huì)逐漸產(chǎn)生抗性，目前研究發(fā)現(xiàn)使用不同類型、不同宿主譜的噬菌體，制成混合噬菌體制劑(噬菌體雞尾酒)可減少噬菌體抗性的出現(xiàn)，拓寬噬菌體制劑的應(yīng)用范圍。另外，寬宿主譜噬菌體在噬菌體療法中尤其重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種寬宿主譜的青枯菌噬菌體mulvp3及其應(yīng)用。本研究從土壤中分離獲得了一株新型的青枯病菌噬菌體mulvp3，該噬菌體在遺傳學(xué)上屬于一種新型的噬菌體。宿主譜顯示mulvp3對(duì)所有的青枯病菌具有裂解活性，并且裂解量高，對(duì)ph和溫度具有高耐受性。

2、為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種寬宿主譜的青枯菌噬菌體mulvp3，所述青枯菌噬菌體mulvp3于2024年11月6日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為ctcc?m?20242438。

4、優(yōu)選的，所述青枯菌噬菌體mulvp3的基因組序列如seq?id?no.1～5所示。

5、優(yōu)選的，所述青枯菌噬菌體mulvp3在ph值4～12、溫度4～25℃下具有耐性。

6、本發(fā)明還提供了一種所述寬宿主譜的青枯菌噬菌體mulvp3在制備抑制或殺滅青枯菌菌株制劑中的應(yīng)用。

7、優(yōu)選的，所述青枯菌噬菌體mulvp3的數(shù)量為1～3×1011pfu/ml。

8、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：

9、(1)本發(fā)明所述噬菌體mulvp3對(duì)青枯菌具有專一性，且宿主譜廣，這在噬菌體抑制病原菌方面具有極大優(yōu)勢(shì)。

10、(2)本發(fā)明所述噬菌體mulvp3能夠適應(yīng)的ph范圍很廣，只有在極端酸堿環(huán)境條件下難以存活。

11、(3)本發(fā)明所述噬菌體mulvp3具有降解胞外多糖的功能，且在mulvp3中既不具有毒力功能相關(guān)的基因，也不包含溶源-裂解控制相關(guān)基因，是烈性噬菌體，這在噬菌體的安全性應(yīng)用中具有優(yōu)勢(shì)。

12、(4)本發(fā)明所述噬菌體mulvp3可以使青枯病菌的種群降至極低的水平，裂解宿主菌能力強(qiáng)，在桑樹青枯病的生物防治上具有極大的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.一種寬宿主譜的青枯菌噬菌體mulvp3，其特征在于，所述青枯菌噬菌體mulvp3于2024年11月6日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為ctcc?m?20242438。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的寬宿主譜的青枯菌噬菌體mulvp3，其特征在于，所述青枯菌噬菌體mulvp3的基因組序列如seq?id?no.1～5所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的寬宿主譜的青枯菌噬菌體mulvp3，其特征在于，所述青枯菌噬菌體mulvp3在ph值4～12、溫度4～25℃下具有耐性。

4.一種權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述寬宿主譜的青枯菌噬菌體mulvp3在制備抑制或殺滅青枯菌菌株制劑中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述青枯菌噬菌體mulvp3的數(shù)量為1～3×1011pfu/ml。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域，尤其涉及一種寬宿主譜的青枯菌噬菌體Mulvp3及其應(yīng)用。所述噬菌體Mulvp3于2024年11月6日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CTCC?M?20242438。該噬菌體Mulvp3對(duì)青枯菌具有專一性、宿主譜廣，且適應(yīng)的pH范圍很廣，既不具有毒力功能相關(guān)的基因，也不包含溶源?裂解控制相關(guān)基因，是烈性噬菌體，在桑樹青枯病的生物防治以及安全性應(yīng)用中具有極大的優(yōu)勢(shì)。

技術(shù)研發(fā)人員：董朝霞,于翠,張成,朱志賢,張鳳
受保護(hù)的技術(shù)使用者：湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9