本發(fā)明涉及獸用生物制品，具體涉及一株新型鵝細(xì)小病毒、滅活疫苗及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、公開該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

2、水禽細(xì)小病毒屬于細(xì)小病毒科（parvoviridae）雁形目依賴細(xì)小病毒1種（dependoparvovirus?anseriform1），為無囊膜的單鏈dna病毒。病毒以直徑長度約20~22nm的衣殼包裹形成的二十面體對稱結(jié)構(gòu)存在，通常利用自身基因組末端發(fā)夾結(jié)構(gòu)來完成自主病毒的dna復(fù)制。新型鵝細(xì)小病毒（novel?goose?parvovirus,?ngpv），主要侵害幼齡雛鴨，該病在我國北方地區(qū)廣泛流行，致使鴨的出欄率顯著下降，危害嚴(yán)重。

3、新型鵝細(xì)小病毒感染主要發(fā)生于3周齡以內(nèi)的雛鴨，傳染性強(qiáng)，被感染的雛鴨往往在表現(xiàn)出“短喙長舌”的癥狀及背部羽毛脫羽的病癥，脫羽癥狀大概出現(xiàn)在被感染后的7-10天，而“短喙長舌”的癥狀在被感染后15-20天左右才會出現(xiàn)。所以，被新型鵝細(xì)小病毒感染后養(yǎng)殖戶不能立即對未感染鴨群進(jìn)行隔離等預(yù)防措施。感染新型鵝細(xì)小病毒的雛鴨長大后與正常鴨相比個體矮小，殘鴨淘汰率高達(dá)80%，出欄率低，對肉鴨養(yǎng)殖戶造成了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。因此加強(qiáng)對新型鵝細(xì)小病毒毒株的分離鑒定，及早發(fā)現(xiàn)新型鵝細(xì)小病毒感染的病癥，對未感染的鴨群及時進(jìn)行有效的免疫干預(yù)，對于防御該疾病具有重要意義。

4、對于新型鵝細(xì)小病毒感染引起的疾病的防控，除了及時的物理隔離措施外，開發(fā)有效的疫苗至關(guān)重要。但是，新型鵝細(xì)小病毒在體外培養(yǎng)中的增殖，如胚胎或細(xì)胞培養(yǎng)，是復(fù)雜且不可預(yù)測的，由此導(dǎo)致新型鵝細(xì)小病毒疫苗的研制比較困難，目前市面上對于新型鵝細(xì)小病毒的防控均使用小鵝瘟疫苗進(jìn)行預(yù)防，防疫效果差，常規(guī)的抗病毒和抗菌治療均無效果，滅活疫苗的生產(chǎn)簡易、安全性高且易于保存，因此，研制一種安全高效且能夠預(yù)防新型鵝細(xì)小病毒的滅活疫苗是目前極為緊迫的事情。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、根據(jù)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一株新型鵝細(xì)小病毒、滅活疫苗及其應(yīng)用。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明第一方面，提供了一種新型鵝細(xì)小病毒，所述新型鵝細(xì)小病毒已于2024年10月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱cgmcc，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號），保藏名稱為：ngpv-nmg21，分類命名為：新型鵝細(xì)小病毒（ anser?anser?novus?parvovirus），保藏編號為：cgmcc?no.46205。

4、所述新型鵝細(xì)小病毒全基因組核苷酸序列如seq?id?no:1所示。

5、本發(fā)明提供的新型鵝細(xì)小病毒（ngpv-nmg21）為現(xiàn)有新型鵝細(xì)小病毒的變異株，被其感染的家禽在早期會出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，除此之外，對感染后死亡的家禽進(jìn)行刨檢，發(fā)現(xiàn)被該毒株感染的家禽還會表現(xiàn)出明顯的膽囊腫大現(xiàn)象，而上述病癥在以往的新型鵝細(xì)小病毒感染中未曾出現(xiàn)。

6、所述神經(jīng)癥狀的具體表現(xiàn)為感染毒株后2-3天，家禽會出現(xiàn)精神沉郁、行走時出現(xiàn)肢體不協(xié)調(diào)的癥狀。

7、優(yōu)選的，所述家禽為雛鴨或者雛鵝。

8、本發(fā)明第二方面，提供了上述新型鵝細(xì)小病毒在制備預(yù)防和/或治療新型鵝細(xì)小病毒的疫苗中的應(yīng)用。

9、通過對本發(fā)明提供的新型鵝細(xì)小病毒的細(xì)胞嗜性進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)該毒株具有廣泛的細(xì)胞嗜性，能感染多種動物細(xì)胞并能夠在短時間內(nèi)進(jìn)行大量增殖，因此，本發(fā)明提供的新型鵝細(xì)小病毒（ngpv-nmg21）可以作為優(yōu)異的疫苗株，用于疫苗的制備。

10、術(shù)語“細(xì)胞嗜性”指具有在一種或多種細(xì)胞系或者組織細(xì)胞中感染和/或復(fù)制的能力。

11、所述疫苗為滅活疫苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗或者基因工程疫苗中的任一種。

12、本發(fā)明第三方面，提供了一種新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗，所述新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗包括滅活后的上述新型鵝細(xì)小病毒。

13、所述新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗還包括藥學(xué)上可接受的佐劑。

14、本發(fā)明第三方面，提供了上述新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗的制備方法，包括如下步驟：

15、（1）將上述新型鵝細(xì)小病毒接種于處于s期的def細(xì)胞中，獲得病毒液，在病毒液中加入終濃度0.2%的甲醛，37℃攪拌滅活16-18h，獲得滅活抗原液；

16、（2）在滅活抗原液中加入吐溫-80，振蕩混勻至tween-80徹底溶解，得到水相，將白油、硬脂酸鋁和司班-80混合均勻后滅菌，獲得油相；

17、（3）將油相和水相按體積比2:1先以6000rpm混合10min，再以8000r/?min乳化20min，制備得到新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗。

18、步驟（1）中所述病毒液中新型鵝細(xì)小病毒的tcid50為10-7.39/0.2?ml。

19、步驟（2）中所述滅活抗原液與加入的吐溫-80的體積比為（24-49）：1。

20、本發(fā)明的有益效果包括：

21、1.本發(fā)明分離獲得了一株新型鵝細(xì)小病毒，被該毒株感染后2-3天家禽會出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，除此之外，對感染后死亡的家禽進(jìn)行刨檢，發(fā)現(xiàn)被該毒株感染的家禽還會表現(xiàn)出明顯的膽囊腫大現(xiàn)象。該毒株具有廣泛的細(xì)胞嗜性可以作為優(yōu)異的疫苗株，用于疫苗的制備，已于2024年10月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：cgmcc?no.46205。其全基因組核苷酸序列如seq?id?no:1所示。

22、2.將本發(fā)明提供的新型鵝細(xì)小病毒滅活，制備的新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗安全性良好，未出現(xiàn)由疫苗引起的任何局部和全身不良反應(yīng)，并且各項(xiàng)指標(biāo)檢測均穩(wěn)定有效，利用免疫攻毒法評價疫苗的免疫效果，結(jié)果也顯示，本發(fā)明制備的滅活疫苗對鴨群能夠提供有效的免疫保護(hù)，具有很好的商品化開發(fā)前景。

23、3.本發(fā)明在制備新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗時，首先將新型鵝細(xì)小病毒接種于長期處于細(xì)胞分裂s期的def細(xì)胞中獲得病毒液，由于處于s時期的def細(xì)胞自身分裂能力旺盛，將毒株接種于s期的def細(xì)胞中，毒株的復(fù)制能力更強(qiáng)，在此基礎(chǔ)上，再選擇合適配方比例制備油相和水相，進(jìn)行充分乳化的制備方法，在提高滅活疫苗制備效率的同時，提高了制備疫苗的安全性和穩(wěn)定性。

技術(shù)特征：

1.一株新型鵝細(xì)小病毒，其特征在于，所述新型鵝細(xì)小病毒已于2024年10月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：cgmcc?no.46205。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型鵝細(xì)小病毒，其特征在于，所述新型鵝細(xì)小病毒全基因組核苷酸序列如seq?id?no:1所示。

3.權(quán)利要求1所述的新型鵝細(xì)小病毒在制備預(yù)防和/或治療新型鵝細(xì)小病毒的疫苗中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述疫苗為滅活疫苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗或者基因工程疫苗中的任一種。

5.一種新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗，其特征在于，所述新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗包括滅活后的權(quán)利要求1所述的新型鵝細(xì)小病毒。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗，其特征在于，所述新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗還包括藥學(xué)上可接受的佐劑。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗，其特征在于，所述新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗的制備方法，包括如下步驟：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗，其特征在于，步驟（1）中所述病毒液中新型鵝細(xì)小病毒的tcid50為10-7.39/0.2?ml。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗，其特征在于，步驟（2）中所述滅活抗原液與加入的吐溫-80的體積比為（24-49）：1。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一株新型鵝細(xì)小病毒、滅活疫苗及其應(yīng)用，屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明分離獲得了一株新型鵝細(xì)小病毒，被該毒株感染后2?3天家禽會出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。本發(fā)明將該新型鵝細(xì)小病毒滅活，制備的新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗安全性良好，對鴨群能夠提供有效的免疫保護(hù)，具有很好的商品化開發(fā)前景。本發(fā)明在制備新型鵝細(xì)小病毒滅活疫苗時，首先將該新型鵝細(xì)小病毒接種于處于S期的DEF細(xì)胞中獲得病毒液，在此基礎(chǔ)上，再選擇合適配方比例制備油相和水相，進(jìn)行充分乳化的制備方法，在提高滅活疫苗制備效率的同時，提高了制備疫苗的安全性和穩(wěn)定性。

技術(shù)研發(fā)人員：侯水生,唐熠,周正奎,郭占寶
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6