本發(fā)明涉及黃瓜果形鑒定，尤其是涉及一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記、鑒定方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、黃瓜(cucumissativus?l.)口感爽脆，富含多種人體所需的維生素，具有美容養(yǎng)顏、延緩衰老等功效，深受各年齡段消費(fèi)者的喜愛(ài)，為葫蘆科甜瓜屬的重要經(jīng)濟(jì)作物，在世界范圍內(nèi)廣泛種植，其中，我國(guó)是世界上最大的黃瓜種植和生產(chǎn)國(guó)。

2、隨著人們生活水平的提高，對(duì)高品質(zhì)蔬菜的需求量越來(lái)越大，對(duì)蔬菜外觀品質(zhì)的重視程度也越來(lái)越高。果實(shí)形狀為黃瓜重要的外觀品質(zhì)性狀，通常由果形指數(shù)決定，果形指數(shù)＝果實(shí)縱徑/果實(shí)橫徑，黃瓜的果實(shí)形狀會(huì)對(duì)黃瓜的商品性和產(chǎn)量產(chǎn)生重大影響，還會(huì)對(duì)其在市場(chǎng)上的等級(jí)劃分產(chǎn)生影響。

3、果實(shí)形狀為數(shù)量遺傳性狀，主效基因和多個(gè)微效基因協(xié)同作用，與質(zhì)量性狀不同，黃瓜果形不僅受遺傳因素影響，包括溫濕度、土壤條件、病蟲(chóng)害以及授粉等的外界環(huán)境條件同樣會(huì)對(duì)黃瓜果形造成影響，這進(jìn)一步增加了果形相關(guān)基因定位的難度，目前，關(guān)于黃瓜果形的研究大多停留在粗定位水平，只有少量相關(guān)基因被成功克隆。因此，開(kāi)發(fā)出與果實(shí)形狀緊密連鎖的分子標(biāo)記，在苗期即可實(shí)現(xiàn)黃瓜果實(shí)形狀的鑒定，對(duì)于簡(jiǎn)化黃瓜果形育種工作、促進(jìn)黃瓜果形育種進(jìn)程具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記、鑒定方法及應(yīng)用，以實(shí)現(xiàn)黃瓜果形的苗期鑒定，大幅縮短鑒定時(shí)間和成本，進(jìn)而為簡(jiǎn)化黃瓜果形育種工作、促進(jìn)黃瓜果形育種進(jìn)程助力。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記，分子標(biāo)記為t6-1和w6-4；分子標(biāo)記w6-4的上游引物序列如seq?id?no.1所示，下游引物序列如seq?idno.2所示；分子標(biāo)記t6-1的上游引物序列如seq?id?no.13所示，下游引物序列如seq?idno.14所示。

3、優(yōu)選的，分子標(biāo)記t6-1和w6-4位于6號(hào)染色體，t6-1位于15.18mb，w6-4位于15.32mb，物理距離為141.89kb。

4、優(yōu)選的，細(xì)橫徑果實(shí)在分子標(biāo)記t6-1和w6-4之間發(fā)生交換，設(shè)定分子標(biāo)記t6-1和w6-4在長(zhǎng)果自交系的基因型為aa，圓果自交系的基因型為bb，細(xì)橫徑果實(shí)中分子標(biāo)記t6-1和w6-4的條帶為ab或ba，粗橫徑果實(shí)中為bb。

5、優(yōu)選的，細(xì)橫徑果實(shí)指果形指數(shù)大于1.10的果實(shí)，粗橫徑果實(shí)指果形指數(shù)小于1.10的果實(shí)。

6、優(yōu)選的，果形指數(shù)＝果實(shí)縱徑/果實(shí)橫徑，果實(shí)縱徑為黃瓜果柄與果實(shí)連接處到果實(shí)頂端的長(zhǎng)度數(shù)值，果實(shí)橫徑為黃瓜果實(shí)居中位置的直徑值。

7、一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的方法，應(yīng)用上述分子標(biāo)記進(jìn)行鑒定，步驟如下：

8、s1、提取待測(cè)黃瓜植株的基因組dna；

9、s2、以步驟s1獲得的dna溶液為模板，配制反應(yīng)體系，進(jìn)行pcr擴(kuò)增；

10、s3、將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳，讀取電泳條帶信息，確定待測(cè)黃瓜植株商品瓜時(shí)期的果實(shí)為細(xì)橫徑果實(shí)或粗橫徑果實(shí)。

11、優(yōu)選的，步驟s2中的反應(yīng)體系按taq酶所附說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制。

12、優(yōu)選的，步驟s2中的pcr擴(kuò)增程序?yàn)?4℃，5min；94℃，30s，tm，30s，72℃，10s，35個(gè)循環(huán)；72℃，10s；72℃，10min，tm均為50-60℃。

13、一種如上所述的快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記在黃瓜果形品種選育中的應(yīng)用。

14、因此，本發(fā)明提供的一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記、鑒定方法及應(yīng)用，其具體技術(shù)效果如下：

15、(1)本發(fā)明提供了兩個(gè)與黃瓜果實(shí)橫徑緊密連鎖的分子標(biāo)記——t6-1和w6-4，t6-1和w6-4位于6號(hào)染色體，物理距離為141.89kb；細(xì)橫徑果實(shí)在分子標(biāo)記t6-1和w6-4之間發(fā)生交換，設(shè)定分子標(biāo)記t6-1和w6-4在長(zhǎng)果自交系的基因型為aa，圓果自交系的基因型為bb，細(xì)橫徑果實(shí)中分子標(biāo)記t6-1和w6-4的條帶為ab或ba，粗橫徑果實(shí)中為bb；

16、(2)采用本發(fā)明提供的分子標(biāo)記及鑒定方法，在苗期即可實(shí)現(xiàn)對(duì)商品瓜時(shí)期黃瓜果實(shí)橫徑的快速檢測(cè)，大幅降低鑒定時(shí)間、節(jié)約鑒定成本，且鑒定結(jié)果不受環(huán)境因素影響，穩(wěn)定可靠；對(duì)于簡(jiǎn)化黃瓜果形育種工作、促進(jìn)黃瓜果形育種進(jìn)程具有重要意義。

技術(shù)特征：

1.一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記，其特征在于：分子標(biāo)記為t6-1和w6-4；分子標(biāo)記w6-4的上游引物序列如seq?id?no.1所示，下游引物序列如seq?id?no.2所示；分子標(biāo)記t6-1的上游引物序列如seq?id?no.13所示，下游引物序列如seq?id?no.14所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記，其特征在于：分子標(biāo)記t6-1和w6-4位于6號(hào)染色體，t6-1位于15.18mb，w6-4位于15.32mb，物理距離為141.89kb。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記，其特征在于：細(xì)橫徑果實(shí)在分子標(biāo)記t6-1和w6-4之間發(fā)生交換，設(shè)定分子標(biāo)記t6-1和w6-4在長(zhǎng)果自交系的基因型為aa，圓果自交系的基因型為bb，細(xì)橫徑果實(shí)中分子標(biāo)記t6-1和w6-4的條帶為ab或ba，粗橫徑果實(shí)中為bb。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記，其特征在于：細(xì)橫徑果實(shí)指果形指數(shù)大于1.10的果實(shí)，粗橫徑果實(shí)指果形指數(shù)小于1.10的果實(shí)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記，其特征在于：果形指數(shù)＝果實(shí)縱徑/果實(shí)橫徑，果實(shí)縱徑為黃瓜果柄與果實(shí)連接處到果實(shí)頂端的長(zhǎng)度數(shù)值，果實(shí)橫徑為黃瓜果實(shí)居中位置的直徑值。

6.一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的方法，其特征在于，應(yīng)用權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)中所述的分子標(biāo)記進(jìn)行鑒定，步驟如下：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的方法，其特征在于：步驟s2中的反應(yīng)體系按taq酶所附說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的方法，其特征在于：步驟s2中的pcr擴(kuò)增程序?yàn)?4℃，5min；94℃，30s，tm，30s，72℃，10s，35個(gè)循環(huán)；72℃，10s；72℃，10min，tm均為50-60℃。

9.一種如權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記在黃瓜果形品種選育中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種快速鑒定黃瓜果實(shí)橫徑的分子標(biāo)記、鑒定方法及應(yīng)用，屬于黃瓜果形鑒定技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了兩個(gè)與黃瓜果實(shí)橫徑緊密連鎖的分子標(biāo)記——T6?1和W6?4，T6?1和W6?4位于6號(hào)染色體，物理距離為141.89kb；細(xì)橫徑果實(shí)在分子標(biāo)記T6?1和W6?4之間發(fā)生交換，設(shè)定分子標(biāo)記T6?1和W6?4在長(zhǎng)果自交系的基因型為AA，圓果自交系的基因型為BB，細(xì)橫徑果實(shí)中分子標(biāo)記T6?1和W6?4的條帶為AB或BA，粗橫徑果實(shí)中為BB；采用本發(fā)明提供的分子標(biāo)記及鑒定方法，在苗期即可實(shí)現(xiàn)對(duì)商品瓜時(shí)期黃瓜果實(shí)橫徑的快速檢測(cè)，大幅降低鑒定時(shí)間、節(jié)約鑒定成本，且鑒定結(jié)果不受環(huán)境因素影響，穩(wěn)定可靠；對(duì)于簡(jiǎn)化黃瓜果形育種工作、促進(jìn)黃瓜果形育種進(jìn)程具有重要意義。

技術(shù)研發(fā)人員：王麗娜,王子墨,任仲海,王雪華,陳春花
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9