本發(fā)明涉及dna提取，具體涉及一種組織裂解液及提取動(dòng)物組織dna的方法。
背景技術(shù)：
1、動(dòng)物組織dna提取一般需要進(jìn)行細(xì)胞裂解和dna純化兩步，裂解是使動(dòng)物組織中的核酸游離在裂解體系中的過(guò)程，純化是去除如蛋白質(zhì)、鹽、糖等其他雜質(zhì)的過(guò)程。目前較常用的dna提取方法都存在一些問(wèn)題，例如高鹽法提取dna雖然簡(jiǎn)便快速，但所得dna純度及穩(wěn)定性較差，影響后期pcr反應(yīng)；酚-氯仿抽提法需要較長(zhǎng)的消化時(shí)間且抽提步驟繁瑣，還有可能引入酚的污染，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的上述問(wèn)題，提供一種組織裂解液及提取動(dòng)物組織dna的方法，能簡(jiǎn)單快速裂解動(dòng)物組織細(xì)胞釋放dna，提取方便，用時(shí)短。
2、本發(fā)明技術(shù)方案詳述如下：
3、第一方面，本發(fā)明提供了一種組織裂解液，由以下成分組成：
4、100mm?tris-hcl（三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽），
5、500mm?kcl（氯化鉀），
6、0.45%(wt%)?np40（乙基苯基聚乙二醇），
7、0.45%(wt%)?tween?20（聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯），
8、余量?純水。
9、可選或優(yōu)選的，上述組織裂解液，ph值為8.3。
10、第二方面，本發(fā)明提供了一種提取動(dòng)物組織dna的方法，包括以下步驟：
11、（1）將上述組織裂解液和1%蛋白酶k加入到動(dòng)物組織中，在56℃條件下裂解細(xì)胞15~30分鐘，95℃滅活5分鐘；
12、（2）12000rpm離心2分鐘，取上清即為動(dòng)物組織dna。
13、其中，1%蛋白酶k是按照1g蛋白酶k溶解在100ml純水中的比例制備而成。
14、由于蛋白酶k容易失效，短時(shí)間內(nèi)使用可以將組織裂解液和蛋白酶k混合后放4℃，直接兩者一起用；但長(zhǎng)時(shí)間情況下，蛋白酶k需放-20℃條件下保存，用時(shí)將其溶解在水中，再加到組織裂解液或者直接加到待處理的動(dòng)物組織中都可以。
15、可選或優(yōu)選的，上述方法中，每100μl組織裂解液對(duì)應(yīng)處理2~10mg動(dòng)物組織。
16、可選或優(yōu)選的，上述方法中，裂解細(xì)胞的時(shí)間為15分鐘。
17、可選或優(yōu)選的，上述方法中，加入組織裂解液的用量為100μl。
18、可選或優(yōu)選的，上述方法中，取上清1μl。
19、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
20、本發(fā)明的組織裂解液成分簡(jiǎn)單，成本低，僅tris-hcl、kcl、np40和tween?20四種成分，無(wú)氯仿、異丙醇、乙醇、酚等有機(jī)溶劑，不會(huì)產(chǎn)生有機(jī)溶劑污染；配方中沒(méi)有用于使dna與其他分子如rna或蛋白質(zhì)分離的mg2+，仍然能夠獲得高純度和高穩(wěn)定性的dna，1μl提取液即可滿足pcr對(duì)于dna純度和穩(wěn)定性的要求。
21、本發(fā)明裂解液中tris-hcl濃度提高至100mm（常規(guī)濃度在10-50mm之間），kcl濃度提高至500mm（常規(guī)濃度2.7-50?mm）。提高tris?-?hcl和kcl的濃度對(duì)提取動(dòng)物組織dna有以下作用：
22、tris-hcl方面
23、tris-hcl是一種緩沖液，濃度升高到100mm有助于維持更穩(wěn)定的ph值。在dna提取過(guò)程中，很多酶的活性對(duì)ph敏感，合適的ph有助于保證如蛋白酶k等酶的活性，使其更好地分解組織中的蛋白質(zhì)，讓dna更充分地釋放出來(lái)。而且在后續(xù)的提取步驟中，穩(wěn)定的ph環(huán)境可以防止dna的化學(xué)結(jié)構(gòu)被破壞。
24、kcl方面
25、高濃度的kcl（500mm）有利于破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。它可以改變細(xì)胞膜的通透性，使細(xì)胞內(nèi)的dna更容易釋放到裂解液中。同時(shí)，kcl還可以通過(guò)鹽析作用，使一些蛋白質(zhì)在高鹽環(huán)境下沉淀，減少蛋白質(zhì)對(duì)dna的污染，有助于提高提取dna的純度。
26、本發(fā)明提供的提取動(dòng)物組織dna的方法，采用上述組織裂解液，整個(gè)操作過(guò)程簡(jiǎn)單快速，裂解僅需15分鐘，再滅活5分鐘，離心2分鐘即可獲得符合pcr要求的dna上清液。
1.一種組織裂解液，其特征在于，由以下成分組成：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織裂解液，其特征在于，ph值為8.3。
3.一種提取動(dòng)物組織dna的方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，每100μl組織裂解液對(duì)應(yīng)處理2~10mg動(dòng)物組織。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，裂解細(xì)胞的時(shí)間為15分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，加入組織裂解液的用量為100μl。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，取上清1μl。