本發(fā)明涉及多肽,具體涉及蛋白核促黃藻降血壓肽及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù):
1、高血壓是一種常見病和多發(fā)病。此病一般起病緩慢,患者早期常無癥狀,或僅有頭暈、頭痛、心悸、耳鳴等癥狀,表面上看是一種獨立的疾病,實際上是引發(fā)心、腦血管和腎病變的一個重要的危險因素,如果治療不當(dāng)會病變成為較嚴(yán)重的腦中風(fēng)、心肌梗死和腎功能衰竭等常見高血壓并發(fā)癥。因此,開發(fā)有效的高血壓治療藥物及保健食品具有巨大前景。在血壓調(diào)節(jié)過程中,血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ace)一方面可催化血管緊張素i降解成為血管緊張素ii,另一方面可以催化緩激肽的降解。血管緊張素ii通過與血管緊張素ii一型受體結(jié)合引起血管收縮和水-鈉重吸收進而引起血壓升高。同時緩激肽降解也能使血壓升高。因此,ace抑制劑類藥物始終是治療高血壓的一線藥物。但由于現(xiàn)有ace抑制劑具有副作用,如干咳、皮疹、低鉀血癥等,開發(fā)更加高效且安全的ace抑制劑類化合物依然是研究熱點。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、針對現(xiàn)有ace抑制劑具有干咳、皮疹、低鉀血癥等明顯副作用的技術(shù)問題,本發(fā)明提供蛋白核促黃藻降血壓肽及其制備方法和應(yīng)用,以蛋白核促黃藻為原料,利用酶解工藝和超濾技術(shù)制備得到了一種能夠抑制ace的降血壓肽,為蛋白核促黃藻高值化利用提供技術(shù)支持。
2、本發(fā)明提供的蛋白核促黃藻降血壓肽,其氨基酸序列分別為:
3、asp-gly-arg-pro-gly-pro(簡稱dgrpgp)、asp-gly-leu-asp-gly-leu-arg(簡稱dgldglr)和gly-pro-ala-gly-pro-glu-gly-arg-pro(簡稱gpagpegrp),對應(yīng)的esi/ms檢測分子量分別為597.287da、744.3766?da和836.414?da。
4、上述的蛋白核促黃藻降血壓肽的制備方法,包括蛋白核促黃藻粗蛋白粉預(yù)處理、酶解和超濾純化。
5、進一步地,蛋白核促黃藻降血壓肽的制備方法,包括以下步驟:
6、s1.蛋白核促黃藻粗蛋白粉預(yù)處理:將蛋白核促黃藻粗蛋白粉加水溶解,混勻,離心取上清液,加入硫酸銨溶液沉淀蛋白,繼續(xù)離心,去上清,沉淀加水溶解,透析后進行凍干;凍干后得蛋白核促黃藻蛋白粉;
7、s2.酶解:將s1所得蛋白核促黃藻蛋白粉與水混合,調(diào)節(jié)溫度至25-45℃,加入風(fēng)味蛋白酶,酶解時間2-6h,ph?6-8;酶解液放于沸水中8~15?min后,滅酶活,得蛋白核促黃藻酶解液;
8、s3.超濾純化:將酶解液超濾離心,分別收集分子量小于3kda和大于等于3kda的樣品,測定各組分的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ace)抑制活性,選擇最優(yōu)的超濾組分,即得蛋白核促黃藻降壓肽。
9、進一步地,s1中,水采用蒸餾水,蛋白核促黃藻粗蛋白粉與蒸餾水的重量體積比為1:20~30?g/ml。
10、進一步地,s1中,蛋白核促黃藻的拉丁文為 chlorella?pyrenoidosa。
11、進一步地,s1中,硫酸銨溶液的質(zhì)量分數(shù)為70%~80%。
12、進一步地,s1中,透析時間為36~48?h。
13、進一步地,s1中,水采用蒸餾水,蛋白核促黃藻蛋白粉與蒸餾水的重量體積比為1:80~100?g/ml。
14、進一步地,s2中,風(fēng)味蛋白酶的用量為蛋白核促黃藻蛋白粉質(zhì)量的13%~21%。
15、進一步地,s3中,超濾的轉(zhuǎn)速為5000~6000rpm,時間為10~20min。
16、上述蛋白核促黃藻降血壓肽用于降血壓藥物或保健食品的制備,能夠發(fā)揮良好的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ace)抑制活性。
17、本發(fā)明的有益效果在于:
18、(1)本發(fā)明以蛋白核促黃藻粗蛋白粉為原料,利用酶解工藝和超濾技術(shù)制備得到了具有ace抑制作用的降血壓肽,為蛋白核促黃藻高值化利用提供技術(shù)支持。本發(fā)明采用的制備方法是一種可控和對環(huán)境友好的生物酶法,易通過對酶解過程的監(jiān)控,使蛋白核促黃藻降壓肽最大程度地釋放出來,提高了原料的利用率;同時所制備的降壓肽安全、無毒副作用。
19、(2)本發(fā)明制備的降壓肽具有顯著的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ace)抑制活性,可應(yīng)用于治療高血壓相關(guān)的藥物或保健食品的制備。
1.蛋白核促黃藻降血壓肽,其特征在于,所述蛋白核促黃藻降血壓肽的氨基酸序列分別為:
2.權(quán)利要求1所述的蛋白核促黃藻降血壓肽的制備方法,其特征在于,包括蛋白核促黃藻粗蛋白粉預(yù)處理、酶解和超濾純化。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛋白核促黃藻降血壓肽的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白核促黃藻降血壓肽的制備方法,其特征在于,s1中,所述水采用蒸餾水,蛋白核促黃藻粗蛋白粉與蒸餾水的重量體積比為1:20~30?g/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白核促黃藻降血壓肽的制備方法,其特征在于,s1中,所述蛋白核促黃藻的拉丁文為chlorella?pyrenoidosa。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白核促黃藻降血壓肽的制備方法,其特征在于,s1中,所述硫酸銨溶液的質(zhì)量分數(shù)為70~80%;透析時間為36~48?h。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白核促黃藻降血壓肽的制備方法,其特征在于,s2中,所述水采用蒸餾水,蛋白核促黃藻蛋白粉與蒸餾水的重量體積比為1:80~100?g/ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白核促黃藻降血壓肽的制備方法,其特征在于,s2中,風(fēng)味蛋白酶的用量為蛋白核促黃藻蛋白粉質(zhì)量的13%~21%。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白核促黃藻降血壓肽的制備方法,其特征在于,s3中,超濾的轉(zhuǎn)速為5000~6000rpm,時間為10~20min。
10.權(quán)利要求1所述的蛋白核促黃藻降血壓肽或權(quán)利要求2至9任一項所述的制備方法得到的蛋白核促黃藻降血壓肽在降血壓藥物或保健食品制備中的應(yīng)用。