本發(fā)明屬于核苷化合物合成領(lǐng)域，具體涉及一種2'修飾的堿性核苷的制備方法。

背景技術(shù)：

1、非天然核苷與核苷酸可稱(chēng)為核苷與核苷酸類(lèi)似物，從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看它們和天然核苷與核苷酸有不同程度的相似之處，所以在體內(nèi)有以假亂真之效，從而干擾或者直接作用于核酸的代謝過(guò)程，阻斷蛋白質(zhì)、核酸的生物合成，因而這些化合物在抗病毒和抗腫瘤化療藥物中具有非常重要的地位，占有較大的比例，特別是近十年來(lái)這方面藥物的研發(fā)速度很快，可以這樣說(shuō)，只要對(duì)天然核苷的結(jié)構(gòu)進(jìn)行各方面的修飾或變換，就可能獲得新的抗癌，抗病毒的藥物。

2、天然的核苷有尿嘧啶苷、腺嘌呤核苷、鳥(niǎo)嘌呤核苷、胞嘧啶核苷，這些是構(gòu)成rna/dna的基本單元。從化學(xué)性質(zhì)上分析，尿嘧啶核苷具有微弱的酸性，腺嘌呤核苷、鳥(niǎo)嘌呤核苷、胞嘧啶核苷具有弱堿性。當(dāng)前這幾類(lèi)核苷化合物都是發(fā)酵出來(lái)的，應(yīng)用比較普遍。一些非天然核苷也是從這個(gè)基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的，比如2'-氟修飾的核苷、2'-甲氧基修飾的核苷、2'-甲氧乙基修飾的核苷等等?；瘜W(xué)法修飾的核苷目前在aso、sirna、sarna、sgrna上應(yīng)用相當(dāng)廣泛，但是普遍存在一個(gè)問(wèn)題，就是由于核苷化合物本身極性較大，2'-氟修飾的核苷、2'-甲氧基修飾的核苷以及2'-甲氧乙基修飾，它們的分離純化有一定的難度。當(dāng)前的分離方法有目前不分離，粗品進(jìn)入下一步，這往往會(huì)導(dǎo)致中間體分離難度大、收率低等缺點(diǎn)，或者采取反相制備分離，這會(huì)導(dǎo)致成本高等缺點(diǎn)。

3、此外，市場(chǎng)上售賣(mài)的修飾性堿性核苷，如2'-氟修飾的胞苷、腺苷、鳥(niǎo)苷、2'-甲氧基修飾的胞苷、腺苷、鳥(niǎo)苷核苷、2'-甲氧乙基修飾的胞苷、腺苷、鳥(niǎo)苷核苷，目前存在純度不夠或者關(guān)鍵單雜太高等原因，導(dǎo)致中間體或者成品難以純化等問(wèn)題。究其原因主要在于這些核苷都是化學(xué)法得來(lái)，本身存在極性大，溶解性差等缺點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種2'修飾的堿性核苷的制備方法，解決了現(xiàn)有方法會(huì)導(dǎo)致中間體分離難度大、收率低的問(wèn)題，本發(fā)明的方法具有操作簡(jiǎn)便、分離純化效果好、成本低廉、安全系數(shù)高以及收率高等優(yōu)點(diǎn)，可以更好地解決通過(guò)各保護(hù)基團(tuán)對(duì)羥基進(jìn)行保護(hù)的核苷的分離純化問(wèn)題。

2、為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種2'修飾的堿性核苷的制備方法，該制備方法包含：

3、式i中，or選自ome、-och2ch2ome或f；base選自胞嘧啶堿基、腺嘌呤堿基或鳥(niǎo)嘌呤堿基；以核苷起始物為原料，與含保護(hù)基團(tuán)的試劑反應(yīng)，對(duì)核苷起始物的2'位羥基進(jìn)行保護(hù)；待反應(yīng)完全后，進(jìn)行后處理：對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行淬滅，淬滅后再將體系ph調(diào)至7~8；對(duì)所述后處理得到的混合物進(jìn)行純化，所述純化采用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行純化。

4、傳統(tǒng)純化工藝中往往會(huì)用到硅膠純化或者反相純化，在這過(guò)程中會(huì)用到二氯甲烷、甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑。本發(fā)明以陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行純化，采用低毒的去離子水作溶劑，該發(fā)明無(wú)毒無(wú)害，且工期較短，無(wú)需額外處理含鹵溶劑，降低了物料成本，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

5、此外，在傳統(tǒng)的純化工藝中，由于原料極性大、溶解性差等原因，收率一般較低，通常只有20~30%，而且經(jīng)常還會(huì)出現(xiàn)二次甚至三次純化才能拿到合格產(chǎn)品。本發(fā)明的方法收率可以達(dá)到40~50mol%，減輕了純化步驟的分離難度，提高了收率。

6、優(yōu)選地，其特征在于，所述陽(yáng)離子交換樹(shù)脂選用美國(guó)陶氏樹(shù)脂up6150。

7、優(yōu)選地，所述純化，先采用水作為流動(dòng)相，再將濃度梯度的醋酸銨水溶液、碳酸氫銨水溶液、三乙胺-碳酸水溶液、三乙胺水溶液或氨水中任意一種或兩種以上作為流動(dòng)相。

8、優(yōu)選地，所述陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的用量為后處理所得混合物中核苷的質(zhì)量的20~30倍。

9、優(yōu)選地，所述淬滅采用的淬滅劑為飽和氯化銨溶液。

10、優(yōu)選地，該制備方法包含：

11、式i中，or選自ome、-och2ch2ome；base選自胞嘧啶堿基、腺嘌呤堿基或鳥(niǎo)嘌呤堿基；以核苷起始物為原料，于極性有機(jī)溶劑中，降溫至0℃，加入離子型氫化物，室溫反應(yīng)后加入含保護(hù)基團(tuán)的試劑，在室溫反應(yīng)0.5~4?h。

12、更優(yōu)選地，所述含保護(hù)基團(tuán)的試劑選自甲氧乙基溴、對(duì)甲苯磺酸甲酯或硫酸二甲酯。

13、更優(yōu)選地，所述極性有機(jī)溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺。

14、更優(yōu)選地，所述離子型氫化物選自氫化鈉。

15、優(yōu)選地，該制備方法還包含：

16、將核苷起始物于極性有機(jī)溶劑中，加入含保護(hù)基團(tuán)的試劑，加熱反應(yīng)；其中，所述含保護(hù)基團(tuán)的試劑選自四丁基氟化銨或氟化氫吡啶。

17、優(yōu)選地，所述2'修飾的堿性核苷，選自以下任意一種：

18、、、。

19、更優(yōu)選地，若所述2'修飾的堿性核苷如式ii所示，所述流動(dòng)相選用水-5%氨水-10%氨水-15%氨水-25%氨水；若所述2'修飾的堿性核苷如式iii所示，所述流動(dòng)相選用水-3%碳酸氫銨水溶液-7%碳酸氫銨水溶液-10%碳酸氫銨水溶液-15%碳酸氫銨水溶液-20%碳酸氫銨水溶液-30%碳酸氫銨水溶液；若所述2'修飾的堿性核苷如式iv所示，所述流動(dòng)相選用水-1%三乙胺-碳酸水溶液-5%三乙胺-碳酸水溶液-8%三乙胺-碳酸水溶液-11%三乙胺-碳酸水溶液-15%三乙胺-碳酸水溶液。

20、本發(fā)明的2'修飾的堿性核苷的制備方法，解決了現(xiàn)有方法會(huì)導(dǎo)致中間體分離難度大、收率低的問(wèn)題，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

21、（1）本發(fā)明的方法首次采用陽(yáng)離子樹(shù)脂進(jìn)行吸附分離，大大簡(jiǎn)化了前期工藝，具有操作簡(jiǎn)便、分離純化效果好、成本低廉、安全系數(shù)高以及收率高等優(yōu)點(diǎn)，解決了現(xiàn)有技術(shù)中的分離難度大、收率低、成本高及高毒性等問(wèn)題，可以更好地解決通過(guò)各保護(hù)基團(tuán)對(duì)羥基進(jìn)行保護(hù)的核苷的分離純化問(wèn)題；

22、（2）本發(fā)明的方法可以適用于多種核苷的制備工藝中，能夠有效解決因?yàn)槭褂眯揎椥院塑諛O性、溶解性后續(xù)純化和分離困難、目標(biāo)產(chǎn)品收率低等問(wèn)題。該發(fā)明方法具有適用性較廣，對(duì)于類(lèi)似堿性類(lèi)化合物合成可直接進(jìn)行方法轉(zhuǎn)移；

23、（3）本發(fā)明的方法，純化步驟產(chǎn)物的回收率較高60~70%，兩步收率40~50mol%。

技術(shù)特征：

1.一種2'修飾的堿性核苷的制備方法，其特征在于，該制備方法包含：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述陽(yáng)離子交換樹(shù)脂選用美國(guó)陶氏樹(shù)脂up6150。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述純化，先采用水作為流動(dòng)相，再將濃度梯度的醋酸銨水溶液、碳酸氫銨水溶液、三乙胺-碳酸水溶液、三乙胺水溶液或氨水中任意一種或兩種以上作為流動(dòng)相。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的用量為后處理所得混合物中核苷的質(zhì)量的20~30倍。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述淬滅采用的淬滅劑為飽和氯化銨溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，該制備方法包含：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述含保護(hù)基團(tuán)的試劑選自甲氧乙基溴、對(duì)甲苯磺酸甲酯或硫酸二甲酯。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述極性有機(jī)溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述離子型氫化物選自氫化鈉。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，該制備方法還包含：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種2'修飾的堿性核苷的制備方法，該制備方法包含：以核苷起始物為原料，與含保護(hù)基團(tuán)的試劑反應(yīng)，對(duì)核苷起始物的2'位羥基進(jìn)行保護(hù)；待反應(yīng)完全后，進(jìn)行后處理：對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行淬滅，淬滅后再將體系pH調(diào)至7~8；對(duì)所述后處理得到的混合物進(jìn)行純化，所述純化采用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行純化。本發(fā)明的方法具有操作簡(jiǎn)便、分離純化效果好、成本低廉、安全系數(shù)高以及收率高等優(yōu)點(diǎn)，可以更好地解決通過(guò)各保護(hù)基團(tuán)對(duì)羥基進(jìn)行保護(hù)的核苷的分離純化問(wèn)題。

技術(shù)研發(fā)人員：酈雯娟,謝星輝,耿佩佩,劉鵬雷
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海科澤永欣生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2