本發(fā)明涉及mirna建庫測序，尤其涉及一種果蠅mirna文庫rrna的捕獲探針及其應用。

背景技術：

1、核糖體rna(rrna)是細胞內含量最高的一類rna，占細胞內所有rna總量的80%以上。在真核生物中，主要分為5s?rrna?(約120nt)、5.8s?rrna(約160nt)、18s?rrna(約1900nt)和28s(約4700nt)?rrna。其中5.8srrna是真核生物大亞基特有的rrna，由于5.8s基因片段較短(長度約100bp左右)，包含的信息量太少，一般很少單獨使用。

2、微小rna(microrna，mirna)是一類由內源基因編碼的長度約為19-24nt的非編碼單鏈rna分子，它們在動植物中參與轉錄后基因表達調控。mirna通常位于基因間（intergenic）或位于內含子（intronic)區(qū)域，因此普遍認為它并作為編碼其他類型基因的一部分而被轉錄，這些小分子rna與靶mrna的特定堿基結合，引起靶mrna降解或抑制其翻譯，進而調控基因轉錄后表達。

3、為了識別特異的mirna，small?rna?seq是一個重要的研究方法，它不但具有高效的篩選能力、特異性和靈敏性，還能夠量化mirna異構體、檢測出新的mirna等優(yōu)點。經典的small?rna文庫構建方法基于在rna的3’和5’端連接兩個測序接頭，pcr富集后，再通過切膠分選的方式，得到mirna區(qū)域。

4、研究發(fā)現(xiàn)，雙翅目昆蟲如果蠅屬 drosophila、家蠅屬 musca和舌蠅屬 glossina的5.8srrna是割裂的，包括成熟的5srrna和2srrna以及轉錄間隔序列its-2a，地中海實蠅5.8srrna被its-2a(28bp)分成5s(122bp)和2s(30bp)兩個片段，然而蚊科culicidae例外，有個完整連續(xù)的5.8s片段。也就是說由于果蠅屬樣本的特殊性，割裂的2s?rrna片段剛好與常規(guī)的mirna區(qū)域是重合的，所以在mirna建庫過程中增大了rrna序列污染的風險，rrna的占比含量極高，在切膠分選時常常會富集到rrna，rrna將侵占大量的可用數(shù)據(jù)，導致下機數(shù)據(jù)內有rrna的污染。

5、有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術實現(xiàn)思路

1、為解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種果蠅mirna文庫rrna的捕獲探針及其應用。

2、具體的，本發(fā)明的技術方案如下：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種果蠅rrna捕獲探針，其核苷酸序列如seq?id?no.2所示。本發(fā)明提供的果蠅mirna文庫rrna的捕獲探針具有良好的特異性，可有效去除果蠅類樣本mirna文庫中的rrna序列，提高mirna數(shù)據(jù)的有效性及準確性。

4、第二方面，本發(fā)明提供了所述果蠅rrna捕獲探針在去除果蠅類樣本mirna文庫中rrna序列中的應用。

5、第三方面，本發(fā)明提供了一種去除果蠅類樣本mirna文庫中rrna序列的方法，在構建果蠅類樣本mirna文庫過程中，使用所述果蠅rrna捕獲探針與待測序果蠅類樣本的總rna進行雜交反應，再進行加接頭反應。

6、優(yōu)選地，在所述雜交反應中，總rna樣品的濃度為100±20ng/μl；果蠅rrna捕獲探針緩沖液的濃度為10±2μm；總rna樣品與果蠅rrna捕獲探針緩沖液的體積比＜5-10：1。

7、進一步優(yōu)選地，在所述雜交反應中，總rna樣品的濃度為100±10ng/μl；果蠅rrna捕獲探針緩沖液的濃度為10±1μm；總rna樣品與果蠅rrna捕獲探針緩沖液的體積比＜5：1。

8、第四方面，本發(fā)明提供了一種構建果蠅類樣本mirna文庫的方法，包括如下步驟：在構建果蠅mirna文庫時加入所述果蠅rrna捕獲探針，封閉rrna序列。

9、優(yōu)選地，所述構建果蠅類樣本mirna文庫的方法包括如下步驟：制備待測序果蠅樣本的總rna；加入所述果蠅rrna捕獲探針進行雜交反應；加接頭反應；反轉錄合成crna；pcr富集純化后切膠分選，得到待測序mirna文庫。

10、優(yōu)選地，所述加接頭反應依次包括：連接3’接頭、封閉多余3’接頭、連接5’接頭的步驟。

11、第五方面，本發(fā)明提供了所述果蠅rrna捕獲探針在制備去除果蠅類樣本mirna文庫中rrna序列的試劑中的應用。

12、第六方面，本發(fā)明提供了一種去除果蠅類樣本mirna文庫中rrna序列的試劑，其包括所述果蠅rrna捕獲探針。

13、有益效果：

14、本發(fā)明提供了一種果蠅mirna文庫rrna的捕獲探針及其應用。所述果蠅rrna捕獲探針的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。在構建果蠅mirna文庫時，加入本發(fā)明提供的果蠅rrna捕獲探針，封閉rrna序列，以獲得不含有rrna的rna序列，對此進行mirna構建，可減少文庫中的rrna信息。利用本發(fā)明提供的rrna捕獲探針能夠特異性與果蠅rrna雜交，能夠實現(xiàn)高效率、低成本rrna去除，顯著提高目標mirna分子檢測的特異性和準確度，從而能在樣品中發(fā)掘利用到更多有用的mirna信息。

技術特征：

1.果蠅rrna捕獲探針，其特征在于，其核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

2.權利要求1所述果蠅rrna捕獲探針在去除果蠅類樣本mirna文庫中rrna序列中的應用。

3.去除果蠅類樣本mirna文庫中rrna序列的方法，其特征在于，在構建果蠅類樣本mirna文庫過程中，使用權利要求1所述果蠅rrna捕獲探針與待測序果蠅類樣本的總rna進行雜交反應，再進行加接頭反應。

4.根據(jù)權利要求3所述去除果蠅類樣本mirna文庫中rrna序列的方法，其特征在于，在所述雜交反應中，總rna樣品的濃度為100±20ng/μl；果蠅rrna捕獲探針緩沖液的濃度為10±2μm；總rna樣品與果蠅rrna捕獲探針緩沖液的體積比＜5-10：1。

5.根據(jù)權利要求4所述去除果蠅類樣本mirna文庫中rrna序列的方法，其特征在于，在所述雜交反應中，總rna樣品的濃度為100±10ng/μl；果蠅rrna捕獲探針緩沖液的濃度為10±1μm；總rna樣品與果蠅rrna捕獲探針緩沖液的體積比＜5：1。

6.構建果蠅類樣本mirna文庫的方法，其特征在于，包括如下步驟：在構建果蠅mirna文庫時加入權利要求1所述果蠅rrna捕獲探針，封閉rrna序列。

7.根據(jù)權利要求6所述構建果蠅類樣本mirna文庫的方法，其特征在于，包括如下步驟：制備待測序果蠅樣本的總rna；加入權利要求1所述果蠅rrna捕獲探針進行雜交反應；加接頭反應；反轉錄合成crna；pcr富集純化后切膠分選，得到待測序mirna文庫。

8.根據(jù)權利要求7所述構建果蠅類樣本mirna文庫的方法，其特征在于，所述加接頭反應依次包括：連接3’接頭、封閉多余3’接頭、連接5’接頭的步驟。

9.權利要求1所述果蠅rrna捕獲探針在制備去除果蠅類樣本mirna文庫中rrna序列的試劑中的應用。

10.去除果蠅類樣本mirna文庫中rrna序列的試劑，其特征在于，包括權利要求1所述果蠅rrna捕獲探針。

技術總結
本發(fā)明涉及miRNA建庫測序技術領域，尤其涉及一種果蠅miRNA文庫rRNA的捕獲探針及其應用。本發(fā)明提供了一種果蠅miRNA文庫rRNA的捕獲探針及其應用。所述果蠅rRNA捕獲探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。本發(fā)明提供的果蠅miRNA文庫rRNA的捕獲探針具有良好的特異性，可有效去除果蠅類樣本miRNA文庫中的rRNA序列，提高miRNA數(shù)據(jù)的有效性及準確性。

技術研發(fā)人員：鄭洪坤,張雪川,陳鈺萌,畢經德
受保護的技術使用者：北京百邁客生物科技有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/2