本發(fā)明屬于微生物，具體而言，涉及一株能夠提高豬苓菌核生物量以及多糖與甾體類等活性成分含量的優(yōu)質蜜環(huán)菌及其應用。

背景技術：

1、豬苓[ polyporus?umbellatus?(pers.)fr.]是一種珍貴的藥用真菌，在中國具有2000多年的藥用歷史，其干燥菌核為中藥豬苓，作為利尿劑及解毒劑，可用于治療水腫、急性腎炎、黃疸等疾病。多糖類和甾體類是豬苓的主要化學成分，其中豬苓多糖具有抑制腫瘤細胞的增殖、調節(jié)免疫以及抗炎等功效，甾體類成分中的甾醇和甾酮具有較強的利尿作用，在中醫(yī)臨床上主要用于治療急性腎炎、淋病、糖尿病、全身浮腫以及小便不暢等。

2、在自然條件下，豬苓菌核必須與蜜環(huán)菌屬( armillaria)真菌共生才能生長發(fā)育。蜜環(huán)菌與豬苓之間是一種特殊的共生關系，蜜環(huán)菌侵染豬苓后形成隔離腔。蜜環(huán)菌通過消化豬苓菌絲維持自身生存，豬苓吸收解體后的蜜環(huán)菌，促進自身的菌核生長及化學成分積累。

3、作為與豬苓生長發(fā)育中關鍵的生物因子，蜜環(huán)菌屬真菌的種類會對豬苓菌核的生物量及藥效學成分的含量產(chǎn)生影響。目前，由于蜜環(huán)菌菌種退化導致豬苓減產(chǎn)或品質下降。因此，篩選與應用優(yōu)質蜜環(huán)菌用于豬苓的栽培生產(chǎn)具有十分重要的意義。

技術實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一株提高豬苓菌核生物量和多糖及甾體類等活性成分含量的蜜環(huán)菌( armillaria?sp.)菌株ag001，用以解決蜜環(huán)菌菌種退化導致豬苓減產(chǎn)或品質下降。

2、本發(fā)明的目的及其技術問題的解決，可以采用以下技術方案來實現(xiàn)。

3、在第一方面中，本發(fā)明提供了蜜環(huán)菌菌株ag001，該菌株能夠提高豬苓菌核生物量和藥效學活性成分的含量。蜜環(huán)菌菌株ag001是從北京市延慶縣野生豬苓菌核中分離得到的，已于2024年09月20日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，地址是：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101；保藏編號為：cgmcc?no.41458，該菌株ag001的分類學命名為：蜜環(huán)菌 armillariasp.。

4、在本發(fā)明第一方面的實施方案中，菌株ag001的核糖體內基因間隔區(qū)(internaltranscribed?spacer,?igs)序列如seq?id?no:?1所示。

5、本發(fā)明通過對ag001培養(yǎng)特性及rdna-igs序列進行研究和分析，確定ag001為 armillaria?sp.。

6、ag001在pda培養(yǎng)基中具有以下形態(tài)學特征：在黑暗條件下25℃培養(yǎng)，2?d后ag001菌絲開始萌發(fā)，菌絲白色、濃密；4?d后菌索開始生長，新生菌索呈乳白色，頂端分叉，隨著菌索的延長，逐漸呈彎曲狀；6?d后新生的菌索長度約5?mm，隨后逐漸伸長，盤旋于培養(yǎng)基內部及表面，顏色由乳白色逐漸演變?yōu)樽睾稚?/p>

7、在本發(fā)明第一方面的實施方案中，ag001能夠提高豬苓菌核的生物量。

8、在本發(fā)明第一方面的實施方案中，ag001能提高豬苓藥效學活性成分的含量。在第一方面的實施方案中，活性成分為多糖和甾體類物質。在具體實施方案中，甾體類物質是麥角甾醇、豬苓酮a以及豬苓酮b等。

9、在第二方面，本發(fā)明提供了提高豬苓菌核生物量和活性成分含量的生物制劑，包含蜜環(huán)菌菌株ag001的培養(yǎng)物。

10、在本發(fā)明第二方面的實施方案中，活性成分為多糖和甾體類物質。在具體實施方案中，甾體類物質是麥角甾醇、豬苓酮a以及豬苓酮b等。

11、在第三方面，本發(fā)明提供了提高豬苓菌核生物量和活性成分含量的方法，包括將蜜環(huán)菌菌株ag001栽培種接種于豬苓種苓種植處。

12、在本發(fā)明第三方面的實施方案中，活性成分為多糖和甾體類物質。在具體實施方案中，甾體類物質是麥角甾醇、豬苓酮a以及豬苓酮b等。

13、在本發(fā)明第三方面的實施方案中，蜜環(huán)菌菌株ag001栽培種的接種量可以為12-18g/穴。在具體實施方案中，蜜環(huán)菌菌株ag001栽培種的接種量可以為12?g/穴、12.5?g/穴、13g/穴、13.5?g/穴、14?g/穴、14.5?g/穴、15?g/穴、15.5?g/穴、16?g/穴、16.5?g/穴、17?g/穴、17.5?g/穴、18?g/穴，以及上述任意兩個值之間的數(shù)值，優(yōu)選15?g/穴。

14、在第四方面，本發(fā)明提供了蜜環(huán)菌菌株ag001在制備用于提高豬苓菌核生物量和活性成分含量的生物制劑中用途。

15、與在豬苓栽培生產(chǎn)中所廣泛應用的現(xiàn)有蜜環(huán)菌菌株相比，本發(fā)明的ag001菌株能顯著提高豬苓菌核的生物量和多糖及甾體類成分的含量，因此使用ag001菌株栽培豬苓，能夠節(jié)約生產(chǎn)成本并提高經(jīng)濟效益。

16、上述說明僅是本發(fā)明技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術手段，而可依照說明書的內容予以實施，并且為了讓本發(fā)明的上述和其他目的、特征和優(yōu)點能夠更明顯易懂，以下特舉較佳實施例，并配合附圖,詳細說明如下。

技術特征：

1.蜜環(huán)菌菌株ag001，其保藏編號為cgmcc?no.?41458。

2.根據(jù)權利要求1所述的蜜環(huán)菌菌株ag001，其特征在于，所述菌株ag001的核糖體內基因間隔區(qū)(igs)序列如seq?id?no:?1所示。

3.提高豬苓菌核生物量和活性成分含量的生物制劑，其特征在于，所述生物制劑包含蜜環(huán)菌菌株ag001的培養(yǎng)物。

4.根據(jù)權利要求3所述的生物制劑，其特征在于，所述活性成分為多糖、麥角甾醇、豬苓酮a以及豬苓酮b。

5.提高豬苓菌核生物量和活性成分含量的方法，其特征在于，所述方法包括將權利要求1所述的蜜環(huán)菌菌株ag001接種于豬苓種苓種植處。

6.?根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于所述蜜環(huán)菌菌株ag001的栽培種接種量為12-18?g/穴。

7.蜜環(huán)菌菌株ag001在制備用于提高豬苓菌核生物量和活性成分含量的生物制劑中的用途。

技術總結
本發(fā)明屬于微生物技術領域，公開了一株與豬苓共生的蜜環(huán)菌菌株Ag001，其保藏編號是CGMCC?No.41458。本發(fā)明還提供了包含蜜環(huán)菌菌株Ag001的生物制劑、提高豬苓菌核生物量和活性成分含量的方法。本發(fā)明提供的蜜環(huán)菌能夠顯著提高豬苓菌核生物量以及多糖與甾體類等成分的含量，從而提高經(jīng)濟效益。

技術研發(fā)人員：邢詠梅,尹一飛,楊明姝,陳瑾文,侯夢妍,陳娟,冷春燕,黃信潔
受保護的技術使用者：中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6