專(zhuān)利名稱(chēng):抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY及其組合制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY及其制備方法，特別是涉及用于預(yù)防和治療非典型肺炎的多種組合的復(fù)合IgY及其制備方法和組合制劑。
目前世界上治療非典型肺炎(SARS)的方法主要是使用抗病毒藥物[如Ribavirin(三氮唑核苷)等]和糖皮質(zhì)激素以及抗生素或中草藥。目前，全世界尚無(wú)真正對(duì)病毒有確切療效的化學(xué)藥物，而且普遍存在嚴(yán)重的副作用。加拿大衛(wèi)生部根據(jù)加拿大與美國(guó)疾病控制及預(yù)防中心專(zhuān)家的臨床經(jīng)驗(yàn)，以及Ribavirin(三氮唑核苷)對(duì)引發(fā)疾病的冠狀病毒無(wú)效的測(cè)試，加上不少?lài)?yán)重的藥物反應(yīng)報(bào)告，已于2003年5月1日宣布停止使用Ribavirin(三氮唑核苷)。使用糖皮質(zhì)激素會(huì)使人體的免疫系統(tǒng)受損，大劑量使用糖皮質(zhì)激素往往是導(dǎo)致病人最后對(duì)藥物毫無(wú)反應(yīng)，最后無(wú)藥可救而死亡的主要原因。中草藥對(duì)非典型肺炎(SARS)只有調(diào)理作用，很難有確切有效的治療效果。
IgY(Immunoglobulin of Yoik)屬I(mǎi)gG類(lèi)免疫球蛋白，能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，從而抑制或改變了該抗原(為某些細(xì)菌或病毒)的狀態(tài)或活性，并通過(guò)調(diào)理作用，促進(jìn)分葉核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌或病毒的吞噬；它能與病毒結(jié)合，改變病毒表面的構(gòu)象，阻止病毒吸附于易感細(xì)胞，同時(shí)，形成的病毒-IgY免疫復(fù)合物會(huì)被巨噬細(xì)胞吞噬。
由于IgY能夠特異性與病原體結(jié)合并將其有效抑制，就可以克服抗病毒化學(xué)藥物對(duì)病毒實(shí)際殺滅作用不大、而對(duì)人體毒副作用又十分明顯的致命缺點(diǎn)，從而達(dá)到有的放矢地從發(fā)病根源上預(yù)防和治療由變異的冠狀病毒這種病原體引發(fā)的非典型肺炎(SARS)的目的。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種直接抑制非典型肺炎(SARS)主要致病病毒的特異性IgY及其制備方法；本發(fā)明的目的還在于提供一種由可直接抑制非典型肺炎(SARS)主要致病病毒的特異性IgY制成的天然安全又具有特效作用的、預(yù)防和治療非典型肺炎(SARS)的新型組合制劑。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的(1)優(yōu)選引致非典型肺炎(SARS)的主要致病病毒根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的確認(rèn)，冠狀病毒的一個(gè)變種是引發(fā)非典型肺炎(SARS)的病原體。但是，在抽取含有冠狀病毒的樣本進(jìn)行基因分析中發(fā)現(xiàn)，這種病毒變異速度快，僅香港就已發(fā)現(xiàn)4種非典型肺炎(SARS)冠狀病毒的病源。本發(fā)明根據(jù)基因圖譜分析不同國(guó)家和地區(qū)的非典型肺炎(SARS)冠狀病毒的基因排序的結(jié)果，按大致相似的原則進(jìn)行分類(lèi)組合，選取有明顯差異的幾種非典型肺炎(SARS)冠狀病毒作為代表性的主要致病病毒?，F(xiàn)優(yōu)選香港的4種不同的非典型肺炎(SARS)冠狀病毒以及北京傳播的和加拿大傳播的共6種非典型肺炎(SARS)冠狀病毒作為代表性的非典型肺炎(SARS)病原體。今后，隨著這種冠狀病毒在人傳人的過(guò)程中不斷變異，以及對(duì)這種冠狀病毒基因排序組合工作的進(jìn)一步完善和深入，可以及時(shí)調(diào)整和變更代表性的非典型肺炎(SARS)的病原體組合。另外，也可以按照不同國(guó)家和地區(qū)編組，選取不同的SARS冠狀病毒組合，如香港組(若干型組成)、北京組(若干型組成)、加拿大組(若干型組成)等等。
(2)非典型肺炎(SARS)致病病毒特殊復(fù)合抗原的制備本發(fā)明以香港組為例。將VeroE6細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml。將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞。然后棄掉培養(yǎng)液，將收集到的香港地區(qū)4種不同的SARS冠狀病毒毒株用2％FCS和1％青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋至100 TCID 50/ml。取此稀釋液10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，待細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)收獲病毒。收獲病毒時(shí)將培養(yǎng)瓶?jī)鋈谌?，收集培養(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清。再加入甲醛至0.1％的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過(guò)24小時(shí)分別滅活這4種培養(yǎng)的SARS病毒。培養(yǎng)好的滅活病毒在4℃或-20℃保存。然后，將培養(yǎng)好的香港地區(qū)4種不同的SARS冠狀病毒按1∶1∶1∶1的比例或其他適當(dāng)比例混合，再按1∶1比例或其他適當(dāng)比例加入福氏佐劑，置入高速勻漿機(jī)中以10000～30000rpm轉(zhuǎn)速高速粉碎勻化，通過(guò)高速攪拌形成油包水溶液，即制成非典型肺炎(SARS)致病病毒的含多種不同型的全病毒的特殊復(fù)合抗原。
(3)制備免疫蛋應(yīng)用本公司已申請(qǐng)的專(zhuān)利技術(shù)(專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?0101270.3和021021244.9)，將采用上述方法制備的非典型肺炎(SARS)致病病毒抗原，分別對(duì)產(chǎn)蛋母雞進(jìn)行免疫；每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，計(jì)免疫三次；第一次免疫20天后，檢取免疫后的母雞所產(chǎn)免疫蛋，并對(duì)應(yīng)不同的抗原，對(duì)所檢取的免疫蛋進(jìn)行編碼標(biāo)記。
以上免疫方法和注射頻率可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整和變化；也可應(yīng)用上述同樣的免疫技術(shù)，采用上述抗原，分別對(duì)產(chǎn)蛋母鴨或產(chǎn)蛋母鵝或產(chǎn)蛋火雞或產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)等不同產(chǎn)蛋禽類(lèi)進(jìn)行免疫，得到相應(yīng)的免疫蛋。
(4)抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY粗提物的制備首先根據(jù)被免疫的禽類(lèi)不同以及免疫所用抗原不同，將免疫蛋分類(lèi)并標(biāo)記編碼，用流動(dòng)水洗凈免疫蛋，再用酒精擦洗消毒；用打蛋機(jī)將檢取的免疫蛋打碎，用蛋黃篩篩濾去蛋清，留下蛋黃，攪拌均勻，測(cè)量所得的蛋黃的體積，按此體積的4-6倍加入蒸餾水，進(jìn)行稀釋并混合均勻，用NaOH溶液調(diào)整pH至5.5-6.0之間；將調(diào)整好pH值的稀釋液進(jìn)一步充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后將其冷卻至2-6℃，靜置12小時(shí)-24小時(shí)；將稀釋液加入高速離心分離機(jī)中，離心分離20分鐘；將分離所得的上清再加入超濾器中進(jìn)行超濾并濃縮10-20倍，按0.1～0.3％的比例將海藻酸鈉加入濃縮后的漿料中，充分?jǐn)嚢瑁辉偌尤敫咚匐x心機(jī)中離心，取上清，去除脂蛋白；將離心分離后的漿料加入超濾機(jī)，過(guò)超微膜，進(jìn)行過(guò)濾除菌；將過(guò)濾除菌后的產(chǎn)品用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，即制得抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY粗提物干粉成品；最后，將所制備的對(duì)應(yīng)不同抗原的特異性IgY粗提物進(jìn)行編碼標(biāo)記。
(5)抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY的純化采用本公司已公開(kāi)的專(zhuān)利技術(shù)(專(zhuān)利中請(qǐng)?zhí)?0101270.3，專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)1307061)分別過(guò)離子交換柱和凝膠交換柱對(duì)按以上工藝所制取的抗非典型肺炎(SARS)IgY粗提物進(jìn)行純化，即得純IgY。
應(yīng)用SDS-PAGE電泳測(cè)定法，對(duì)按以上工藝所制取的抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY粗提物進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)得其中純IgY含量為50％以上。
(6)采用本發(fā)明人發(fā)明的特殊免疫激活方法和改進(jìn)的工藝技術(shù)所制得的抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY參照常規(guī)“ELISA法”(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))進(jìn)行活性檢測(cè)。
檢測(cè)結(jié)果顯示，抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY對(duì)香港4種代表性非典型肺炎(SARS)冠狀病毒的抗體結(jié)合效價(jià)都達(dá)到1∶512以上。
將用以上方法制備的抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY配以蒸餾水或生理鹽水調(diào)配成濃度0.01％以上的溶劑，制成一種新型霧化劑，加入各種霧化器中，經(jīng)過(guò)霧化后，供非典型肺炎患者吸入呼吸道和肺部產(chǎn)生作用，就可以有效抑制引起非典型肺炎的致病病毒，從而起著有效的治療作用。
將0.01-80％這種抗非典型肺炎特異性IgY配以99.99-20％的輔料，可制成各種臨床可接受的劑型，如霧化劑、鼻噴劑、滴鼻劑、噴喉劑、口噴劑、口含片等劑型，用于預(yù)防和治療非典型肺炎(SARS)。
作為預(yù)防用的劑型，這種抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY還可以2∶1或3∶1或其他適當(dāng)比例加入用本公司已公開(kāi)的專(zhuān)利技術(shù)(專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?0101270.3，專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)1307061)制備的抗齲齒菌IgY，制成一種新型的多功效特異性復(fù)合IgY。將這種多功效特異性復(fù)合IgY配以輔料制成噴霧劑或口含片，只要經(jīng)常使用這種噴霧劑噴口腔和咽喉部位，或者經(jīng)常含服這種新型口含片，就可以十分方便、輕松地既預(yù)防非典型肺炎(SARS)，又防止蛀牙、消除口腔炎癥和口臭，達(dá)到一舉多得的目的。
目前對(duì)非典型肺炎(SARS)無(wú)特效藥物，一般采用對(duì)癥治療和大量投服抗生素、廣譜抗病毒藥以及免疫抑制劑的糖皮質(zhì)激素。眾所周知，抗生素對(duì)病毒并沒(méi)有殺滅作用，廣譜抗病毒的抗生素的濫用反而破壞了人體的正常人“菌群平衡”，造成“菌群失調(diào)”。臨床實(shí)踐已證實(shí)，“菌群失調(diào)”不僅僅是疾病發(fā)生的結(jié)果，也是病毒感染性疾病的促進(jìn)因素，反過(guò)來(lái)會(huì)使病情加重甚至惡化。免疫抑制劑和激素的大量使用，會(huì)直接造成患者免疫系統(tǒng)受損，使免疫機(jī)能愈治愈差，極易繼發(fā)細(xì)菌感染，最終更難治愈。
由于本發(fā)明制備的特異性IgY最大特點(diǎn)是直接針對(duì)非典型肺炎(SARS)的病原體發(fā)生特異性抑制作用，本發(fā)明又將實(shí)際應(yīng)用的劑型和施藥方式設(shè)計(jì)成直接施于病原體最集中的肺部和呼吸通道，因而作用直接、目標(biāo)準(zhǔn)確、治本斷源、效果顯著。同時(shí)，本發(fā)明從根本上改變了目前治療非典型肺炎(SARS)一般需要大量?jī)?nèi)服療效并不確切的化學(xué)藥品和激素的狀況，避免損害患者的免疫機(jī)能，也克服了常規(guī)施藥方式要使大量化學(xué)藥物進(jìn)入人體循環(huán)后才產(chǎn)生作用而會(huì)給人體帶來(lái)種種不良影響的弊病。
本發(fā)明所制備的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY又是一種獨(dú)特的純天然生物制劑，使用十分安全，無(wú)任何毒副作用，由于它僅僅針對(duì)非典型肺炎的致病病原體直接作用，對(duì)有益菌都有很好的保護(hù)作用；同時(shí)，它完全不會(huì)誘發(fā)抗藥菌株的產(chǎn)生，也會(huì)象一般常規(guī)藥物那樣，將有益菌也和病原體一道殺滅而造成“菌群失調(diào)”；反過(guò)來(lái)，本發(fā)明的抗非典型肺炎(SARS)病原體的特異性IgY可以在肺炎和呼吸道構(gòu)建一種不易被病毒和致病菌感染的正常菌群生態(tài)，形成一道人體天然保護(hù)屏障，達(dá)到既治療又預(yù)防的雙重目的。另外，本發(fā)明所制備的特異性IgY是一種多克隆抗體，它可以對(duì)幾種不同的病原體都產(chǎn)生抑制作用，這一點(diǎn)對(duì)于非典型肺炎(SARS)的病原體一變異的冠狀病毒特別有意義。由于這種新型冠狀病毒特別容易變異，僅在香港目前已發(fā)現(xiàn)有4種之多；如果要研制疫苗，則需要有多種疫苗，才會(huì)真正達(dá)到有效控制的效果，這就大大增加了預(yù)防這種惡性傳染病的難度。
而本發(fā)明的特異性Ig不僅對(duì)直接作為抗原免疫的任意型的非典型肺炎(SARS)的變異冠狀病毒有效果；而且，由于高度保守的哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)對(duì)種系發(fā)生學(xué)上距離較遠(yuǎn)的禽類(lèi)有較強(qiáng)的免疫原性；因此，只要以某種抗原采用我公司發(fā)明的免疫激活專(zhuān)利技術(shù)(專(zhuān)利中請(qǐng)?zhí)?2121244.9)免疫禽類(lèi)，所制得的特異性IgY，對(duì)凡是與該抗原有“共同抗原決定簇”的病原體都會(huì)有強(qiáng)烈的抑制活性。也就是說(shuō)，既使冠狀病毒發(fā)生了一定的變異，實(shí)際上其重要部分是不會(huì)變的；本發(fā)明的特異性IgY仍然會(huì)針對(duì)其重要部分產(chǎn)生作用。因此，照樣會(huì)使發(fā)生了新變異的冠狀病毒受到抑制而失活。正因?yàn)椴捎帽景l(fā)明的方法制備的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY具有特殊的廣譜抑制能力；所以，可以解決因這種新冠狀病毒變異特別快而給相關(guān)疫苗和新藥的研制帶來(lái)相當(dāng)大阻力的難題。
實(shí)驗(yàn)例1將來(lái)自香港的4種不同的非典型肺炎(SARS)冠狀病毒依次編碼為香港1型、香港2型、香港3型、香港4型。香港1型冠狀病毒按上述技術(shù)內(nèi)容第2條的方法制作抗原，再用這種抗原免疫母雞，并采用本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容第6條的方法制備抗香港1型冠狀病毒特異性IgY。然后，以香港1型冠狀病毒為檢測(cè)抗原，用“ELISA法”(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))檢測(cè)所制得的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY抗體結(jié)合效價(jià)。結(jié)果如下表
實(shí)驗(yàn)例2分別以香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒、香港4型冠狀病毒為檢測(cè)用抗原，采用“ELISA法”(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))分別檢測(cè)抗香港1型冠狀病毒特異性IgY對(duì)這三種檢測(cè)抗原的抗體結(jié)合效價(jià)。結(jié)果如下表
從以上檢測(cè)結(jié)果看出，采用本發(fā)明的方法制取致病病毒抗原，又采用本發(fā)明的免疫激活方法免疫產(chǎn)蛋禽類(lèi)和制備相應(yīng)的IgY，所制備的抗香港1型冠狀病毒特異性IgY具有理想的廣譜性，不僅如上實(shí)驗(yàn)例1所表明的對(duì)直接免疫的香港1型冠狀病毒抗原有很強(qiáng)的抑制作用，所測(cè)的抗體結(jié)合效價(jià)相當(dāng)高(高達(dá)1∶1024)；對(duì)其他已發(fā)生變異的并沒(méi)有直接免疫的其他三種非典型肺炎(SARS)冠狀病毒也同樣有一定的抑制作用，所檢測(cè)到的抗體結(jié)合效價(jià)仍屬理想。
實(shí)驗(yàn)例3以香港1型冠狀病毒、香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒、香港4型冠狀病毒按1∶1∶1∶1的比例混合均勻，再以本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容(2)的方法步驟制作復(fù)合抗原，并采用本發(fā)明的方法免疫母雞，制備抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY。然后用“ELISA法”(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))分別以香港1型冠狀病毒、香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒、香港4型冠狀病毒以及北京傳播的冠狀病毒作為檢測(cè)用抗原，檢測(cè)所制得的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY對(duì)這5種不同抗原的抗體結(jié)合效價(jià)。檢測(cè)結(jié)果如下表
從以上結(jié)果可以看到，以本發(fā)明的方法用多種致病病毒制作含多種病毒成份的特殊復(fù)合抗原，再用這種特殊復(fù)合抗原，應(yīng)用本發(fā)明的免疫激活方法免疫產(chǎn)蛋禽類(lèi)，所制備的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY，廣譜性特別好，除了對(duì)作為抗原直接免疫的幾型非典型肺炎(SARS)冠狀病毒具有相當(dāng)高的抗體結(jié)合效價(jià)外，對(duì)沒(méi)有作為抗原直接免疫的同種不同型的非典型肺炎(SARS)冠狀病毒也有很好的抑制作用，達(dá)到相當(dāng)理想的效果。
實(shí)驗(yàn)例4分別按照本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容(2)的方法制作非典型肺炎(SARS)致病病毒抗原，然后分別用這種抗原免疫產(chǎn)蛋母雞、產(chǎn)蛋母鴨、產(chǎn)蛋母鵝、產(chǎn)蛋火雞以及產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)。再分別采用本發(fā)明的方法制備得到(1)抗非典型肺炎(SARS)特異性雞IgY、(2)抗非典型肺炎(SARS)特異性鴨IgY、(3)抗非典型肺炎(SARS)特異性鵝IgY、(4)抗非典型肺炎(SARS)特異性火雞IgY、(5)抗非典型肺炎(SARS)特異性鴕鳥(niǎo)IgY。然后，采用“ELISA法”(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))分別以香港1型冠狀病毒、香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒、香港4型冠狀病毒為檢測(cè)抗原，檢測(cè)這三種抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY的抗體結(jié)合效價(jià)。結(jié)果如下表
從以上試驗(yàn)結(jié)果可以看出，采用本發(fā)明的方法制作抗原，用免疫激活方法免疫母雞、母鴨、母鵝、產(chǎn)蛋火雞或產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)，再采用本發(fā)明的方法分別制得抗非典型肺炎(SARS)特異性雞IgY、抗非典型肺炎(SARS)特異性鴨IgY、抗非典型肺炎(SARS)特異性鵝IgY、抗非典型肺炎(SARS)特異性火雞IgY、抗非典型肺炎(SARS)特異性鴕鳥(niǎo)IgY五種不同的IgY，雖然免疫的禽類(lèi)不同，但是所制得的特異性IgY對(duì)引致非典型肺炎的幾種致病病毒都有很好的抑制效果。由于鴨IgY沒(méi)有Fc段，如果將鴨IgY制成注射用劑型，注射入人體內(nèi)，人體不易產(chǎn)生排斥反應(yīng)，這是鴨IgY最大的優(yōu)點(diǎn)。雖然免疫產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)和產(chǎn)蛋火雞所制得的IgY抗體結(jié)合效價(jià)從檢測(cè)數(shù)據(jù)看稍微低了一些，但是，由于鴕鳥(niǎo)和火雞蛋個(gè)體特別大，每個(gè)免疫蛋所能提取得到的IgY比雞免疫蛋和鴨免疫蛋以及鵝免疫蛋都多得多，這點(diǎn)對(duì)于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，也是十分可取的。
實(shí)驗(yàn)例5非典型肺炎(SARS)初發(fā)病患者使用以本發(fā)明的“抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY”為原料制作的組合霧化劑治療的臨床觀察(1)在剛?cè)朐焊綦x治療的確診病人中隨意選50名初發(fā)患者；(2)采用本發(fā)明制備的“抗非典型肺炎(SARS)IgY組合霧化劑”，藥液打開(kāi)后，將其倒入PARI型壓縮霧化氣泵中，經(jīng)霧化供患者吸入。在給予持續(xù)鼻導(dǎo)管吸氧和其他相應(yīng)對(duì)癥治療措施配合的前提下，每二小時(shí)吸入本發(fā)明的IgY組合霧化劑一次，每次持續(xù)5-10分鐘。
(3)每天觀察試驗(yàn)患者的癥狀變化情況，作詳細(xì)記錄；(4)經(jīng)連續(xù)吸用“抗非典型肺炎(SARS)IgY組合霧化劑”三天后，32名患者高熱逐步減退，畏寒、乏力、全身不適等癥狀減輕。吸用一周后，只有8名患者發(fā)熱持續(xù)，并出現(xiàn)干咳、胸痛，其余患者全部不再發(fā)熱，癥狀明顯減輕，有10名患者癥狀消除。
實(shí)驗(yàn)例6非典型肺炎(SARS)重癥患者使用本發(fā)明的“抗非典型肺炎(SARS)特異性復(fù)合IgY”為原料制作的組合霧化劑治療的臨床觀察結(jié)果(1)任選50名住院隔離治療的中、重癥非典型肺炎(SARS)患者；(2)在照常給予持續(xù)鼻導(dǎo)管吸氣和其他相應(yīng)對(duì)癥治療措施配合的前提下，使用壓縮霧化氣泵將本發(fā)明的“抗非典型肺炎(SARS)特異性復(fù)合IgY組合霧化劑”霧化后供患者吸入。每二小時(shí)吸入一次，每次持續(xù)5-10分鐘。
(3)每天觀察試驗(yàn)患者癥狀情況，詳細(xì)記錄。結(jié)果如下表
本發(fā)明的“抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY”能夠有的放矢地直接針對(duì)引致非典型肺炎的致病病毒起有效抑制作用，是從發(fā)病根源上解決問(wèn)題；一方面中和這些病原體，改變這些病原體的活性，并促進(jìn)人體免疫系統(tǒng)清除這些病原體。特別是，本發(fā)明的特異性IgY具有很強(qiáng)的廣譜抑制能力，即使致病病毒發(fā)生了某些變異，仍然會(huì)產(chǎn)生一定的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，本發(fā)明的“抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY”組合制劑，對(duì)非典型肺炎(SARS)的治療效果和目前已采用的同樣是“被動(dòng)免疫治療”的“血清療法”一樣，效果比較理想；而且，由于本發(fā)明的特異性IgY有較好的廣譜抑制能力，抗體活性也強(qiáng)得多，又不會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)等副作用，純度高、來(lái)源廣，價(jià)格又低廉得多，因此，為預(yù)防和治療非典型肺炎(SARS)這種傳染快、危害大的惡性傳染病開(kāi)辟了一條嶄新的途徑。
實(shí)施例1制備100g抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY粗提物及純IgY(1)選具高免疫應(yīng)答能力的良種鴨用肺炎雙球菌制作抗原，分別免疫1000只母鴨，每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，共三次；于第一次注射后第7個(gè)月，把這些鴨所產(chǎn)的蛋標(biāo)記后按常規(guī)方法分別提取其中的IgY，以ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))檢測(cè)所制得的IgY的效價(jià)；選出其中能制得IgY效價(jià)≥256的免疫應(yīng)答能力特別強(qiáng)的鴨200只，再用這批鴨所產(chǎn)的蛋孵出優(yōu)良鴨種，待其長(zhǎng)大至2-3個(gè)月，作為優(yōu)選的高免疫應(yīng)答能力的特種母鴨，并挑選其中40只；(2)非典型肺炎(SARS)致病病毒復(fù)合抗原的制備本發(fā)明以香港組為例。將Vero E6細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml。將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞。然后棄掉培養(yǎng)液，將收集到的香港地區(qū)4種不同的SARS冠狀病毒毒株用2％FCS和1％青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋至100 TCID 50/ml。取此稀釋液10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，待細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)收獲病毒。收獲病毒時(shí)將培養(yǎng)瓶?jī)鋈谌?，收集培養(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清。再加入甲醛至0.1％的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過(guò)24小時(shí)分別滅活這4種培養(yǎng)的SARS病毒。培養(yǎng)好的滅活病毒在4℃或-20℃保存。然后，將培養(yǎng)好的香港地區(qū)4種不同的冠狀病毒按1∶1∶1∶1的比例或其他適當(dāng)比例混合，再按1∶1比例或其他適當(dāng)比例加入福氏佐劑，置入高速勻漿機(jī)中以10000～30000rpm轉(zhuǎn)速高速粉碎勻化，通過(guò)高速攪拌形成油包水溶液，即制成非典型肺炎(SARS)致病病毒的含多種不同型的病毒的特殊復(fù)合抗原。
(3)分別對(duì)優(yōu)選的特種母鴨進(jìn)行強(qiáng)化免疫
用所制取的(SARS)冠狀病毒復(fù)合抗原，采用皮下注射和翅靜脈注射相結(jié)合的強(qiáng)化免疫法，分別對(duì)優(yōu)選的特種母鴨進(jìn)行免疫，每只母鴨每次注射量達(dá)到1-2ml抗原，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，一個(gè)月內(nèi)共免疫三次；第一次免疫20天后，檢取母鴨所產(chǎn)免疫蛋1000只；(4)抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY的制備用打蛋機(jī)將檢取的免疫蛋打碎，用蛋黃篩篩濾去蛋清，留下蛋黃，攪拌均勻；測(cè)量所得的蛋黃的體積，按此體積的4-6倍加入蒸餾水，進(jìn)行稀釋并混合均勻；用NaOH溶液調(diào)整pH至5.5-6.0之間；將調(diào)整好pH值的稀釋液進(jìn)一步充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后將其冷卻至2-6℃，靜置12小時(shí)；將稀釋液加入高速離心分離機(jī)中，以8000-12000rpm轉(zhuǎn)速高速離心分離20分鐘；將分離所得的上清再入超濾器中進(jìn)行超濾并濃縮15倍，按0.2％的比例將海藻酸加入濃縮后的漿料中，充分?jǐn)嚢?；再加入高速離心機(jī)離心，取上清，去除脂蛋白；將離心分離后的漿料加入超濾機(jī)，過(guò)超微膜，進(jìn)行過(guò)濾除菌；將過(guò)濾除菌后的產(chǎn)品用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，即制得抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY粗提物干粉成品；過(guò)離子交換柱和凝膠交換柱對(duì)抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY粗提物進(jìn)行純化，即得純IgY。
實(shí)施例2抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY霧化劑的制備抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY干粉300g加入小型攪拌機(jī)中充分混和；按以下配方調(diào)配30升抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY組合溶液抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY 300g阿斯巴甜 36g香橙香精 90g水蜜桃香精 30g生理鹽水 加至30升先調(diào)制生理鹽水25升，然后加入阿斯巴甜和香精，攪拌均勻后，再邊攪拌邊緩緩加入IgY；接著，加生理鹽水至30升，充分?jǐn)嚢杈鶆?；測(cè)量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5；經(jīng)細(xì)菌過(guò)濾除菌，然后采用無(wú)菌瓶灌裝抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY噴霧劑，每支裝20ml。
實(shí)施例3制備抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY手撳定量壓力噴霧罐抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY干粉300g加入小型攪拌機(jī)中充分混和；
按以下配方調(diào)配200升抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY組合溶液；抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY 300g阿斯巴甜 240g香橙香精 600g水蜜桃香精 200g薄荷香精 1400g蒸餾水 加至200升先取蒸餾水180升，然后分別加入阿斯巴甜、香精，攪拌均勻，再邊攪拌邊緩緩加入IgY；接著加蒸餾水至200升，充分?jǐn)嚢杈鶆?，測(cè)量溶液pH值，根據(jù)所測(cè)的pH值用1.0N NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5；溶液調(diào)配好后，必須在壓力罐生產(chǎn)線上灌裝手動(dòng)定量壓力噴霧罐20000支，每支噴霧罐灌足10ml后，必須再充入壓力氮?dú)饣蛘叻锇鹤鳛橹苿?拋射劑)，裝上定量閥門(mén)，密封，即得。
實(shí)施例4制備抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY定量常壓噴霧罐抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性純IgY干粉300重量份，加入小型攪拌機(jī)中充分混和；按以下配方調(diào)配200重量份抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY組合溶液；抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY 300重量份阿斯巴甜 240重量份香橙香精 600重量份水蜜桃香精 200重量份薄荷香精 1400重量份蒸餾水 加至200體積份先取蒸餾水180體積份，然后分別加入阿斯巴甜、香精，攪拌均勻，再邊攪拌邊緩緩加入復(fù)合IgY；接著加蒸餾水至200體積份，充分?jǐn)嚢杈鶆?，測(cè)量溶液pH值，根據(jù)所測(cè)的pH值用1.0N NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5間；經(jīng)細(xì)菌過(guò)濾除菌，灌裝手撳定量常壓噴霧罐20000支，每支10ml，每支灌裝滿(mǎn)10ml。
實(shí)施例5制備抗非典型肺炎(SARS)和口腔炎癥定量常壓噴霧罐抗非典型肺炎(SARS)特異性復(fù)合IgY干粉150重量份，抗齲齒菌IgY干粉150重量份，加入小型攪拌機(jī)中充分混和，制成抗非典型肺炎(SARS)和口腔炎癥復(fù)合IgY干粉300重量份；按以下配方調(diào)配200重量份抗非典型肺炎(SARS)和口腔炎癥復(fù)合IgY組合溶液；抗非典型肺炎(SARS)和口腔炎癥復(fù)合IgY 300重量份阿斯巴甜 240重量份香橙香精 600重量份水蜜桃香精 200重量份薄荷香精 1400重量份蒸餾水 加至200體積份先取蒸餾水180體積份，然后分別加入阿斯巴甜、香精，攪拌均勻，再邊攪拌邊緩緩加入復(fù)合IgY；接著加蒸餾水至200體積份，充分?jǐn)嚢杈鶆?，測(cè)量溶液pH值，根據(jù)所測(cè)的pH值用1.0N NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5間；經(jīng)細(xì)菌過(guò)濾除菌，灌裝手撳定量常壓噴霧罐20000支，每支10ml，每支灌裝滿(mǎn)10ml。
權(quán)利要求
1.一種抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY，其特征在于該抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY的制備方法包括下列步驟優(yōu)選引致非典型肺炎(SARS)的主要致病病毒，制備非典型肺炎(SARS)致病病毒抗原；制備免疫蛋；制備抗非典型肺炎(SARS)各種致病病毒特異性IgY粗提物；抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY粗提物的純化；制備抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY。
2.如權(quán)利要求
1所述的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY，其特征在于該抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY的制備方法包括下列步驟篩選引致非典型肺炎(SARS)的主要致病病毒，在篩選和分類(lèi)組合各種致病病毒的基礎(chǔ)上，分別制備單一或復(fù)合的非典型肺炎(SARS)致病病毒抗原將Vero E6細(xì)胞接種于FCSDMEM培養(yǎng)液中，將上述培養(yǎng)液置于培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞，然后棄掉培養(yǎng)液，將各組別的SARS致病病毒毒株分別用FCS和青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋?zhuān)∠♂屢杭尤爰?xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)收獲病毒，放入高速離心機(jī)中高速離心分離，收集上清，再滅活所培養(yǎng)的SARS致病病毒，將培養(yǎng)好的各組別的病毒單獨(dú)或按適當(dāng)比例混合，再按1∶1比例或其他適當(dāng)比例分別加入福氏佐劑，置入高速勻漿機(jī)中高速粉碎勻化，通過(guò)高速攪拌形成油包水溶液，即制成單一或復(fù)合非典型肺炎(SARS)致病病毒抗原；制備免疫蛋用各種單一或復(fù)合非典型肺炎(SARS)致病病毒抗原或非典型肺炎(SARS)繼發(fā)感染細(xì)菌抗原，分別對(duì)產(chǎn)蛋禽類(lèi)進(jìn)行免疫，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，一個(gè)月計(jì)免疫三次，第一次免疫20天后，檢取免疫后的禽類(lèi)所產(chǎn)免疫蛋，并對(duì)相應(yīng)不同的抗原，對(duì)所檢取的免疫蛋進(jìn)行編碼標(biāo)記；制備抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY粗提物用流動(dòng)水洗凈免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋機(jī)將檢取的免疫蛋打碎，用蛋黃篩篩濾去蛋清，留下蛋黃，攪拌均勻，測(cè)量所得的蛋黃的體積，按此體積的4-6倍加入蒸餾水，進(jìn)行稀釋并混合均勻，用NaOH溶液調(diào)整pH至5.5-6.0之間，將調(diào)整好pH值的稀釋液進(jìn)一步充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后將其冷卻至2-6℃，靜置12小時(shí)-24小時(shí)，將稀釋液加入高速離心分離機(jī)中，離心分離20分鐘，將分離所得的上清再加入超濾器中進(jìn)行超濾并濃縮10-20倍，按0.1～0.3％的比例將海藻酸鈉加入濃縮后的漿料中，充分?jǐn)嚢?，再加入高速離心機(jī)中離心，取上清，去除脂蛋白，將離心分離后的漿料加入超濾機(jī)，過(guò)超微膜，進(jìn)行過(guò)濾除菌，將過(guò)濾除菌后的產(chǎn)品用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，即制得抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY粗提物干粉成品，最后，將所制備的對(duì)應(yīng)不同抗原的特異性IgY粗提物進(jìn)行編碼標(biāo)記；抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY粗提物的純化將以上工藝所制取的抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY粗提物分別先后過(guò)離子交換柱和凝膠層析柱，即得純IgY；
3.如權(quán)利要求
1或2所述的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY，其特征在于該抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY的制備方法中引致非典型肺炎(SARS)的致病病毒是冠狀病毒。
4.如權(quán)利要求
3所述的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY，其特征在于該冠狀病毒是一種變種的冠狀病毒，包括它的多種變異型，有香港傳播的香港1型冠狀病毒、香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒、香港4型冠狀病毒，北京傳播的多種型冠狀病毒，加拿大型冠狀病毒，新加坡傳播的冠狀病毒，越南傳播的冠狀病毒。
5.如權(quán)利要求
1或2所述的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY，其特征在于該抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY的制備方法中制備免疫蛋所采用的產(chǎn)蛋禽類(lèi)包括母雞，母鴨，母鵝、火雞、鴕鳥(niǎo)。
6.如權(quán)利要求
2所述的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY，其特征在于該抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY的制備方法中所述非典型肺炎(SARS)一種或多種致病病毒抗原的制備是這樣的首先按權(quán)利要求
2所述的方法培養(yǎng)優(yōu)選的一種或多種病毒，選擇一種致病病毒時(shí)，直接加入福氏佐劑制作單一抗原；選擇多種致病病毒時(shí)，則先將培養(yǎng)好的一種以上SARS致病病毒按1-10∶1-10或1-10∶1-10∶1-10或1-10∶1-10∶1-10∶1-10或1-10∶1-10∶1-10∶1-10∶1-10依此類(lèi)推的比例均勻混合，然后加入福氏佐劑制成復(fù)合抗原。
7.如權(quán)利要求
1或2所述的抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY，其特征在于該抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY可以制成臨床可接受的劑型。
8.抗香港1型冠狀病毒、香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒、香港4型冠狀病毒多種致病病毒特異性IgY，其特征在于這種抗多種致病病毒特異性IgY的制備方法包括下列步驟分別用香港1型冠狀病毒、香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒、香港4型冠狀病毒制備抗原，首先將Vero E6細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml，將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞，然后棄掉培養(yǎng)液，將香港1型冠狀病毒、香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒、香港4型冠狀病毒毒株分別用2％FCS和1％青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋至100 TCID 50/ml，取此稀釋液10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，待細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)收獲病毒，收獲病毒時(shí)將培養(yǎng)液凍融三次，收集培養(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清，再加入甲醛至0.1％的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過(guò)24小時(shí)分別滅活這4種培養(yǎng)的SARS病毒，培養(yǎng)好的滅活病毒在4℃或-20℃保存，然后，將培養(yǎng)好的滅活的香港1型冠狀病毒、香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒、香港4型冠狀病毒，按1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合均勻，再按1∶1比例或其他適當(dāng)比例加入福氏佐劑，置入高速勻漿機(jī)中以10000～30000rpm轉(zhuǎn)速高速粉碎勻化，通過(guò)高速攪拌形成油包水溶液，制得含四種冠狀病毒抗原的復(fù)合抗原；用制得的冠狀病毒復(fù)合抗原對(duì)產(chǎn)蛋母雞進(jìn)行免疫，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，計(jì)免疫三次，第一次免疫20天后，檢取母雞所產(chǎn)的免疫蛋；用流動(dòng)水洗凈免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋機(jī)將檢取的免疫蛋打碎，用蛋黃篩篩濾去蛋清，留下蛋黃，攪拌均勻，測(cè)量所得的蛋黃的體積，按此體積的4-6倍加入蒸餾水，進(jìn)行稀釋并混合均勻，用NaOH溶液調(diào)整pH至5.5-6.0之間，將調(diào)整好pH值的稀釋液進(jìn)一步充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后將其冷卻至2-6℃，靜置12小時(shí)-24小時(shí)，將稀釋液加入高速離心分離機(jī)中，離心分離20分鐘，將分離所得的上清再加入超濾器中進(jìn)行超濾并濃縮10-20倍，按0.1～0.3％的比例將海藻酸鈉加入濃縮后的漿料中，充分?jǐn)嚢?，再加入高速離心機(jī)中離心，取上清，去除脂蛋白，將離心分離后的漿料加入超濾機(jī)，過(guò)超微膜，進(jìn)行過(guò)濾除菌，將過(guò)濾除菌后的產(chǎn)品用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，制得抗香港1型冠狀病毒、香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒和抗香港4型冠狀病毒特異性復(fù)合IgY粗提物干粉，將以上IgY粗提物溶解于pH7.0、0.01MPB，先后經(jīng)DEAE-SephadexA50柱層析和SephadexG200凝膠柱層析，把粗提物純化，即得抗香港1型冠狀病毒、香港2型冠狀病毒、香港3型冠狀病毒和抗香港4型冠狀病毒特異性復(fù)合純IgY。
9.一種抗北京型冠狀病毒特異性IgY，其特征在于這種抗一種致病病毒的特異性IgY的制備方法包括下列步驟用北京型冠狀病毒制備抗原，首先將Vero E6細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml，將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞，然后棄掉培養(yǎng)液，將北京傳播的有代表性的冠狀病毒毒株用2％FCS和1％青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋至100 TCID 50/ml，取此稀釋液10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，待細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)收獲病毒，收獲病毒時(shí)將培養(yǎng)液凍融三次，收集培養(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清，再加入甲醛至0.1％的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過(guò)24小時(shí)滅活這4種培養(yǎng)的SARS病毒，培養(yǎng)好的滅活病毒在4℃或-20℃保存，再按1∶1比例或其他適當(dāng)比例加入福氏佐劑，置入高速勻漿機(jī)中以10000～30000rpm轉(zhuǎn)速高速粉碎勻化，通過(guò)高速攪拌形成油包水溶液，制得勻質(zhì)抗原；用所制得的北京型冠狀病毒抗原對(duì)產(chǎn)蛋禽類(lèi)進(jìn)行免疫，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，計(jì)免疫三次，第一次免疫20天后，檢取禽類(lèi)所產(chǎn)的免疫蛋；用流動(dòng)水洗凈免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋機(jī)將檢取的免疫蛋打碎，用蛋黃篩篩濾去蛋清，留下蛋黃，攪拌均勻，測(cè)量所得的蛋黃的體積，按此體積的4-6倍加入蒸餾水，進(jìn)行稀釋并混合均勻，用NaOH溶液調(diào)整pH至5.5-6.0之間，將調(diào)整好pH值的稀釋液進(jìn)一步充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后將其冷卻至2-6℃，靜置12小時(shí)-24小時(shí)，將稀釋液加入高速離心分離機(jī)中，離心分離20分鐘，將分離所得的上清再加入超濾器中進(jìn)行超濾并濃縮10-20倍，按0.1～0.3％的比例將海藻酸鈉加入濃縮后的漿料中，充分?jǐn)嚢?，再加入高速離心機(jī)中離心，取上清，去除脂蛋白，將離心分離后的漿料加入超濾機(jī)，過(guò)超微膜，進(jìn)行過(guò)濾除菌，將過(guò)濾除菌后的產(chǎn)品用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，制得抗北京型冠狀病毒特異性IgY粗提物干粉，將以上IgY粗提物溶解于pH7.0、0.01MPB，經(jīng)DEAE-SephadexA50柱層析和SephadexG200凝膠柱層析，把粗提物純化，即得抗北京型冠狀病毒特異性純IgY。
10.一種抗加拿大型冠狀病毒特異性IgY，其特征在于該抗加拿大型冠狀病毒特異性IgY的制備方法包括下列步驟用收集到的加拿大地區(qū)傳播的有代表性的非典型肺炎(SARS)致病冠狀病毒制備抗原，首先將Vero E6細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml，將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞，然后棄掉培養(yǎng)液，將加拿大傳播的有代表性的冠狀病毒毒株用2％FCS和1％青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋至100 TCID 50/ml，取此稀釋液10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，待細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)收獲病毒，收獲病毒時(shí)將培養(yǎng)液凍融三次，收集培養(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清，再加入甲醛至0.1％的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過(guò)24小時(shí)滅活這4種培養(yǎng)的SARS病毒，培養(yǎng)好的滅活病毒在4℃或-20℃保存，再按1∶1比例或其他適當(dāng)比例加入福氏佐劑，置入高速勻漿機(jī)中以10000～30000rpm轉(zhuǎn)速高速粉碎勻化，通過(guò)高速攪拌即制成油包水溶液狀致病病毒抗原；用制得的病毒抗原對(duì)產(chǎn)蛋禽類(lèi)進(jìn)行免疫，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，計(jì)免疫三次，第一次免疫20天后，檢取禽類(lèi)所產(chǎn)的免疫蛋；用流動(dòng)水洗凈免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋機(jī)將檢取的免疫蛋打碎，用蛋黃篩篩濾去蛋清，留下蛋黃，攪拌均勻，測(cè)量所得的蛋黃的體積，按此體積的4-6倍加入蒸餾水，進(jìn)行稀釋并混合均勻，用NaOH溶液調(diào)整pH至5.5-6.0之間，將調(diào)整好pH值的稀釋液進(jìn)一步充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后將其冷卻至2-6℃，靜置12小時(shí)-24小時(shí)，將稀釋液加入高速離心分離機(jī)中，離心分離20分鐘，將分離所得的上清再加入超濾器中進(jìn)行超濾并濃縮10-20倍，按0.1～0.3％的比例將海藻酸鈉加入濃縮后的漿料中，充分?jǐn)嚢?，再加入高速離心機(jī)中離心，取上清，去除脂蛋白，將離心分離后的漿料加入超濾機(jī)，過(guò)超微膜，進(jìn)行過(guò)濾除菌，即得抗加拿大型冠狀病毒特異性IgY粗提物；將以上IgY粗提物經(jīng)DEAE-SephadexA50柱層析和SephadexG200凝膠柱層析，得到抗加拿大型冠狀病毒特異性純IgY。
11.一種抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY制劑，其特征在于該特異性IgY制劑的制備方法包括下列步驟將用以上方法制備的抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY配以蒸餾水或生理鹽水調(diào)配成濃度0.01％以上的溶劑，制成一種新型霧化劑，加入各種霧化器中，經(jīng)過(guò)霧化后供非典型肺炎患者吸入呼吸道和肺部。
12.一種抗非典型肺炎(SARS)特異性鴨IgY，其特征在于該特異性鴨IgY的制備方法包括下列步驟選具高免疫應(yīng)答能力的良種鴨用肺炎雙球菌制作抗原，分別免疫1000只母鴨，每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，共三次；于第一次注射后第7個(gè)月，把這些鴨所產(chǎn)的蛋標(biāo)記后按常規(guī)方法分別提取其中的IgY，以ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))檢測(cè)所制得的IgY的效價(jià)；選出其中能制得IgY效價(jià)≥256的免疫應(yīng)答能力特別強(qiáng)的鴨200只，再用這批鴨所產(chǎn)的蛋孵出優(yōu)良鴨種，待其長(zhǎng)大至2-3個(gè)月，作為優(yōu)選的高免疫應(yīng)答能力的特種母鴨，并挑選其中40只；非典型肺炎(SARS)致病病毒復(fù)合抗原的制備將Vero E6細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml。將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞，然后棄掉培養(yǎng)液，將收集到的香港地區(qū)4種不同的SARS冠狀病毒毒株用2％FCS和1％青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋至100 TCID50/ml，取此稀釋液10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，待細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)收獲病毒，收獲病毒時(shí)將培養(yǎng)瓶?jī)鋈谌?，收集培養(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清，再加入甲醛至0.1％的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過(guò)24小時(shí)分別滅活這4種培養(yǎng)的SARS病毒，培養(yǎng)好的滅活病毒在4℃或-20℃保存，然后，將培養(yǎng)好的香港地區(qū)4種不同的冠狀病毒按1∶1∶1∶1的比例或其他適當(dāng)比例混合，再按1∶1比例或其他適當(dāng)比例加入福氏佐劑，置入高速勻漿機(jī)中以10000～30000rpm轉(zhuǎn)速高速粉碎勻化，通過(guò)高速攪拌形成油包水溶液，即制成非典型肺炎(SARS)致病病毒復(fù)合抗原；分別對(duì)優(yōu)選的特種母鴨進(jìn)行強(qiáng)化免疫用所制取的非典型肺炎(SARS)冠狀病毒復(fù)合抗原，采用皮下注射和翅靜脈注射相結(jié)合的強(qiáng)化免疫法，分別對(duì)優(yōu)選的特種母鴨進(jìn)行免疫，每只母鴨每次注射量達(dá)到1-2ml抗原，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，一個(gè)月內(nèi)共免疫三次；第一次免疫20天后，檢取母鴨所產(chǎn)免疫蛋1000只；抗非典型肺炎(SARS)特異性鴨IgY粗提物的制備用打蛋機(jī)將檢取的免疫蛋打碎，用蛋黃篩篩濾去蛋清，留下蛋黃，攪拌均勻；測(cè)量所得的蛋黃的體積，按此體積的4-6倍加入蒸餾水，進(jìn)行稀釋并混合均勻，用NaOH溶液調(diào)整pH至5.5-6.0之間，將調(diào)整好pH值的稀釋液進(jìn)一步充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后將其冷卻至2-6℃，靜置12小時(shí)；將稀釋液加入高速離心分離機(jī)中，以8000-12000rpm轉(zhuǎn)速高速離心分離20分鐘；將分離所得的上清再入超濾器中進(jìn)行超濾并濃縮15倍，按0.2％的比例將海藻酸鈉加入濃縮后的漿料中，充分?jǐn)嚢?；再加入高速離心機(jī)離心，取上清，去除脂蛋白，將離心分離后的漿料加入超濾機(jī)，過(guò)超微膜，進(jìn)行過(guò)濾除菌，將過(guò)濾除菌后的產(chǎn)品用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，即制得抗非典型肺炎(SARS)特異性鴨IgY粗提物干粉成品，過(guò)離子交換柱和凝膠交換柱對(duì)抗非典型肺炎(SARS)特異性鴨IgY粗提物進(jìn)行純化，即得純IgY。
13.一種抗非典型肺炎(SARS)特異性鵝IgY，其特征在于該特異性鵝IgY的制備方法包括下列步驟選具高免疫應(yīng)答能力的良種鵝用肺炎雙球菌制作抗原，分別免疫1000只母鵝，每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，共三次；于第一次注射后第7個(gè)月，把這些鵝所產(chǎn)的蛋標(biāo)記后按常規(guī)方法分別提取其中的IgY，以ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))檢測(cè)所制得的IgY的效價(jià)；選出其中能制得IgY效價(jià)≥256的免疫應(yīng)答能力特別強(qiáng)的鵝200只，再用這批鵝所產(chǎn)的蛋孵出優(yōu)良鵝種，待其長(zhǎng)大至2-3個(gè)月，作為優(yōu)選的高免疫應(yīng)答能力的特種母鵝，并挑選其中40只；非典型肺炎(SARS)致病病毒復(fù)合抗原的制備將Vero E6細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml。將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞，然后棄掉培養(yǎng)液，將收集到的香港地區(qū)4種不同的SARS冠狀病毒毒株用2％FCS和1％青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋至100 TCID50/ml，取此稀釋液10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，待細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)收獲病毒，收獲病毒時(shí)將培養(yǎng)瓶?jī)鋈谌?，收集培養(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清，再加入甲醛至0.1％的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過(guò)24小時(shí)分別滅活這4種培養(yǎng)的SARS病毒，培養(yǎng)好的滅活病毒在4℃或-20℃保存，然后，將培養(yǎng)好的香港地區(qū)4種不同的冠狀病毒按1∶1∶1∶1的比例或其他適當(dāng)比例混合，再按1∶1比例或其他適當(dāng)比例加入福氏佐劑，置入高速勻漿機(jī)中以10000～30000rpm轉(zhuǎn)速高速粉碎勻化，通過(guò)高速攪拌形成油包水溶液，即制成非典型肺炎(SARS)致病病毒復(fù)合抗原；分別對(duì)優(yōu)選的特種母鵝進(jìn)行強(qiáng)化免疫用所制取的非典型肺炎(SARS)冠狀病毒復(fù)合抗原，采用皮下注射和翅靜脈注射相結(jié)合的強(qiáng)化免疫法，分別對(duì)優(yōu)選的特種母鵝進(jìn)行免疫，每只母鵝每次注射量達(dá)到2-10ml抗原，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，一個(gè)月內(nèi)共免疫三次；第一次免疫20天后，檢取母鵝所產(chǎn)免疫蛋1000只；抗非典型肺炎(SARS)特異性鵝IgY粗提物的制備用打蛋機(jī)將檢取的免疫蛋打碎，用蛋黃篩篩濾去蛋清，留下蛋黃，攪拌均勻；測(cè)量所得的蛋黃的體積，按此體積的4-6倍加入蒸餾水，進(jìn)行稀釋并混合均勻，用NaOH溶液調(diào)整pH至5.5-6.0之間，將調(diào)整好pH值的稀釋液進(jìn)一步充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后將其冷卻至2-6℃，靜置12小時(shí)；將稀釋液加入高速離心分離機(jī)中，以8000-12000rpm轉(zhuǎn)速高速離心分離20分鐘；將分離所得的上清再入超濾器中進(jìn)行超濾并濃縮15倍，按0.2％的比例將海藻酸鈉加入濃縮后的漿料中，充分?jǐn)嚢?；再加入高速離心機(jī)離心，取上清，去除脂蛋白，將離心分離后的漿料加入超濾機(jī)，過(guò)超微膜，進(jìn)行過(guò)濾除菌，將過(guò)濾除菌后的產(chǎn)品用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，即制得抗非典型肺炎(SARS)特異性鵝IgY粗提物干粉成品，過(guò)離子交換柱和凝膠交換柱對(duì)抗非典型肺炎(SARS)特異性鵝IgY粗提物進(jìn)行純化，即得純IgY。
14.一種抗非典型肺炎(SARS)特異性鴕鳥(niǎo)IgY，其特征在于該特異性鴕鳥(niǎo)IgY的制備方法包括下列步驟選具高免疫應(yīng)答能力的良種產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)用肺炎雙球菌制作抗原，分別免疫1000只產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)，每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，共三次；于第一次注射后第7個(gè)月，把這些產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)所產(chǎn)的蛋標(biāo)記后按常規(guī)方法分別提取其中的IgY，以ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))檢測(cè)所制得的IgY的效價(jià)；選出其中能制得IgY效價(jià)≥256的免疫應(yīng)答能力特別強(qiáng)的產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)200只，再用這批產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)所產(chǎn)的蛋孵出優(yōu)良鴕鳥(niǎo)種，待其長(zhǎng)大至2-3個(gè)月，作為優(yōu)選的高免疫應(yīng)答能力的特種產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)，并挑選其中40只；非典型肺炎(SARS)致病病毒復(fù)合抗原的制備將Vero E6細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml。將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞，然后棄掉培養(yǎng)液，將收集到的香港地區(qū)4種不同的SARS冠狀病毒毒株用2％FCS和1％青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋至100 TCID50/ml，取此稀釋液10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，待細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)收獲病毒，收獲病毒時(shí)將培養(yǎng)瓶?jī)鋈谌危占囵B(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清，再加入甲醛至0.1％的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過(guò)24小時(shí)分別滅活這4種培養(yǎng)的SARS病毒，培養(yǎng)好的滅活病毒在4℃或-20℃保存，然后，將培養(yǎng)好的香港地區(qū)4種不同的冠狀病毒按1∶1∶1∶1的比例或其他適當(dāng)比例混合，再按1∶1比例或其他適當(dāng)比例加入福氏佐劑，置入高速勻漿機(jī)中以10000～30000rpm轉(zhuǎn)速高速粉碎勻化，通過(guò)高速攪拌形成油包水溶液，即制成非典型肺炎(SARS)致病病毒復(fù)合抗原；分別對(duì)優(yōu)選的特種產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)進(jìn)行強(qiáng)化免疫用所制取的非典型肺炎(SARS)冠狀病毒復(fù)合抗原，采用皮下注射和翅靜脈注射相結(jié)合的強(qiáng)化免疫法，分別對(duì)優(yōu)選的特種產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)進(jìn)行免疫，每只產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)每次注射量達(dá)到5-20ml抗原，每隔二周再?gòu)?qiáng)化注射一次，一個(gè)月內(nèi)共免疫三次；第一次免疫20天后，檢取產(chǎn)蛋鴕鳥(niǎo)所產(chǎn)免疫蛋1000只；抗非典型肺炎(SARS)特異性鴕鳥(niǎo)IgY粗提物的制備用打蛋機(jī)將檢取的免疫蛋打碎，用蛋黃篩篩濾去蛋清，留下蛋黃，攪拌均勻；測(cè)量所得的蛋黃的體積，按此體積的4-6倍加入蒸餾水，進(jìn)行稀釋并混合均勻，用NaOH溶液調(diào)整pH至5.5-6.0之間，將調(diào)整好pH值的稀釋液進(jìn)一步充分?jǐn)嚢杈鶆颍缓髮⑵淅鋮s至2-6℃，靜置12小時(shí)；將稀釋液加入高速離心分離機(jī)中，以8000-12000rpm轉(zhuǎn)速高速離心分離20分鐘；將分離所得的上清再入超濾器中進(jìn)行超濾并濃縮15倍，按0.2％的比例將海藻酸鈉加入濃縮后的漿料中，充分?jǐn)嚢?；再加入高速離心機(jī)離心，取上清，去除脂蛋白，將離心分離后的漿料加入超濾機(jī)，過(guò)超微膜，進(jìn)行過(guò)濾除菌，將過(guò)濾除菌后的產(chǎn)品用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，即制得抗非典型肺炎(SARS)特異性鴕鳥(niǎo)IgY粗提物干粉成品，過(guò)離子交換柱和凝膠交換柱對(duì)抗非典型肺炎(SARS)特異性鴕鳥(niǎo)IgY粗提物進(jìn)行純化，即得純IgY。
15.一種抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY制劑，其特征在于該制劑中每升含有抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY 1-100克。
16.一種抗非典型肺炎(SARS)霧化劑的制備方法，其特征在于該方法為抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY干粉300重量份加入小型攪拌機(jī)中充分混和；按以下配方調(diào)配30000重量份抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY組合溶液抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY 300重量份阿斯巴甜 36重量份香橙香精 90重量份水蜜桃香精 30重量份生理鹽水 加至30000重量份先調(diào)制生理鹽水25000重量份，然后加入阿斯巴甜和香精，攪拌均勻后，再邊攪拌邊緩緩加入IgY；接著，加生理鹽水至30000重量份，充分?jǐn)嚢杈鶆颍粶y(cè)量溶液的pH值，用1.0NNaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5；經(jīng)細(xì)菌過(guò)濾除菌，然后采用無(wú)菌瓶灌裝抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY噴霧劑，每支裝20ml。
17.一種抗非典型肺炎(SARS)噴霧劑的制備方法，其特征在于該方法為抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY干粉300重量份加入小型攪拌機(jī)中充分混和；按以下配方調(diào)配200000重量份抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY組合溶液；抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY 300重量份阿斯巴甜 240重量份香橙香精 600重量份水蜜桃香精 200重量份薄荷香精 1400重量份蒸餾水 加至200000重量份先取蒸餾水180000重量份，然后分別加入阿斯巴甜、香精，攪拌均勻，再邊攪拌邊緩緩加入IgY；接著加蒸餾水至200000重量份，充分?jǐn)嚢杈鶆?，測(cè)量溶液pH值，根據(jù)所測(cè)的pH值用1.0N NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5；溶液調(diào)配好后，在壓力罐生產(chǎn)線上灌裝手動(dòng)定量壓力噴霧罐，每支噴霧罐灌足10ml后，再充入壓力氮?dú)饣蛘叻锇鹤鳛橹苿?拋射劑)，裝上定量閥門(mén)，密封，即得。
18.一種抗非典型肺炎(SARS)常壓噴霧劑的制備方法，其特征在于該方法為抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性純IgY干粉300重量份，加入小型攪拌機(jī)中充分混和；按以下配方調(diào)配200000重量份抗非典型肺炎(SARS)致病病毒IgY組合溶液；抗非典型肺炎(SARS)致病病毒特異性IgY 300重量份阿斯巴甜 240重量份香橙香精 600重量份水蜜桃香精 200重量份薄荷香精 1400重量份蒸餾水 加至200000重量份先取蒸餾水180000重量份，然后分別加入阿斯巴甜、香精，攪拌均勻，再邊攪拌邊緩緩加入復(fù)合IgY；接著加蒸餾水至200000重量份，充分?jǐn)嚢杈鶆?，測(cè)量溶液pH值，根據(jù)所測(cè)的pH值用1.0N NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5間；經(jīng)細(xì)菌過(guò)濾除菌，灌裝手撳定量常壓噴霧罐，每支灌裝滿(mǎn)10ml。
19.一種抗非典型肺炎(SARS)和口腔炎癥噴霧劑的制備方法，其特征在于該方法為抗非典型肺炎(SARS)特異性復(fù)合IgY干粉150重量份，抗齲齒菌IgY干粉150重量份，加入小型攪拌機(jī)中充分混和，制成抗非典型肺炎(SARS)和口腔炎癥復(fù)合IgY干粉300重量份；按以下配方調(diào)配200000重量份抗非典型肺炎(SARS)和口腔炎癥復(fù)合IgY組合溶液；抗非典型肺炎(SARS)和口腔炎癥復(fù)合IgY 300重量份阿斯巴甜 240重量份香橙香精 600重量份水蜜桃香精 200重量份薄荷香精 1400重量份蒸餾水 加至200000重量份先取蒸餾水180000重量份，然后分別加入阿斯巴甜、香精，攪拌均勻，再邊攪拌邊緩緩加入復(fù)合IgY；接著加蒸餾水至200000重量份，充分?jǐn)嚢杈鶆颍瑴y(cè)量溶液pH值，根據(jù)所測(cè)的pH值用1.0N NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5間；經(jīng)細(xì)菌過(guò)濾除菌，灌裝手撳定量常壓噴霧罐，每支灌裝滿(mǎn)10ml。
專(zhuān)利摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY及其制備方法和制劑。本發(fā)明制備方法包括下列步驟篩選出引致非典型肺炎(SARS)的主要致病病毒，在篩選和分類(lèi)組合各種致病病毒的基礎(chǔ)上，分別制備單一或復(fù)合的致病病毒抗原，制備免疫蛋，制備抗非典型肺炎(SARS)各種致病病毒特異性IgY粗提物，抗非典型肺炎(SARS)各種致病病毒特異性IgY粗提物的純化，本發(fā)明抗非典型肺炎(SARS)特異性IgY多種制劑用于非典型肺炎(SARS)的預(yù)防和治療具有特效、安全、使用方便的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12N7/00GKCN1450086SQ03136101
公開(kāi)日2003年10月22日 申請(qǐng)日期2003年5月13日
發(fā)明者包晟 申請(qǐng)人:雅臣藥業(yè)集團(tuán)(遠(yuǎn)東)有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan