專利名稱:發(fā)酵生產(chǎn)低神經(jīng)酸、epa含量的花生四烯酸油脂的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)，具體涉及一種生產(chǎn)含低神經(jīng)酸、低二十碳五烯酸(EPA)的 花生四烯酸油脂的方法。
背景技術(shù)：
花生四烯酸，英文為Arachidonic acid，簡(jiǎn)稱AA，是5，8，11，14-二十碳四烯酸，它 是一種人體必需脂肪酸，屬于n-6系列的多不飽和脂肪酸，簡(jiǎn)記為20 4(n-6)大量研究表 明，人體缺乏多不飽和脂肪酸將引起機(jī)體功能失調(diào)，導(dǎo)致某些疾病，而補(bǔ)充多不飽和脂肪酸 則可預(yù)防或治療這些疾病，如嬰兒缺乏花生四烯酸和DHA，可造成永久性智力低下和視力障 礙，6-12歲兒童的皮膚瘙癢、眼角干燥、上課注意力不集中，數(shù)學(xué)成績(jī)下降等癥狀與其血漿 中花生四烯酸和DHA含量低有明顯的正相關(guān)。同時(shí)研究表明，花生四烯酸對(duì)高血壓、高血 脂、糖尿病、病毒感染等疾病的預(yù)防和治療也有顯著的效果。世界衛(wèi)生組織和國(guó)際糧農(nóng)組 織針對(duì)人類花生四烯酸攝入量的不足，建議在嬰兒配方奶粉中添加花生四烯酸，提高嬰幼 兒的健康水平。因此，花生四烯酸既是一種營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，同時(shí)也是人類重要的保健品。目前 市場(chǎng)銷售的花生四烯酸產(chǎn)品，主要從深海魚油中提取，由于原料的限制，花生四烯酸含量低 且很不穩(wěn)定，而且產(chǎn)量低、成本高，無(wú)法進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)。近年來(lái)，馬泰克生物科學(xué)有限公 司在中國(guó)申請(qǐng)了一項(xiàng)專利，公開(kāi)號(hào)CN1175976A(名稱花生四烯酸及其生產(chǎn)和使用方法)， 它采用高山被孢霉菌種，通過(guò)發(fā)酵法進(jìn)行生產(chǎn)，但仍然存在菌種活性低、油脂產(chǎn)量低、花生 四烯酸生產(chǎn)能力低等缺點(diǎn)。武漢烯王生物工程有限公司在中國(guó)申請(qǐng)了一項(xiàng)專利，公開(kāi)號(hào) CN1362522A (名稱用離子束生物工程誘變菌生產(chǎn)含花生四烯酸油脂的方法)，它采用經(jīng)離 子注入法誘變篩選的一株高山被孢霉菌種，通過(guò)發(fā)酵法進(jìn)行生產(chǎn)，但因采用了離子注入法 誘變菌進(jìn)行生產(chǎn)，不為消費(fèi)者所認(rèn)同。而且目前所有公開(kāi)的專利文獻(xiàn)均未對(duì)所生產(chǎn)的花生 四烯酸混合油脂中的神經(jīng)酸的含量進(jìn)行限制，而經(jīng)研究表明神經(jīng)酸對(duì)嬰幼兒的發(fā)育具有不 良影響，國(guó)外的消費(fèi)群體已對(duì)花生四烯酸混合油脂中的神經(jīng)酸含量提出了限量要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種發(fā)酵生產(chǎn)低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法， 該方法得到的產(chǎn)品具有花生四烯酸含量高，神經(jīng)酸、二十碳五烯酸(EPA)含量低的特點(diǎn)。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是發(fā)酵生產(chǎn)低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四 烯酸油脂的方法，其特征在于它包括如下步驟
1)、菌種活化
制備活化培養(yǎng)基200g馬鈴薯，水1000ml，10-20g葡萄糖，17-20g瓊脂，5-10g氮 源；
所述的氮源包括但不限于酵母膏、酵母粉、花生粉、牛肉膏、蛋白胨、魚粉、硝酸鉀 或硝酸鈉；
將深黃被孢霉(Mortierella isabellina)在活化培養(yǎng)基斜面進(jìn)行菌種活化培養(yǎng)，
325-280C，培養(yǎng)箱濕度40-50%，培養(yǎng)3_4天，得活化菌種，備用；
2)搖瓶菌種制備
將活化培養(yǎng)基上的活化菌種用無(wú)菌水振蕩洗脫后接入種子培養(yǎng)基搖瓶中，種子培 養(yǎng)基搖瓶中有搖瓶培養(yǎng)基；搖瓶培養(yǎng)基配方為18-20g/L葡萄糖，10-15g/L酵母膏；通入壓 縮空氣，通氣量為0. 4-0. 6VVM，搖床轉(zhuǎn)速為100-250rpm，培養(yǎng)溫度為20_30°C，振蕩培養(yǎng)3_5 天；從培養(yǎng)箱中取出后置于4-10°C條件下保持60-120min，得搖瓶菌種，備用；
3)發(fā)酵
將制得的搖瓶菌種接種于有發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶或發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量 為搖瓶菌種所占發(fā)酵培養(yǎng)基體積的8-20%，發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳配方為葡萄糖10-30g/L， 酵母膏10-20g/L，硝酸鈉lg/L ；用l-5mol/L的酸(硫酸、草酸或檸檬酸等)或堿(氫氧化鈉 或氨水等)調(diào)節(jié)pH至5. 5-7 ；通入潔凈壓縮空氣，通氣量為0. 4-0. 6VVM ；轉(zhuǎn)速100-200rpm， 壓力0. 01-0. 05Mpa,溫度20_30°C，期間每隔24h補(bǔ)充10g/L的碳源，每48h補(bǔ)充lg/L的 硝酸鈉，發(fā)酵培養(yǎng)7-9天，收獲菌體，從菌體中回收提取低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油 脂。
從菌體中回收提取目低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法包括a、干法 以抽真空加熱脫水的方式烘干菌體，經(jīng)粉碎后以有機(jī)溶劑萃取制得毛油，并經(jīng)精煉后制得 成品(低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂)；b、濕法以濕的菌體直接破壁后有機(jī)溶劑萃 取制得毛油，并經(jīng)精煉后制得成品(低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂)。
有機(jī)溶劑為正己烷或丁烷等。
所得產(chǎn)品(低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂)中，包含至少約60% (質(zhì)量) 甘油三脂形式的花生四烯酸，EPA的含量不超過(guò)花生四烯酸含量的十五分之一，神經(jīng)酸的含 量不超過(guò)總油脂(產(chǎn)品)質(zhì)量含量的3%。
采用上述技術(shù)方案，使得本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)
1、采用深黃被孢霉作為發(fā)酵生產(chǎn)菌種，油脂生產(chǎn)能力可以提高1-3倍，花生四烯 酸產(chǎn)量可以提高1-3倍。
2、發(fā)酵條件簡(jiǎn)單，發(fā)酵過(guò)程利于控制。
3、可以獲得高品質(zhì)的花生四烯酸混合油脂。
4、低神經(jīng)酸、低二十碳五烯酸(EPA)。
該方法所用得產(chǎn)品是人類，特別是嬰幼兒群體的一種營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，是一種重要的 保健品。
具體實(shí)施方式
為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的 內(nèi)容不僅僅局限于下面的實(shí)施例。
本發(fā)明所提供的深黃被孢霉(Mortierella isabellina)，為一株經(jīng)自然分離篩選 得到的野生菌種，已保藏在中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號(hào)3. 3410 ；為市售產(chǎn)
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實(shí)施例1 (搖瓶發(fā)酵)
1)、菌種活化[0026]制備活化培養(yǎng)基活化培養(yǎng)基為以馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng) 基，額外添加氮源，活化培養(yǎng)基的配方為200g馬鈴薯，水1000ml，IOg葡萄糖，17g瓊脂，5g 酵母膏；
具體為稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加水IOOOml煮沸半個(gè)小時(shí)，紗布過(guò)濾， 再加IOg葡萄糖、17g瓊脂和5g酵母膏，充分溶解后趁熱紗布過(guò)濾，分裝試管，每試管約 5-10ml (視試管大小而定)，15磅蒸氣(121°C)滅菌20分鐘左右后取出試管擺斜面，冷卻 后貯存?zhèn)溆谩?br>將深黃被孢霉(Mortierella isabellina)在活化培養(yǎng)基斜面進(jìn)行菌種活化培養(yǎng)， 250C，培養(yǎng)箱濕度40 %，培養(yǎng)4天，得活化菌種，備用；
2)搖瓶菌種制備
將活化培養(yǎng)基上的活化菌種用無(wú)菌水振蕩洗脫后接入種子培養(yǎng)基搖瓶中，種子培 養(yǎng)基搖瓶中有搖瓶培養(yǎng)基；搖瓶培養(yǎng)基配方為20g/L葡萄糖，10g/L酵母膏；通入壓縮空 氣，通氣量為0. 5VVM(每分鐘相對(duì)于單位發(fā)酵體積的通氣量)，搖床轉(zhuǎn)速為160rpm，培養(yǎng)溫 度為27°C，振蕩培養(yǎng)4天；從培養(yǎng)箱中取出后置于4°C條件下保持60min，得搖瓶菌種，備 用；
3)搖瓶發(fā)酵
將制得的搖瓶菌種接種于有發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量為搖瓶菌 種所占發(fā)酵培養(yǎng)基體積的10% (ν/ν)，搖瓶裝液量為20% (搖瓶菌種和發(fā)酵培養(yǎng)基占搖瓶 體積的20%)；發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖20g/L，酵母膏15g/L，硝酸鈉lg/L;用2mol/L硫 酸調(diào)節(jié)PH為5. 5 ；通入潔凈壓縮空氣，通氣量為0. 5VVM ；轉(zhuǎn)速200rpm，壓力0. 02Mpa，溫度 250C，期間每隔24h補(bǔ)充10g/L的碳源(葡萄糖)，每48h補(bǔ)充lg/L的硝酸鈉，發(fā)酵培養(yǎng)7 天，收獲菌體，得到菌體量為29. 3g/L，從菌體中回收提取低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸 油脂。
從菌體中回收提取目低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法為干法以抽 真空加熱脫水的方式烘干菌體，經(jīng)粉碎后以有機(jī)溶劑正己烷萃取制得毛油，并經(jīng)精煉后制 得成品(低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂)。
成品(低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂)的油脂含量為38. 7%，氣相色譜檢 測(cè)花生四烯酸含量為57. 2%，EPA含量為花生四烯酸含量的2. 3%，神經(jīng)酸含量為2. 4%，花 生四烯酸產(chǎn)量為6. 48g/L。其中油脂中的組成成分見(jiàn)表1。
表1 實(shí)施例1油脂組成成分
實(shí)施例2(10L罐發(fā)酵)
1)、菌種活化
制備活化培養(yǎng)基活化培養(yǎng)基為以馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng) 基，額外添加氮源，活化培養(yǎng)基的配方為200g馬鈴薯，水1000ml，15g葡萄糖，18g瓊脂，7g 酵母粉；
具體為稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加水IOOOml煮沸半個(gè)小時(shí)，紗布過(guò)濾， 再加15g葡萄糖、18g瓊脂和7g酵母粉，充分溶解后趁熱紗布過(guò)濾，分裝試管，每試管約 5-10ml (視試管大小而定)，15磅蒸氣(121°C)滅菌20分鐘左右后取出試管擺斜面，冷卻 后貯存?zhèn)溆谩?br>將深黃被孢霉(Mortierella isabellina)在活化培養(yǎng)基斜面進(jìn)行菌種活化培養(yǎng)， 280C，培養(yǎng)箱濕度40 %，培養(yǎng)4天，得活化菌種，備用；
2)搖瓶菌種制備
將活化培養(yǎng)基上的活化菌種用無(wú)菌水振蕩洗脫后接入種子培養(yǎng)基搖瓶中，種子培 養(yǎng)基搖瓶中有搖瓶培養(yǎng)基；搖瓶培養(yǎng)基配方為18g/L葡萄糖，10g/L酵母膏；通入壓縮空 氣，通氣量為0. 4VVM(每分鐘相對(duì)于單位發(fā)酵體積的通氣量)，搖床轉(zhuǎn)速為160rpm，培養(yǎng)溫 度為25°C，振蕩培養(yǎng)4天；從培養(yǎng)箱中取出后置于4°C條件下保持60min，得搖瓶菌種，備 用；[0044]3) IOL發(fā)酵罐發(fā)酵
將制得的搖瓶菌種接種于有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量為搖瓶 菌種所占發(fā)酵培養(yǎng)基體積的10%，發(fā)酵罐裝液量為50% (搖瓶菌種和發(fā)酵培養(yǎng)基占發(fā)酵罐 體積的50% )；發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖10g/L，酵母膏10g/L，硝酸鈉lg/L ；用2mol/L硫 酸調(diào)節(jié)PH為5. 5 ；通入潔凈壓縮空氣，通氣量為0. 4VVM ；轉(zhuǎn)速lOOrpm，壓力0. 03Mpa，溫度 250C，期間每隔24h補(bǔ)充10g/L的葡萄糖，每48h補(bǔ)充lg/L的硝酸鈉，發(fā)酵培養(yǎng)7天，收獲 菌體，得到菌體量為32. 4g/L，從菌體中回收提取低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂。
從菌體中回收提取目低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法為干法以抽 真空加熱脫水的方式烘干菌體，經(jīng)粉碎后以有機(jī)溶劑正己烷萃取制得毛油，并經(jīng)精煉后制 得成品(低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂)。
成品(低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂)的油脂含量為48.0%，氣相色譜檢 測(cè)花生四烯酸含量為56. 3%，EPA含量為花生四烯酸含量的2.7%，神經(jīng)酸含量為1. 9%，花 生四烯酸產(chǎn)量為8. 76g/L。其中油脂中的組成成分見(jiàn)表2。
表2 實(shí)施例2油脂組成成分
實(shí)施例3 (50L罐發(fā)酵)
1)、菌種活化
制備活化培養(yǎng)基活化培養(yǎng)基為以馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng) 基，額外添加氮源，活化培養(yǎng)基的配方為200g馬鈴薯，水IOOOml，20g葡萄糖，20g瓊脂，IOg 花生粉；
具體為稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加水IOOOml煮沸半個(gè)小時(shí)，紗布過(guò)濾， 再加20g葡萄糖、20g瓊脂和IOg花生粉，充分溶解后趁熱紗布過(guò)濾，分裝試管，每試管約 5-10ml (視試管大小而定)，15磅蒸氣(121°C)滅菌20分鐘左右后取出試管擺斜面，冷卻 后貯存?zhèn)溆谩?br>將深黃被孢霉(Mortierella isabellina)在活化培養(yǎng)基斜面進(jìn)行菌種活化培養(yǎng)， 250C，培養(yǎng)箱濕度50 %，培養(yǎng)4天，得活化菌種，備用；
2)搖瓶菌種制備
將活化培養(yǎng)基上的活化菌種用無(wú)菌水振蕩洗脫后接入種子培養(yǎng)基搖瓶中，種子培 養(yǎng)基搖瓶中有搖瓶培養(yǎng)基；搖瓶培養(yǎng)基配方為20g/L葡萄糖，15g/L酵母膏；通入壓縮空 氣，通氣量為0. 6VVM，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm，培養(yǎng)溫度為28°C，振蕩培養(yǎng)4天；從培養(yǎng)箱中取 出后置于4°C條件下保持120min，得搖瓶菌種，備用；
3) 50L發(fā)酵罐發(fā)酵
將制得的搖瓶菌種接種于有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量為搖瓶 菌種所占發(fā)酵培養(yǎng)基體積的8-20 %，發(fā)酵罐裝液量為50 % (搖瓶菌種和發(fā)酵培養(yǎng)基占發(fā)酵 罐體積的50% )；發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖10g/L，酵母膏13g/L，硝酸鈉lg/L ；用2mol/L 檸檬酸調(diào)節(jié)PH為5. 5 ；通入潔凈壓縮空氣，通氣量為0. 4VVM ；轉(zhuǎn)速lOOrpm，壓力0. 03Mpa，溫 度25°C，期間每隔24h補(bǔ)充10g/L的葡萄糖，每48h補(bǔ)充lg/L的硝酸鈉，發(fā)酵培養(yǎng)8天，收 獲菌體，得到菌體量為34. lg/L，從菌體中回收提取低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂。
從菌體中回收提取目低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法為濕法以濕 的菌體直接破壁后有機(jī)溶劑丁烷萃取制得毛油，并經(jīng)精煉后制得成品(低神經(jīng)酸、EPA含量 的花生四烯酸油脂)。
成品(低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂)的油脂含量為52. 3%，氣相色譜檢 測(cè)花生四烯酸含量為60. 4%，EPA含量為花生四烯酸含量的2. 3%，神經(jīng)酸含量為1. 7%，花 生四烯酸產(chǎn)量為10.77g/L。其中油脂中的組成成分見(jiàn)表3。
表3 實(shí)施例3油脂組成成分
實(shí)施例4
發(fā)酵生產(chǎn)低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法，它包括如下步驟
1)、菌種活化
制備活化培養(yǎng)基200g馬鈴薯，水1000ml，IOg葡萄糖，17g瓊脂，5g牛肉膏；
將深黃被孢霉(Mortierella isabellina)在活化培養(yǎng)基斜面進(jìn)行菌種活化培養(yǎng)， 250C，培養(yǎng)箱濕度40%，培養(yǎng)3天，得活化菌種，備用；
2)搖瓶菌種制備
將活化培養(yǎng)基上的活化菌種用無(wú)菌水振蕩洗脫后接入種子培養(yǎng)基搖瓶中，種子培 養(yǎng)基搖瓶中有搖瓶培養(yǎng)基；搖瓶培養(yǎng)基配方為18g/L葡萄糖，10g/L酵母膏；通入壓縮空 氣，通氣量為0. 4VVM，搖床轉(zhuǎn)速為IOOrpm，培養(yǎng)溫度為20°C，振蕩培養(yǎng)3天；從培養(yǎng)箱中取 出后置于4°C條件下保持60min，得搖瓶菌種，備用；[0070]3)發(fā)酵
將制得的搖瓶菌種接種于有發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量為搖瓶菌 種所占發(fā)酵培養(yǎng)基體積的8%，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為果糖10g/L，牛肉膏10g/L ；用l-5mol/L 的酸(硫酸、草酸或檸檬酸等)或堿(氫氧化鈉或氨水等)調(diào)節(jié)PH至6;通入潔凈壓縮空 氣，通氣量為0. 4VVM ；轉(zhuǎn)速lOOrpm，壓力0. OlMpa,溫度20°C，期間每隔24h補(bǔ)充10g/L的果 糖，每48h補(bǔ)充lg/L的硝酸鈉，發(fā)酵培養(yǎng)7天，收獲菌體，從菌體中回收提取低神經(jīng)酸、EPA 含量的花生四烯酸油脂。
從菌體中回收提取目低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法包括干法以 抽真空加熱脫水的方式烘干菌體，經(jīng)粉碎后以有機(jī)溶劑正己烷萃取制得毛油，并經(jīng)精煉后 制得成品(低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂)。
實(shí)施例5
發(fā)酵生產(chǎn)低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法，它包括如下步驟
1)、菌種活化
制備活化培養(yǎng)基200g馬鈴薯，水1000ml，20g葡萄糖，20g瓊脂，IOg蛋白胨；
將深黃被孢霉(Mortierella isabellina)在活化培養(yǎng)基斜面進(jìn)行菌種活化培養(yǎng)， 280C，培養(yǎng)箱濕度50 %，培養(yǎng)4天，得活化菌種，備用；
2)搖瓶菌種制備
將活化培養(yǎng)基上的活化菌種用無(wú)菌水振蕩洗脫后接入種子培養(yǎng)基搖瓶中，種子培 養(yǎng)基搖瓶中有搖瓶培養(yǎng)基；搖瓶培養(yǎng)基配方為20g/L葡萄糖，15g/L酵母膏；通入壓縮空 氣，通氣量為0. 6VVM，搖床轉(zhuǎn)速為250rpm，培養(yǎng)溫度為30°C，振蕩培養(yǎng)5天；從培養(yǎng)箱中取 出后置于10°C條件下保持120min，得搖瓶菌種，備用；
3)發(fā)酵
將制得的搖瓶菌種接種于有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量為搖 瓶菌種所占發(fā)酵培養(yǎng)基體積的20%，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為乳糖30g/L，硝酸鈉21g/L ；用 l-5mol/L的酸(硫酸、草酸或檸檬酸等)或堿(氫氧化鈉或氨水等)調(diào)節(jié)pH至7 ；通入潔 凈壓縮空氣，通氣量為0. 6VVM ；轉(zhuǎn)速200rpm，壓力0. 05Mpa，溫度30°C，期間每隔24h補(bǔ)充 10g/L的乳糖，每48h補(bǔ)充lg/L的硝酸鈉，發(fā)酵培養(yǎng)9天，收獲菌體，從菌體中回收提取低神 經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂。
從菌體中回收提取目低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法包括濕法以 濕的菌體直接破壁后有機(jī)溶劑丁烷萃取制得毛油，并經(jīng)精煉后制得成品(低神經(jīng)酸、EPA含 量的花生四烯酸油脂)。
權(quán)利要求
發(fā)酵生產(chǎn)低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法，其特征在于它包括如下步驟1)、菌種活化制備活化培養(yǎng)基200g馬鈴薯，水1000ml，10-20g葡萄糖，17-20g瓊脂，5-10g氮源；所述的氮源為酵母膏、酵母粉、花生粉、牛肉膏、蛋白胨、魚粉、硝酸鉀或硝酸鈉；將深黃被孢霉(Mortierella isabellina)在活化培養(yǎng)基斜面進(jìn)行菌種活化培養(yǎng)，25-28℃，培養(yǎng)箱濕度40-50％，培養(yǎng)3-4天，得活化菌種，備用；2)搖瓶菌種制備將活化培養(yǎng)基上的活化菌種用無(wú)菌水振蕩洗脫后接入種子培養(yǎng)基搖瓶中，種子培養(yǎng)基搖瓶中有搖瓶培養(yǎng)基；搖瓶培養(yǎng)基配方為18-20g/L葡萄糖，10-15g/L酵母膏；通入壓縮空氣，通氣量為0.4-0.6VVM，搖床轉(zhuǎn)速為100-250rpm，培養(yǎng)溫度為20-30℃，振蕩培養(yǎng)3-5天；從培養(yǎng)箱中取出后置于4-10℃條件下保持60-120min，得搖瓶菌種，備用；3)發(fā)酵將制得的搖瓶菌種接種于有發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶或發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量為搖瓶菌種所占發(fā)酵培養(yǎng)基體積的8-20％，發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為葡萄糖10-30g/L，酵母膏10-20g/L，硝酸鈉1g/L；用1-5mol/L的酸或堿調(diào)節(jié)pH至5.5-7；通入潔凈壓縮空氣，通氣量為0.4-0.6VVM；轉(zhuǎn)速100-200rpm，壓力0.01-0.05Mpa，溫度20-30℃，期間每隔24h補(bǔ)充10g/L的碳源，每48h補(bǔ)充1g/L的硝酸鈉，發(fā)酵培養(yǎng)7-9天，收獲菌體，從菌體中回收提取低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂；從菌體中回收提取目低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法為下述二種之一a、干法以抽真空加熱脫水的方式烘干菌體，經(jīng)粉碎后以有機(jī)溶劑萃取制得毛油，并經(jīng)精煉后制得低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂；b、濕法以濕的菌體直接破壁后有機(jī)溶劑萃取制得毛油，并經(jīng)精煉后制得低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的發(fā)酵生產(chǎn)低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法，其特 征在于有機(jī)溶劑為正己烷或丁烷。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)含低神經(jīng)酸、低二十碳五烯酸(EPA)的花生四烯酸油脂的方法。本發(fā)明的方法選用深黃被孢霉為出發(fā)菌株，經(jīng)菌種活化、搖瓶菌種制備、發(fā)酵，收獲菌體，從菌體中回收提取低神經(jīng)酸、EPA含量的花生四烯酸油脂。采用深黃被孢霉作為發(fā)酵生產(chǎn)菌種，油脂生產(chǎn)能力可以提高1-3倍，花生四烯酸產(chǎn)量可以提高1-3倍；發(fā)酵條件簡(jiǎn)單，發(fā)酵過(guò)程利于控制；可以獲得高品質(zhì)的花生四烯酸混合油脂；低神經(jīng)酸、低二十碳五烯酸(EPA)。
文檔編號(hào)C12P7/64GKCN101153298 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 200710053164
公開(kāi)日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2007年9月7日
發(fā)明者吳志偉, 岳傳軍, 岳傳靜, 魯偉 申請(qǐng)人:武漢麥可得生物技術(shù)有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (2), 非專利引用 (2),