專利名稱:一種促進(jìn)靈芝酸和靈芝多糖生物合成的靈芝細(xì)胞培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物細(xì)胞培養(yǎng)方法，尤其涉及一種通過在靈芝液體深層發(fā)酵過 程中采用可見光照射以促進(jìn)靈芝細(xì)胞生長、靈芝多糖和靈芝酸生物合成的靈芝細(xì)胞培養(yǎng)方 法，屬于微生物發(fā)酵領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
靈芝(Ganoderma lucidum(Leyss ex Fr. )Krast)屬于擔(dān)子菌綱、多孑L菌科、靈 芝屬高等真菌。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為，靈芝具味甘、性溫、無毒，可補(bǔ)心、肝、脾、肺、腎五臟之氣， 具滋補(bǔ)強(qiáng)身、扶正固本之功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)靈芝中所含有效成分主要為靈芝多 糖和靈芝酸。靈芝酸和靈芝多糖具有抗癌和抗艾滋病病毒等療效(RussellR，Paterson Μ. Ganoderma-A therapeutic fungal biofactory. Phytochemistry 2006,67 1985-2001 ； Tang W, Liu Jff, Zhao WM, Wei DZ, Zhong JJ. Ganoderic acid T fromGanoderma lucidum mycelia induces mitochondria mediated apoptosis in lung cancercells. Life Sci 2006,80:205-211 ；EI-Mekkawy S,Meselhy MR, Nakamura N,Tezuka Y,Hattori M,Kakiuchi N,Shimotohno K,Kawahata T,Otake T. Anti-HIV-I andanti-HIV—l-protease substances from Ganoderma lucidum. Phytochemistry 1998,49:1651-1657)。
在靈芝酸和靈芝多糖的藥用價(jià)值被廣泛揭示的同時(shí)，靈芝產(chǎn)量和質(zhì)量成為限制其 應(yīng)用的瓶頸，因?yàn)樵谧匀唤缰幸吧`芝十分稀少，且其中靈芝酸含量僅為1毫克/100毫克 細(xì)胞，遠(yuǎn)不能滿足人們的需要；而靈芝人工栽培周期長、產(chǎn)品質(zhì)量易受環(huán)境氣候及蟲害的影 響；因此發(fā)酵法生產(chǎn)靈芝酸和靈芝多糖將是一種非常有前景的方法。目前，通過靈芝細(xì)胞 液體深層發(fā)酵所獲得的靈芝酸和靈芝多糖的產(chǎn)量仍然較低。李平作等(李平作，徐柔，章克 昌.靈芝胞外多糖深層發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化.無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào)1998，17 (4) :26-30.)報(bào)道 了靈芝分批培養(yǎng)中培養(yǎng)基的優(yōu)化，但該方法只報(bào)道了胞外多糖的生產(chǎn)情況，最大生物量與 胞外多糖的產(chǎn)量分別是14. 8克/升和2. 91克/升(在該文獻(xiàn)中，胞外多糖的測定方法為 乙醇沉淀_干重法)。
日本特許公報(bào)(特開平4-304890，5pp)公開了一種靈芝酸的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，但未 提及靈芝多糖的生產(chǎn)，且所得產(chǎn)物中靈芝酸的含量僅為0. 46-1. O毫克/100毫克細(xì)胞。還 有一些專利和文獻(xiàn)也公開報(bào)道了各種方法，公開號為CN1264743A(發(fā)明名稱液體發(fā)酵法 同時(shí)生產(chǎn)靈芝多糖和靈芝酸的工藝)、CN1375557A (發(fā)明名稱生物反應(yīng)器中靈芝細(xì)胞兩階 段培養(yǎng)生產(chǎn)靈芝酸的方法)，授權(quán)公開號為CN1141392C (發(fā)明名稱中間補(bǔ)料發(fā)酵生產(chǎn)靈芝 多糖和靈芝酸的方法)等專利文獻(xiàn)公開了一系列的通過發(fā)酵生產(chǎn)靈芝多糖和靈芝酸的細(xì) 胞培養(yǎng)方法，這些細(xì)胞培養(yǎng)方法都是在黑暗環(huán)境下進(jìn)行的，細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中靈芝多糖和靈 芝酸的含量尚有待提高。
光照作為一種物理影響因子，已廣泛用于植物細(xì)胞、藻類細(xì)胞和光合細(xì)菌培養(yǎng)過 程中，人們系統(tǒng)研究了光質(zhì)(不同波長的光)、光照強(qiáng)度對細(xì)胞生長、產(chǎn)物合成、細(xì)胞形態(tài)和 生理生化的影響。此外，已有學(xué)者通過對光質(zhì)、光照強(qiáng)度的研究，建立了不同的光照控制策
3略高效生產(chǎn)代謝產(chǎn)物。然而，在藥用真菌液體深層發(fā)酵過程中，未見光照對細(xì)胞生長、產(chǎn)物 合成乃至細(xì)胞生理生化影響的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種促進(jìn)靈芝細(xì)胞生 長、靈芝酸和靈芝多糖生物合成的靈芝細(xì)胞培養(yǎng)方法，與現(xiàn)有方法相比，本發(fā)明靈芝細(xì)胞培 養(yǎng)方法能夠顯著促進(jìn)靈芝細(xì)胞生長和靈芝酸、靈芝多糖的生物合成。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的
一種促進(jìn)靈芝細(xì)胞生長、靈芝酸和靈芝多糖生物合成的靈芝細(xì)胞培養(yǎng)方法，包括 將靈芝菌種接種到斜面培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，再依次進(jìn)行一級液體種子培養(yǎng)、二級液體種子培 養(yǎng)和液體深層發(fā)酵，其中，在液體深層發(fā)酵過程中用可見光進(jìn)行光照培養(yǎng)。
所述的可見光可以是波長為400-740納米的任意一種電磁波，例如可以是波長 為560-700納米的紅光、波長為592-620納米的橙光、波長為578-592納米的黃光、波長為 430-610納米的綠光、波長為464-500納米的青光、波長為390-500納米的藍(lán)光或波長為 400-464納米的紫光；所述的可見光也可是由上述7種可見光混合在一起所組成的波長為 400-740納米的白光；
優(yōu)選的，所述的可見光選自藍(lán)光(波長390-500納米)、紅光(波長560-700納米) 或白光(波長400-740納米)，更優(yōu)選為白光。
所述藍(lán)光、紅光或白光的光照強(qiáng)度優(yōu)選為50-1200勒克斯，更優(yōu)選為80-1050勒克 斯，特別優(yōu)選為80-320勒克斯，最特別優(yōu)選為280-320勒克斯。
一種更優(yōu)選的技術(shù)方案在光照照射培養(yǎng)之前，先按照常規(guī)條件進(jìn)行暗培養(yǎng)2-6 天，再用白光進(jìn)行光照照射培養(yǎng)；更優(yōu)選的，在黑暗條件下進(jìn)行液體深層發(fā)酵2天，再用光 照強(qiáng)度為500勒克斯的白光進(jìn)行光照培養(yǎng)。
一種特別優(yōu)選的技術(shù)方案在光照照射培養(yǎng)之前，先按照常規(guī)條件進(jìn)行暗培養(yǎng) 1-7天，再用白光進(jìn)行光照照射培養(yǎng)；其中，用白光進(jìn)行光照照射培養(yǎng)時(shí)，分為兩個(gè)階段第 一個(gè)階段先用100勒克斯的白光照射培養(yǎng)1-7天，第二個(gè)階段于液體深層發(fā)酵的第7-9天 轉(zhuǎn)用500勒克斯的白光進(jìn)行光照照射培養(yǎng)。
一種最特別優(yōu)選的技術(shù)方案在光照照射培養(yǎng)之前，先按照常規(guī)條件進(jìn)行暗培養(yǎng) 2天，再用白光進(jìn)行光照照射培養(yǎng)，其中，用白光進(jìn)行光照照射培養(yǎng)時(shí)，分為兩個(gè)階段第一 個(gè)階段先用100勒克斯的白光光照培養(yǎng)6天，再于液體深層發(fā)酵的第8天轉(zhuǎn)用500勒克斯 的白光進(jìn)行光照培養(yǎng)。
本發(fā)明中所述的可見光可以是自然光，也可是采用各種人工設(shè)備所提供的上述可 見光，只要波長符合上述要求，都可滿足本發(fā)明的要求或?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明所述的效果。
本發(fā)明中，所述的靈芝細(xì)胞斜面菌種培養(yǎng)、一級液體種子培養(yǎng)、二級液體種子培 養(yǎng)和液體深層發(fā)酵所用到的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件均為靈芝細(xì)胞培養(yǎng)中的常規(guī)培養(yǎng)基和常規(guī) 培養(yǎng)條件，這些都是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的，作為參考，所述的培養(yǎng)基和有關(guān)的培養(yǎng)條 件可按照有關(guān)文獻(xiàn)所公開的內(nèi)容進(jìn)行(Tang YJ, Zhong JJ. Fed-batchfermentation of Ganoderma lucidum for hyperproduction of polysaccharide andganoderic acid. Enzyme Microb. Technol. 2002,31 20-28)。[0017]作為參考
所述的斜面培養(yǎng)基是PDA瓊脂培養(yǎng)基(1. 5克/升的七水硫酸鎂，3. 0克/升的磷 酸二氫鉀，20克/升的葡萄糖，0. 05克/升的維生素B1和200克土豆/升的提取液)。靈 芝細(xì)胞斜面菌種培養(yǎng)條件是培養(yǎng)溫度28°C，暗培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為7天。
所述的一級液體種子培養(yǎng)基為葡萄糖35克/升，蛋白胨5克/升，酵母粉2. 5克 /升，七水硫酸鎂0. 5克/升，磷酸二氫鉀1克/升，維生素B1O. 05克/升。一級液體種子 培養(yǎng)條件溫度30°C，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分。
所述的二級液體種子培養(yǎng)基為葡萄糖35克/升，蛋白胨5克/升，酵母粉2. 5克 /升，七水硫酸鎂0. 5克/升，磷酸二氫鉀1克/升，維生素B1O. 05克/升。二級液體種子 培養(yǎng)條件溫度30°C，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分。
所述的液體深層發(fā)酵培養(yǎng)基為乳糖35克/升，蛋白胨5克/升，酵母粉5克/升， 七水硫酸鎂0. 5克/升，磷酸二氫鉀1克/升，維生素B1O. 05克/升。液體深層發(fā)酵條件 溫度30°C，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分。
所述的靈芝菌種可以通過各種商業(yè)途徑購買得到，例如，可以購自中國普通微生 物菌種保藏管理中心，其菌種的編號為CGMCC 5. 616。
將本發(fā)明細(xì)胞培養(yǎng)方法所得到的產(chǎn)物分別用濃硫酸_苯酚法測定靈芝多糖的含 量，采用紫外分光光度法測定靈芝酸的含量，測定結(jié)果表明，本發(fā)明的方法可有效促進(jìn)靈芝 細(xì)胞生長，所得到的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中，靈芝酸、靈芝多糖的含量或產(chǎn)量也都有不同程度地提 高，說明在靈芝液體深層發(fā)酵過程中用可見光進(jìn)行光照培養(yǎng)可以有效促進(jìn)靈芝細(xì)胞生長及 靈芝酸或/和靈芝多糖生物合成。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會隨著描述而 更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù) 人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式 進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
試驗(yàn)材料
1、靈芝菌種(Ganoderma lucidum(Leyss ex Fr. )Krast)購自中國普通微生物菌 種保藏管理中心，其編號為CGMCC 5.616。
2、高亮發(fā)光二極管(LED)購自臺灣匯福光電有限公司，其編號為GT-16，技術(shù)參 數(shù)見表1
表1高亮發(fā)光二極管(LED)技術(shù)參數(shù)
實(shí)施例1[0031]分別按照以下培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行靈芝斜面菌種培養(yǎng)，一級液體種子培養(yǎng)、二 級液體種子培養(yǎng)和液體深層發(fā)酵
所述的斜面培養(yǎng)基是PDA瓊脂培養(yǎng)基(1. 5克/升的七水硫酸鎂，3. 0克/升的磷 酸二氫鉀，20克/升的葡萄糖，0. 05克/升的維生素B1和200克土豆/升的提取液)。靈 芝斜面菌種培養(yǎng)條件是培養(yǎng)溫度28°C，暗培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為7天。
所述的一級液體種子培養(yǎng)基為葡萄糖35克/升，蛋白胨5克/升，酵母粉2. 5克 /升，七水硫酸鎂0. 5克/升，磷酸二氫鉀1克/升，維生素B1O. 05克/升。一級液體種子 培養(yǎng)條件溫度30°C，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分。
所述的二級液體種子培養(yǎng)基為葡萄糖35克/升，蛋白胨5克/升，酵母粉2. 5克 /升，七水硫酸鎂0. 5克/升，磷酸二氫鉀1克/升，維生素B1O. 05克/升。二級液體種子 培養(yǎng)條件溫度30°C，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分。
所述的液體深層發(fā)酵培養(yǎng)基為乳糖35克/升，蛋白胨5克/升，酵母粉5克/升， 七水硫酸鎂0. 5克/升，磷酸二氫鉀1克/升，維生素B1O. 05克/升。液體深層發(fā)酵條件 溫度30°C，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分。
在靈芝液體深層發(fā)酵過程中，使用高亮發(fā)光二極管(LED)提供光源，分別用藍(lán)光， 紅光或白光從搖瓶上部直接照射發(fā)酵液表面，藍(lán)光，紅光或白光的光照強(qiáng)度固定在300士20 勒克斯。
細(xì)胞在60°C烘干后稱重，烘干的細(xì)胞按照Tang and Zhong (Enzyme Microb. Technol. 2002,31 :20_28)的方法萃取處理后，分別用濃硫酸-苯酚法和紫外分光光度法測 定靈芝多糖和靈芝酸的含量，試驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2三種可見光對靈芝酸、靈芝多糖含量和產(chǎn)量的影響
6
a所有數(shù)值都是_三個(gè)數(shù)值的平均值架上標(biāo)準(zhǔn)誤差
b生物量達(dá)到最大值的時(shí)間。[0042]從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，相對于暗培養(yǎng)，在靈芝液體深層發(fā)酵過程中分別采用藍(lán)光、 紅光或白光進(jìn)行光照培養(yǎng)，靈芝細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中，其生物量乃至靈芝酸、靈芝多糖的含量和 產(chǎn)量均有了不同程度地提高。
實(shí)施例2
本試驗(yàn)進(jìn)行了 4組平行的靈芝細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)，每組的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件都同實(shí)施 例1，所不同在于在液體深層發(fā)酵中，各組分別采用光照強(qiáng)度為100士20勒克斯、300士20 勒克斯、500士50勒克斯、1000士50勒克斯的白光進(jìn)行光照培養(yǎng)；細(xì)胞在60°C烘干后稱重， 烘干的細(xì)胞按照Tang and Zhong(Enzyme Microb. Technol. 2002,31 :20_28)的方法萃取處 理后，分別用濃硫酸_苯酚法和紫外分光光度法測定靈芝多糖和靈芝酸的含量，試驗(yàn)結(jié)果 見表3。
表3不同光照強(qiáng)度的白光對靈芝酸、靈芝多糖含量和產(chǎn)量的影響
a所有數(shù)值都是三個(gè)數(shù)值的平均值加上標(biāo)準(zhǔn)誤差.
b生物量達(dá)到最大值的時(shí)間.
試驗(yàn)結(jié)果表明，較低光照強(qiáng)度的白光進(jìn)行光照培養(yǎng)有利于促進(jìn)靈芝細(xì)胞生長和提 高靈芝酸的含量和靈芝多糖的產(chǎn)量，采用較高光照強(qiáng)度的白光進(jìn)行光照培養(yǎng)有助于提高靈 芝酸的產(chǎn)量和靈芝多糖的含量。
實(shí)施例3
本試驗(yàn)是在實(shí)施例1和實(shí)施例2的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。分為試驗(yàn)組和對照組，對照組在 液體深層發(fā)酵過程中為黑暗培養(yǎng)，其它條件同試驗(yàn)組(培養(yǎng)基和各個(gè)階段的培養(yǎng)條件同實(shí) 施例1)；試驗(yàn)組分為3個(gè)平行組，第一階段采用黑暗培養(yǎng)，第二階段采用光照強(qiáng)度為500勒 克斯的白光進(jìn)行光照培養(yǎng)，從第一階段轉(zhuǎn)到第二階段的時(shí)間點(diǎn)分別為開始液體深層發(fā)酵的 第2天、第4天和第6天。細(xì)胞在60°C烘干后稱重，烘干的細(xì)胞按照Tang and Zhong (Enzyme Microb. Technol. 2002，31 20-28)的方法萃取處理后，分別用濃硫酸-苯酚法和紫外分光 光度法測定靈芝多糖和靈芝酸的含量，試驗(yàn)結(jié)果見表4。
表4黑暗培養(yǎng)加光照培養(yǎng)對靈芝酸、靈芝多糖含量和產(chǎn)量的影響 a所有數(shù)值都是三個(gè)數(shù)值的平均值加上標(biāo)準(zhǔn)誤差.
b生物量達(dá)到最大值的時(shí)間.
從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，從黑暗培養(yǎng)向采用光照強(qiáng)度為500勒克斯的白光進(jìn)行光照 培養(yǎng)的時(shí)間轉(zhuǎn)移點(diǎn)在液體深層發(fā)酵的第2天時(shí)，所獲得的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中，生物量、靈芝酸 的產(chǎn)量和靈芝多糖的含量和產(chǎn)量在3個(gè)試驗(yàn)組中為最高；相比于對照組(黑暗培養(yǎng))，3個(gè)
試驗(yàn)組在生物量、靈芝酸的產(chǎn)量和靈芝多糖的含量和產(chǎn)量等方面均有顯著的增長。
實(shí)施例4
本試驗(yàn)是在實(shí)施例3的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，分為3個(gè)平行的試驗(yàn)組(培養(yǎng)基和各個(gè)階 段的培養(yǎng)條件同實(shí)施例1) ；3個(gè)平行的試驗(yàn)組在液體深層發(fā)酵分為三個(gè)階段，第一階段為 黑暗培養(yǎng)；第二階段為100勒克斯白光照射培養(yǎng)，第三階段用500勒克斯的白光照射培養(yǎng)； 其中試驗(yàn)1組由第一階段轉(zhuǎn)向第二階段的時(shí)間點(diǎn)是開始液體深層發(fā)酵的第2天(即黑暗 培養(yǎng)2天后轉(zhuǎn)為用100勒克斯白光照射培養(yǎng))；試驗(yàn)2組由第一階段轉(zhuǎn)向第二階段的時(shí)間 點(diǎn)是開始液體深層發(fā)酵的第4天(即黑暗培養(yǎng)4天后轉(zhuǎn)為用100勒克斯白光照射培養(yǎng))； 試驗(yàn)3組由第一階段轉(zhuǎn)向第二階段的時(shí)間點(diǎn)是開始液體深層發(fā)酵的第6天(即黑暗培養(yǎng) 6天后轉(zhuǎn)為用100勒克斯白光照射培養(yǎng))；3個(gè)試驗(yàn)組均自液體深層發(fā)酵的第8天起轉(zhuǎn)入第 三階段，即用500勒克斯的白光照射培養(yǎng)。
細(xì)胞在60°C烘干后稱重，烘干的細(xì)胞按照Tang and Zhong (Enzyme Microb. Technol. 2002,31 20-28)的方法萃取處理后，分別用濃硫酸-苯酚法和紫外分光光度法測 定靈芝多糖和靈芝酸的含量，試驗(yàn)結(jié)果見表5。
表5黑暗培養(yǎng)加2個(gè)階段的光照培養(yǎng)對靈芝酸、靈芝多糖含量和產(chǎn)量的影響
a所有數(shù)值都是三個(gè)數(shù)值的平均值加上標(biāo)準(zhǔn)誤差.
b生物量達(dá)到最大值的時(shí)間.
與實(shí)施例3相比，采用黑暗培養(yǎng)加兩個(gè)階段的光照射培養(yǎng)，所得到的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn) 物，不論是在靈芝酸產(chǎn)量和含量上，還是在靈芝胞內(nèi)多糖的含量和產(chǎn)量上，均有了明顯的提 升，尤其是試驗(yàn)1組，其靈芝酸產(chǎn)量和靈芝胞內(nèi)多糖的產(chǎn)量更是有了大幅度地提高。
權(quán)利要求
一種促進(jìn)靈芝細(xì)胞生長、靈芝酸和靈芝多糖生物合成的細(xì)胞培養(yǎng)方法，包括將靈芝菌種接種到斜面培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，再依次進(jìn)行一級液體種子培養(yǎng)、二級液體種子培養(yǎng)和液體深層發(fā)酵，其特征在于在液體深層發(fā)酵過程中用藍(lán)光、紅光或白光進(jìn)行光照培養(yǎng)；所述白光的光照強(qiáng)度為100±20勒克斯、300±20勒克斯、500±50勒克斯或1000±50勒克斯；所述藍(lán)光或紅光的光照強(qiáng)度為300±20勒克斯。
2.按照權(quán)利要求
1所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于在光照照射培養(yǎng)之前，先按照常 規(guī)條件進(jìn)行暗培養(yǎng)2-6天，再用白光進(jìn)行光照照射培養(yǎng)。
3.按照權(quán)利要求
2所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于在黑暗條件下進(jìn)行液體深層發(fā) 酵2天，再用光照強(qiáng)度為500勒克斯的白光進(jìn)行光照照射培養(yǎng)。
4.按照權(quán)利要求
2所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于在光照照射培養(yǎng)之前，先按照 常規(guī)條件進(jìn)行暗培養(yǎng)2-6天，再用白光進(jìn)行光照照射培養(yǎng)；其中，用白光進(jìn)行光照照射培養(yǎng) 時(shí)，分為兩個(gè)階段，第一個(gè)階段先用100勒克斯的白光光照培養(yǎng)2-6天，第二個(gè)階段是在液 體深層發(fā)酵的第7-9天轉(zhuǎn)用500勒克斯的白光進(jìn)行光照培養(yǎng)。
5.按照權(quán)利要求
4所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于在光照培養(yǎng)之前，先按照常規(guī)條 件進(jìn)行暗培養(yǎng)2天后轉(zhuǎn)用100勒克斯的白光光照培養(yǎng)6天，在液體深層發(fā)酵的第8天轉(zhuǎn)用 500勒克斯的白光進(jìn)行光照培養(yǎng)。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種促進(jìn)靈芝酸和靈芝多糖生物合成的靈芝細(xì)胞培養(yǎng)方法，該方法包括將靈芝菌種接種到斜面培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，再依次進(jìn)行一級液體種子培養(yǎng)、二級液體種子培養(yǎng)和液體深層發(fā)酵，其中，在液體深層發(fā)酵過程中用可見光進(jìn)行光照培養(yǎng)。經(jīng)測定，本發(fā)明方法可有效促進(jìn)靈芝細(xì)胞的生長，相比于現(xiàn)有的細(xì)胞培養(yǎng)方法，本發(fā)明方法所制備的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中，其靈芝酸、靈芝多糖的含量或產(chǎn)量都有了不同程度地提升。
文檔編號C12P7/40GKCN101492645 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請?zhí)朇N 200810002772
公開日2010年12月22日 申請日期2008年1月21日
發(fā)明者張偉, 李冬生, 湯亞杰 申請人:湖北工業(yè)大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (2), 非專利引用 (1),