專利名稱：:亞麻ttc和atc重復(fù)基序微衛(wèi)星dna標(biāo)記的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及分子標(biāo)記技術(shù)，具體涉及一種亞麻的DNA分子遺傳標(biāo)記。技術(shù)背景微衛(wèi)星(Microsatellite)，又稱為簡單序列重復(fù)(simplesequencer印eat，SSR)或短串聯(lián)重復(fù)(shorttandemr印eat，STR)，是以少數(shù)幾個(gè)核苷酸(1-6個(gè))為重復(fù)單位的串聯(lián)重復(fù)DNA序列。由于微衛(wèi)星具有高水平的雜合性和突變率、雙親遺傳模式等優(yōu)勢，加之便于檢測，費(fèi)用低廉，因此廣泛用于遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位、標(biāo)記輔助育種、家系分析、品種鑒定以及進(jìn)化分析等研究。如用微衛(wèi)星標(biāo)記研究櫻桃品種間的親緣關(guān)系(艾呈祥等，2007，果樹學(xué)報(bào)，24(4):460-465)、用微衛(wèi)星DNA標(biāo)記進(jìn)行豬品種分類的專利申請"適于豬品種分類的豬微衛(wèi)星DNA標(biāo)記"(公開號CN1370834A)。亞麻(LinumusitatissmumL.)是亞麻禾斗(Linaceae)亞麻屬(Linum)的一年生草本纖維植物，已經(jīng)有六七千年的栽培歷史。亞麻既是世界第3大纖維作物，又是5大油料作物之一。作為一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，亞麻在微衛(wèi)星分子標(biāo)記方面的研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于其他作物。大豆、棉花、水稻、葡萄、花生的SSR標(biāo)記已有許多研究，并公開發(fā)表了大量可以直接利用引物序列，而現(xiàn)有亞麻的微衛(wèi)星標(biāo)記數(shù)量非常有限，僅有法國科學(xué)家Roose-Amsaleg等分離的28個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記(Roose-AmsalegC等，2006，MolecularEcologyNotes,6(3):796-799)。這嚴(yán)重制約了微衛(wèi)星標(biāo)記在亞麻遺傳學(xué)、分子生物學(xué)方面的研究和應(yīng)用。因此，迫切需要獲得更多獨(dú)立分離的、多態(tài)性豐富的亞麻微衛(wèi)星標(biāo)記。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在分離克隆微衛(wèi)星DNA標(biāo)記，建立亞麻的微衛(wèi)星DNA的技術(shù)體系并利用這些分子標(biāo)記進(jìn)行品種分類，遺傳關(guān)系分析和輔助育種。實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的的技術(shù)方案包括亞麻(TTC)n和(ATC)n微衛(wèi)星富集文庫的構(gòu)建、含微衛(wèi)星序列的陽性克隆的篩選及測序，得到28個(gè)含有(TTC)n和10個(gè)含有(ATC)n的微衛(wèi)星克隆，確定了38個(gè)多態(tài)性豐富的微衛(wèi)星標(biāo)記LU26、LU27、LU28、LU29、LU30、LU31、LU32、LU33、LU34、LU35、LU36、LU37、LU38、LU39、LU40、LU41、LU42、LU43、LU44、LU45、LU46、LU47、LU48、LU49、LU50、LU51、LU52、LU53、LU54、LU55、LU56、LU57、LU58、LU59、LU60、LU61、LU62、LU63;其中LU26為405個(gè)核苷酸、LU27為283個(gè)核苷酸、LU28為518個(gè)核苷酸、LU29為280個(gè)核苷酸、LU30為284個(gè)核苷酸、LU31為283個(gè)核苷酸、LU32為283個(gè)核苷酸、LU33為379個(gè)核苷酸、LU34為333個(gè)核苷酸、LU35為340個(gè)核苷酸、LU36為345個(gè)核苷酸、LU37為351個(gè)核苷酸、LU38為416個(gè)核苷酸、LU39為688個(gè)核苷酸、LU40為562個(gè)核苷酸、LU41為330個(gè)核苷酸、LU42為291個(gè)核苷酸、LU43為362個(gè)核苷酸、LU44為390個(gè)核苷酸、LU45為341個(gè)核苷酸、LU46為280個(gè)核苷酸、LU47為326個(gè)核苷酸、LU48為405個(gè)核苷酸、LU49為321個(gè)核苷酸、LU50為348個(gè)核苷酸、LU51為469個(gè)核苷酸、LU52為277個(gè)核苷酸、LU53為448個(gè)核苷酸、LU54為424個(gè)核苷酸、LU55為367個(gè)核苷酸、LU56為611個(gè)核苷酸、LU57為4431、核苷酸、LU58為297個(gè)核苷酸、LU59為261個(gè)核苷酸、LU60為t核苷酸、LU62為501個(gè)核苷酸、LU63為399個(gè)核苷酸。1374個(gè)核苷酸、LU61為380Il是用LU26位點(diǎn)的特異2是用LU27位點(diǎn)的特異3是用LU28位點(diǎn)的特異4是用LU29位點(diǎn)的特異5是用LU30位點(diǎn)的特異6是用LU31位點(diǎn)的特異7是用LU32位點(diǎn)的特異8是用LU33位點(diǎn)的特異9是用LU34位點(diǎn)的特異10是用LU35位點(diǎn)的特異11是用LU36位點(diǎn)的特異12是用LU37位點(diǎn)的特異13是用LU38位點(diǎn)的特異14是用LU39位點(diǎn)的特異15是用LU40位點(diǎn)的特異16是用LU41位點(diǎn)的特異17是用LU42位點(diǎn)的特異18是用LU43位點(diǎn)的特異19是用LU44位點(diǎn)的特異20是用LU45位點(diǎn)的特異21是用LU46位點(diǎn)的特異22是用LU47位點(diǎn)的特異23是用LU48位點(diǎn)的特異24是用LU49位點(diǎn)的特異25是用LU50位點(diǎn)的特異26是用LU51位點(diǎn)的特異27是用LU52位點(diǎn)的特異28是用LU53位點(diǎn)的特異29是用LU54位點(diǎn)的特異30是用LU55位點(diǎn)的特異31是用LU56位點(diǎn)的特異32是用LU57位點(diǎn)的特異33是用LU58位點(diǎn)的特異134是用LU59位點(diǎn)的特異135是用LU60位點(diǎn)的特異性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖生引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖生引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖生引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖生引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖[0041]圖36是用LU61位點(diǎn)的特異性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖；圖37是用LU62位點(diǎn)的特異性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖；圖38是用LU63位點(diǎn)的特異性引物擴(kuò)增8個(gè)亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。具體實(shí)施方式1、亞麻微衛(wèi)星富集文庫的構(gòu)建(1)以亞麻品種白花幼苗為材料，采用改進(jìn)的CTAB法(參見鄧欣等，2007，中國麻業(yè)科學(xué)，29(4)184-188)提取亞麻基因組DNA。用限制性內(nèi)切酶MseI酶切10iig亞麻基因組DNA，酶切產(chǎn)物經(jīng)1.5X瓊脂糖凝膠電泳檢測，用瓊脂糖凝膠回收試劑盒(TIANGEN)回收300-1500bp的DNA片段。(2)將堿基互補(bǔ)的寡核苷酸primerA(5'-AGATGGAATTCGTACACTCGT-3')和primerB(5'-TAACGAGTGTACGAATTCCATCT-3')等摩爾混合，95。C變性5min，60。C退火lh，形成具有粘性末端的接頭。(3)將酶切產(chǎn)物和接頭用T4DNA連接酶連接。連接產(chǎn)物用酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)抽提一次，離心收集上清液，在上清液中加0.3mol/L醋酸鈉(pH5.2)和2倍體積冰乙醇純化沉淀DNA，加入15iiL去離子水溶解。(4)接頭連接片段的PCR擴(kuò)增連接產(chǎn)物以primerA為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。用普通DNA產(chǎn)物純化試劑盒(TIANGEN)純化PCR產(chǎn)物，并將其濃縮至15iiL。(5)用生物素標(biāo)記的探針(TTC)8和(ATC)8分別與純化的接頭連接DNA片段雜交。具體操作為建立50iiL雜交混合液反應(yīng)體系含5iiL探針(10mol/L)，5iiLprimerA，15iiL20XSSC，10%SDS0.5iiL及12.5iiLddH20，68。C預(yù)熱。將15iiL連接產(chǎn)物DNA片段于95t:變性5min，再加預(yù)熱的雜交混合液，于68。C雜交lh。(6)將雜交混合液加入100yL鏈霉親和素包被的磁珠(DynalM-280)中，于25°C溫育20min。(7)用磁力架吸附磁珠，棄上清。依次用200iiL洗液1、洗液11(3XSSC，0.1%SDS)、洗液III(6XSSC)洗滌磁珠，去除不含微衛(wèi)星的序列。方法是用洗液I在室溫洗2次，每次靜置8min;洗液II在68t:洗2次，每次靜置15min;洗液III在室溫快速洗2次。(8)用0.1XTE200yL在室溫快速洗2次，加入0.1XTE50yL，95。C變性10min，小心吸取上清，上清液即含有微衛(wèi)星序列的單鏈DNA，以primerA為引物，以單鏈DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得雙鏈目的片段。(9)將擴(kuò)增產(chǎn)物純化后連接到pMD18-T載體(大連寶生物)上，然后將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌Top10感受態(tài)細(xì)胞(TIANGEN)，轉(zhuǎn)化液涂抹在含有IPTG和X-gal的LB固體培養(yǎng)基平板上進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，得到微衛(wèi)星基因組文庫。2、含微衛(wèi)星序列的陽性克隆的篩選、測序及微衛(wèi)星引物的設(shè)計(jì)(1)挑取白色單菌落接種到lmLLB培養(yǎng)液中，于37t:培養(yǎng)過夜。(2)以菌液為模板，采取PIMA方法(參見Lunt等，1999，MolecularEcology,8:891-894)篩選含有(TTC)n和(ATC)n微衛(wèi)星序列的陽性克隆。(3)將陽性克隆測序，分析是否含有(TTC)n和(ATC)n重復(fù)序列。[0059](4)根據(jù)微衛(wèi)星重復(fù)序列兩側(cè)的保守序列設(shè)計(jì)引物。(5)測序結(jié)果采用SSRHunter1.3軟件分析序列，并用BioeditSequenceAlignmentEditor軟件對所有序列進(jìn)行比對分析、歸類，再用Premier3軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。對高度相似的一類微衛(wèi)星序列設(shè)計(jì)特異引物，對進(jìn)一步篩選的陽性克隆進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，以提高篩選效率。3、利用亞麻微衛(wèi)星DNA標(biāo)記分析亞麻品種間的遺傳差異將上述微衛(wèi)星標(biāo)記用于8個(gè)亞麻品種的分析，確定了38個(gè)多態(tài)性豐富、適用于亞麻品種分類的微衛(wèi)星標(biāo)記LU26、LU27、LU28、LU29、LU30、LU31、LU32、LU33、LU34、LU35、LU36、LU37、LU38、LU39、LU40、LU41、LU42、LU43、LU44、LU45、LU46、LU47、LU48、LU49、LU50、LU51、LU52、LU53、LU54、LU55、LU56、LU57、LU58、LU59、LU60、LU61、LU62、LU63(表1)。具體操作過程如下(1)按鄧欣等的方法(參見鄧欣等，2007，中國麻業(yè)科學(xué)，29(4):184-188)提取各個(gè)亞麻品種的DNA作為模板，進(jìn)行PCR。(2)分別用LU26、LU27、LU28、LU29、LU30、LU31、LU32、LU33、LU34、LU35、LU36、LU37、LU38、LU39、LU40、LU41、LU42、LU43、LU44、LU45、LU46、LU47、LU48、LU49、LU50、LU51、LU52、LU53、LU54、LU55、LU56、LU57、LU58、LU59、LU60、LU61、LU62、LU63這38個(gè)位點(diǎn)的38對引物(引物序列見表1)擴(kuò)增這8個(gè)亞麻品種的DNA。(3)將PCR產(chǎn)物在8%的丙烯酰胺凝膠上電泳，銀染并拍照，得到圖1-38。(4)結(jié)果分析每個(gè)擴(kuò)增條帶按有或無記錄，擴(kuò)增條帶存在時(shí)賦值為l，否則賦值為0。采用SPSS10.1forwindows統(tǒng)計(jì)分析軟件中的系統(tǒng)聚類分析程序，距離測量選用相關(guān)系數(shù)距離法，用類間平均連鎖法(Between-groupslinkage)進(jìn)行聚類分析并建立系統(tǒng)樹。由附圖1-38可看出，本發(fā)明的38個(gè)微衛(wèi)星引物在供試的8個(gè)品種中都出現(xiàn)擴(kuò)增片段的多態(tài)性，由此可見，本發(fā)明的這38個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記能用于亞麻品種分類和遺傳關(guān)系分析。表1引物特性表引物序列，退火溫度，片段大小位點(diǎn)基序引物序列(5'-3，)產(chǎn)物大小(bp)退火溫度rc)F:TCATTCATCTCCTTCCACTAAAALU26(TTC)m17958R:TTGAAAGCCCTAGTAGACACCAF:TCCGGACCCTTTCAATATCALU27(TTC)u14560R:AACTACCGCCGGTGATGAGCTCGTGATCTCCTTCATCCL腦(TTC)"16260R:MAACCACGTCCAGATGCTCF:TTATTTCCGGACCCTTTCAALU29(TTC),014861R:AAACTACCGCCGGTGATGATF:GTCACTGGGTGTGTGTTTGCLU30(TTC)714060R:AGCAGAAGAAGATGGCGAAAF:CCCCATTTCTACCATCTCCTTLU31(TTC)713760R:CAACAGCGGAACTGATGAAAF:CATCCMCAAAGGGTGGTGLU32(TTC)2114660R:GGAACAAAGGGTAGCCATGA(TTC)l2TTT(TTF:TCCCGTAATATTCTATGTTCTTCCLU3319858C)22TTT(TTC)7R:TGAGTTGGACCTTACAAGACTCAF:TTGCGTGATTATCTGCTTCGLU34(TTC)1713260R:ATGGCAGGTTCTGCTGTTTCF:GCCTAAAGCTGATGCGTTTCLU35(TTC)1015060R:TGTCAGGCTCCTTCTTTTGC<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>F:CCTGCAGGAA嵐GTGAAGCLU51(TTC)u13560R:CTGCAAACAGCACMCTTCCF:GTTTGAGAAGAGGGCATCCALU52(TTC)4T(TTC)1716760R:GTTGGGGTGAAGAGGAACAAF:GCTGTTAGCACTCAGCAGCALU53(TTC),。13760R:CACGTTGACCMCAAAACCAF:GGGCAGTGATTGATTGGTTTLU54(ATC)511860R:GGCGGCMTTGCTACATT(ATC)s...(ATCF:TCTTGACCATCAGCATCACCLU5516860R:GAGGCACAGGGAAACTAACGF:TCTTTGTTTGGTGCCMAGTTLU56(ATC)1211258R:TTCATGATCTCACCTAACCTGAF:ACGCGTAAACTTTCCGTTTCLU57(ATC)1214760R:ATAATGTCGGCTGCTTCTGCF:TTCTCCATCATCTCACATCCALU58(ATC)416859R:CCAAATCAGAATGTGCGTGTF:GGAAGAATTGGAAGAGGAAGGLU59(ATC)512860R:CCTTCTCCCATGATCAAACAAF:CCAACGGATCATCCTCTAGCLU60(ATC)514961R:GGACAGAAAGGGGAAAGGAAF:GAAGTTCGTGGGAGGAGTTGLU61(ATC)1412760R:CCACATGAACCGCTGTAGAAF:AGTACCCAACGCCCAGATTT(ATC)912560LU62R:AACAGCAGTCCTGGCAGTCTF:GATCTTGTTGCCTGGGAAAGLU63(ATC)910460R:TTCGTTTGCAATACGTCAGC表l中F表示5'端引物，R表示3'端引物。本發(fā)明提供了38個(gè)亞麻微衛(wèi)星位點(diǎn)的DNA序列及擴(kuò)增上述38個(gè)亞麻微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物序列和擴(kuò)增方法。38個(gè)亞麻微衛(wèi)星位點(diǎn)用于亞麻品種分類、遺傳關(guān)系分析和標(biāo)記輔助育種，重復(fù)性好，是一種可靠有效的分子標(biāo)記。SEQUENCELISTING〈110〉中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所110076]〈120〉亞麻TTC和ATC重復(fù)基序微J0077]〈130〉亞麻TTC和ATC重復(fù)基序微J0078]〈160>380079]〈170>PatentInversion3.30080]〈210>10081]〈211>4040082]〈212>DNA0083]〈213〉亞麻0084]〈220〉0085]〈221〉TTC重復(fù)0086]〈222〉(95).(197)0087]〈400>10088]cateaacttc0089]cattcatctccttccactea0090]tcttcttcttcttcttcttcttcttcttct0091]tcttcttcttcttcttcggt0092]tC3Cg3gC3gc朋tecagc3atettgcctc0093]tegctggtegcttccaaacagcctcagcag0094]gtgg朋gCgElcgctttcgacactetgggte0095]〈210>20096]〈211>2830097]〈212>DNA0098]〈213〉亞麻0099]〈220〉0100]〈221〉TTC重復(fù)0101]〈222〉(131).(163)0102]〈400>20103]atgttecccttctccttcttcttctcttga0104]acttetttccggaccctttcaatatcaeca0105]tecctcctgcttcttcttcttcttcttctt0106]caccgacgccaccatcatcaceggeggteg0107]cga朋朋tggtcaattcttgttgaaegget0108]〈210>30109]〈211>5180110]0111]〈212>DNA〈213〉亞麻0112]〈220〉0113]〈221〉TTC重復(fù)0114]〈222〉(117).(150)星DNA標(biāo)記星DNA標(biāo)記cctcattegaatcatccctc60tcgccttcttcttcttcttcttcttcttct120tcttcttcttcttcttcttcttcttcttct180atec皿tggtgtctectegggctttcaaga240tegteccattgctgctgctgaccatttgga300cttggctccgagcccatgcaaccttctecg360tgtecacatc404tttgcaacgtcaateccgccgttegttetg60teacctcatttcteccatctccttcattct120cttcttcttcttcatttccgccgccgcccc180tttcatcagttccgctgttgtttettgagg240atccctttctgtt283<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>0154]〈213〉亞麻0155]〈220〉0156]〈221〉TTC重復(fù)0157]〈222〉(143)(157)0158]〈400>60159]acgttecccttctccttcttcttctcttga0160]acttetttccggaccctttcaatatcaeca0161]tecctcctgcttcttcttctccttcttctt0162]caccgacgccaccatcatcaceggeggteg0163]cga朋朋tggtcaattcttgttgaaegget0164]〈210>70165]〈211>2830166]〈212>DNA0167]〈213〉亞麻0168]〈220〉0169]〈221〉TTC重復(fù)0170]〈222〉(113).(182)0171]〈400>70172]attggagggtggtggtggCgg郷ag腿g0173]cc朋ca朋gggtggtggtggg皿cgg皿cg0174]cttctttcttcttcttcttcttcttcttct0175]tcctcatggcteccctttgttcctcttcac0176]acaagttettttctttttgt0177]〈210>80178]〈211>3790179]〈212>DNA0180]〈213〉亞麻0181]〈220〉0182]〈221〉TTC重復(fù)0183]〈222〉(136).(168)0184]〈400>80185]朋teggttgtctgtttctctategtctcte0186]gac朋c朋gcgagagcactctecagagttc0187]gtcttggtctctetcttcttcttcttcttc0188]ttcttcttcttcttcttcttcttcttcttc0189]ttcttcttcttcttcttcttcttctcagtg0190]tgagtttggc3gC3Cg3Cgtgctgttccte0191]gg卿gg3Cgaatctetct0192]〈210>9tttgcaacgtcaateccgccgttegttetg60teaccccatttcteccatctccttcattct120cttcttcttcttcatttccgccgccgcccc180tttcatcagttccgctgttgtttettgagg240atccctttctgtt283gtegtgccgttgggtttgag60cacatgctcgcacatgtecactttcttctt120tcttcttcttcttcttcttcttcttcttct180cccaacttggctccttcttettectectec240aggttgecactct283tetettgtggtegttttcattttgt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AAGLU63-R:TTCGTTTGCAATACGTCAGC專利摘要本發(fā)明公開了一種亞麻TTC和ATC重復(fù)基序微衛(wèi)星DNA標(biāo)記，提供了38個(gè)亞麻微衛(wèi)星位點(diǎn)的DNA序列及用于擴(kuò)增上述38個(gè)亞麻微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物序列和擴(kuò)增方法。這38個(gè)亞麻微衛(wèi)星位點(diǎn)用于亞麻品種分類、遺傳關(guān)系分析和標(biāo)記輔助育種，重復(fù)性好，是一種可靠有效的分子標(biāo)記。文檔編號C12Q1/68GKCN101705278SQ200910044727公開日2010年5月12日申請日期2009年11月9日發(fā)明者王玉富,薛紹東,鄧欣,邱財(cái)生,郝冬梅,陳信波,龍松華申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所導(dǎo)出引文BiBTeX,EndNote,RefMan