專利名稱:一種家蠶幼蟲的性別鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物體的性別鑒定方法，特別是一種家蠶幼蟲的性別鑒定的方法。
背景技術(shù)：
栽桑養(yǎng)蠶起源于我國，至今已有5000多年的歷史。繭絲業(yè)一直是我國的優(yōu)勢傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)，蠶繭生絲年產(chǎn)量和出口量分別占世界總額的70％和80％以上，是世界繭絲業(yè)的中心。
但是，在20世紀的一百年中，我國所采取的養(yǎng)蠶技術(shù)體系，總體上是基于國外在20世紀三四十年代所建立的，蠶業(yè)科技在相當長的一個時期內(nèi)沒有明顯突破。
建立在現(xiàn)代科學技術(shù)上的，利用生物基因技術(shù)開展的養(yǎng)蠶技術(shù)體系就成為世界各繭絲業(yè)國家的競爭焦點。我國科學家僅用5個月，就完成了“框架圖”的繪制工作，家蠶基因組“框架圖”的繪制完成，將有助于人們獲得家蠶基因結(jié)構(gòu)組織的詳細信息和全部基因、，從分子水平上深刻闡明家蠶的生物學特性、吐絲機理，可利用基因研究手段培育出新型高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)蠶品種等。
已知雄蠶較雌蠶除了具有較高的生命力外，還有食桑少，發(fā)育快，繭參率高和繭絲長，解殊絲長，凈度好等優(yōu)點。因而絲繭養(yǎng)育人們都希望專養(yǎng)雄蠶。另一方面為了提高蠶種場的制種效益，人們希望多養(yǎng)雄蠶，因為雄蠶可以利用2次。
現(xiàn)已找到了一些控制桑蠶性別的途徑(何克榮，夏建國等，桑蠶的性別控制與專養(yǎng)雄蠶的研究，蠶桑通報，1998年第03期)。把家蠶控制身體特種斑紋顏色的基因和性別基因轉(zhuǎn)接到一起，就可以讓雌雄家蠶的身體呈現(xiàn)出不同顏色。一旦搞清家蠶的性別基因序列和分子調(diào)控機理，人們就能夠最終實現(xiàn)“單養(yǎng)雄蠶”的夙愿。如用輻射誘變，將第10染色體上的第2白卵基因易位到W染色體上，獲得限性卵色系；將第2染色體上含有斑紋基因的染色體片斷易位到W染色體上，獲得限性皮斑系；將第2染色體上的黃血基因Y易位到W染色體上，獲得了限性黃繭突變系。由此可以利用這些已知基因序列，設計特定的引物進行PCR擴增檢測。
“框架圖”的完成是家蠶基因組研究和開發(fā)計劃的第一步，而“精細圖”預計也即將完成?？蒲腥藛T將利用生物信息學的最新方法，對家蠶所擁有的所有基因進行注釋，開展重要功能基因的基礎(chǔ)和應用研究。到時候，會對家蠶的特定性別基因等有個更為明晰的了解和定位。
因為家蠶的性別特征在幼蟲時期十分模糊，目前還沒有很好的鑒別方法。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種采用DNA基因方法來對家蠶幼蟲的性別進行鑒定的方法，以解決現(xiàn)有家蠶幼蟲不能很好鑒別的問題。
本發(fā)明的目的可以通過以下方法來實現(xiàn)一種家蠶幼蟲的性別鑒定的方法，該方法包括如下步驟(1)家蠶DNA的提取；(2)利用分光光度計和瓊脂糖凝膠電泳測定核酸(3)利用與家蠶性別決定有關(guān)的基因序列設計引物，進行PCR擴增；(4)將PCR擴增的產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳；(5)通過電泳的結(jié)果，進行家蠶幼蟲性別的鑒定。
采用上述方法，可以很方便地鑒別出家蠶幼蟲的性別，提高蠶種場的制種效益。
圖1為本發(fā)明提取的家蠶總DNA的瓊脂糖凝膠電泳圖。
圖2本發(fā)明用與家蠶性別有關(guān)的基因設計特定熒光引物PCR后的瓊脂糖凝膠電泳圖。
具體實施方式家蠶DNA的提取與DNA的測定首先從家蠶取少量的組織進行DNA的提取，將提取物以一定比例稀釋后，用紫外分光光度計在260nm波長下測提取物OD，估算大致濃度。然后取1-3μl的提取物進行瓊脂糖凝膠電泳圖1，條帶100是Marker，條帶101-117是提取的家蠶總DNA，其中101-112是沒有純化、沒有酶解RNA的家蠶總DNA，113-117是經(jīng)純化、消化RNA的家蠶總DNA條帶。位于101-117加樣孔附近的條帶120是家蠶的總DNA。位于101-112加樣孔遠端的彌散狀條帶121是RNA。
特定基因的PCR擴增與檢測利用控制桑蠶性別的基因，如已知獲得限性卵色系的易位到W染色體的白卵基因序列，利用此基因設計引物，取1μ總DNA為模板，用設計好的引物(或熒光引物)進行PCR擴增反應，將取反應物3μl進行瓊脂糖凝膠電泳檢測鑒定家蠶的性別。如圖2，其中CK是陽性對照，CK，5，9，14，，19加入Marker的條帶，1-22是與家蠶性別決定有關(guān)的基因用熒光引物PCR擴增后的產(chǎn)物，25是與家蠶性別決定有關(guān)的基因位點1，26是與家蠶性別決定有關(guān)的基因位點2。據(jù)已知的基因序列信息可知1-11為雌性，12-22為雄性。
如上所述，還可利用已知獲得限性皮斑系易位到W染色體含有斑紋基因序列，設計引物進行性別檢測；同法可以利用獲得了限性黃繭突變系的易位到W染色體的黃血基因Y。
除了以上所述的三種已知的與家蠶性別基因有關(guān)的序列可以應用于本發(fā)明的檢測方法外，隨著對家蠶基因圖譜的進一步深入了解，后續(xù)發(fā)現(xiàn)的決定家蠶性別的基因均可以用本方法檢測。
權(quán)利要求
1.一種家蠶幼蟲性別鑒定的方法，其特征在于包括如下步驟(1)家蠶DNA的提?。?2)利用分光光度計和瓊脂糖凝膠電泳測定核酸；(3)利用與家蠶性別決定有關(guān)的基因序列設計引物，進行PCR擴增；(4)將PCR擴增的產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳；(5)通過電泳的結(jié)果，進行家蠶幼蟲性別的鑒定。
2.權(quán)利要求
1所述的一種家蠶幼蟲性別鑒定的方法，其特征在于所述的與家蠶性別決定有關(guān)的基因，是獲得限性卵色系的易位到W染色體的白卵基因序列。
3.權(quán)利要求
1所述的一種家蠶幼蟲性別鑒定的方法，其特征在于所述的與家蠶性別決定有關(guān)的基因，是獲得限性皮斑系易位到W染色體含有斑紋基因序列。
4.權(quán)利要求
1所述的落地燈，其特征在于所述的與家蠶性別決定有關(guān)的基因，是利用獲得了限性黃繭突變系易位到W染色體上的黃血基因Y序列。
專利摘要
本發(fā)明提供了一種家蠶幼蟲的性別鑒定的方法，該方法包括家蠶DNA的提??；利用分光光度計和瓊脂糖凝膠電泳測定核酸；利用與家蠶性別決定有關(guān)的基因序列設計引物，進行PCR擴增；將PCR擴增的產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳；通過電泳的結(jié)果，進行家蠶幼蟲性別的鑒定等步驟。采用上述方法，可以很方便地鑒別出家蠶幼蟲的性別，提高蠶種場的制種效益。
文檔編號C12Q1/68GK1990881SQ200510112347
公開日2007年7月4日 申請日期2005年12月29日
發(fā)明者湯霈霈 申請人:上海市向明初級中學導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan