專利名稱:線蟲貯存和運輸的改進方法
一方面，本發(fā)明闡述了特別適用于防治有害昆蟲的昆蟲病原線蟲的貯存方法。另一方面，本發(fā)明闡述了適合于貯存和運輸線蟲的容器。
在探索能防治有害昆蟲并對環(huán)境影響最小的替代農用殺蟲劑的過程中，現(xiàn)在的注意力正在轉向生物制劑，昆蟲病原線蟲類，其中包括斯太內爾線蟲科(Steinernematidae)和異小桿科(Hetror-habditidae)，提供了這樣一種可能性。它們是昆蟲的天然病原菌。
在土壤中發(fā)現(xiàn)的昆蟲病原線蟲為第三期感染幼蟲。它能找到并穿透昆蟲的幼蟲和成蟲。這些線蟲帶有特有的共長細菌嗜線蟲異小桿科/發(fā)光異小桿科(Xenorhabdus nematophilus/lumines-cens)。它們有助于殺死昆蟲。在昆蟲內，一旦線蟲干擾昆蟲的免疫系統(tǒng)并釋放出迅速增殖的共長細菌，就會破壞昆蟲的血腔(昆蟲的血液和組織)。線蟲開始以細菌和部分消化的血腔為食，并成熟和繁殖。該線蟲和細菌一起可引起昆蟲在24-72小時內死亡。
用昆蟲病原線蟲治害蟲的概念是建立在線蟲的大量培養(yǎng)，并能有效地用于對線蟲敏感的有害昆蟲的基礎上的。由于線蟲的大量培養(yǎng)存在問題，以及不能有效地貯存昆蟲病原線蟲，用于生物防治的昆蟲病原線蟲的開發(fā)進程受到阻礙。過去，線蟲的培養(yǎng)限于體內法，如在大蠟螟(Galleria mellonella)上。但最近用體外培養(yǎng)已取得很大進展。因為已實現(xiàn)人工大量培養(yǎng)線蟲，用昆蟲病原線蟲作為商業(yè)生物殺蟲劑的可能性更加現(xiàn)實了。
把線蟲作為化學殺蟲劑的實際替代物之前，它的貯存和運輸已成為關鍵性因素。
眾所周知，第三期線蟲在極苛刻條件(如干燥和冷凍)下，能在土壤中很好存活相當長時間。并且當條件變得有利時，還能復蘇，并在昆蟲出現(xiàn)時感染它們。
然而另一方面，線蟲對于迅速干燥和處于紫外線照射和高溫下易于損傷。
第三期感染線蟲幼蟲(非喂養(yǎng)期)靠體內貯存的物質生存。
很可能，在所希望的感染期之前的生長期間，一定種的線蟲存活能力與它積累特定的能量儲備(如糖原或脂類)的能力有關，也與使它們以一定速率活動的能力有關。該速率是以滿足線蟲幼蟲不生長(存活)的需要。在感染的第三期，在環(huán)境中無助于使目標昆蟲宿主感染的過快活動會繼續(xù)浪費能耗，減短存活期和隨后的感染機會。因此，存活時間部分地可由可利用的能量貯備決定，但也可能還包括幾個另外的因素，如酶的失活作用和有毒新陳代謝付產物的產生和分泌。
目前出售并用于某些昆蟲的效能試驗的線蟲，貯存在低溫(1-10℃)下。在這樣的條件下，降低了線蟲中的分解代謝速率。
不是用連續(xù)的或間歇的方法，就是通過有限數量的線蟲給密閉的容器供氧。許多工作者都強調，貯存線蟲時，氧化作用的重要性和大的表面積/體積比對氧交換的重要性。(Datky et al，1964 and Hara et al，1981)。由于使用濾紙、試紙、棉絨和海綿等，提高了線蟲懸浮液與空氣的接觸面積。例如，在100克清潔干燥的海綿上，5億個毛紋斯太內爾線蟲(Steinernema feltiae)和毛蚊斯太內爾線蟲(S·bibionis)可在1-2℃，連續(xù)充氣的氣囊中貯存長達4個月(Bedding，1984)。
上述工作者在為實驗室和田間試驗提供線蟲的文章討論了線蟲的保存。
通常由于下列缺點，所描述的、用于田間試驗和實驗室的線蟲貯存方法都不適合于廣泛的商業(yè)模規(guī)配給。
例如(ⅰ)需要冷凍(ⅱ)需要氧(它通過充氣或擴大充氣的空間提供)(ⅲ)即便用上面提到的措施，線蟲密度仍有限(最高達150000個/毫升)。
(ⅳ)即便使用載菌體，仍難以抽提線蟲。
本發(fā)明的目的之一是要提供更適合于商業(yè)應用的線蟲貯存和運輸方法。
本發(fā)明一個方面的內容是以感染的線蟲在缺氧和低于40℃的條件下，仍能生存很長時間這一驚人發(fā)現(xiàn)為基礎的。根據本發(fā)明這一方面的內容，提供了貯存昆蟲病原線蟲的方法，其中感染的昆蟲病原線蟲幼蟲的乳油在基本上厭氧的條件下貯存。
“基本上厭氧的條件”這一術語意思是，在這些條件下，線蟲得不到游離氧。應該指出，在貯存氣氛中，存在的氧的數量可能變化。厭氧作用可能意味著對于不同種的線蟲有不同的O2含量。本發(fā)明這一方面的內容是以本發(fā)明者的發(fā)現(xiàn)為前題。即感染的幼蟲在貯存期間不需要氧化作用和換氣或高的表面/體積比。因此，最初的貯存條件可能是相當好氧的。但是一旦O2含量被線蟲吸呼作用消耗，它就會變成厭氧條件。
厭氧條件可用各種方法達到。例如，像上面提出的那樣，線蟲本身可消耗貯存氣氛中的氧。另一方面，線蟲可在真空、氮氣、二氧化碳或其它惰性氣體條件下裝封。
氧氣含量最好小于0.4%(體)，特別是小于0.25%(體)。但是正如上面提出的那樣，對于不同種線蟲，厭氧生活可能高于上述氧濃度。
上述條件與商業(yè)上使用的線蟲數量有關，即每克乳油至少含0.2×106個線蟲。按照以前描述的技術(線蟲濃度相當低)來看，這一濃度是很驚人的。
線蟲最好在該微生物生長受抑制條件下貯存，特別是在抗菌劑存在的條件下。
這里使用的抗菌劑這一術語指的是可破壞細菌和真菌生長或可抑制細菌和真菌生長的物質。它包括制菌劑、殺菌劑、制真菌劑和殺真菌劑。
抗菌劑最好是甲醛或次氯酸鈉水溶液，濃度最好為0.1-1.0%(重)。有許多替代的抗菌劑可以使用，只要它們在使用的數量范圍內對線蟲是無毒的。
按照本發(fā)明另一方案，線蟲貯存在容器中之前，先用能使線蟲表面滅菌的抗菌劑洗滌。
在本發(fā)明可供選擇的另一方面內容中，提供了這樣一種有特征的方法。在該方法中，線蟲在對線蟲無毒的有高滲透力的溶液中貯存和運輸。在這一方案的最優(yōu)形式中，線蟲懸浮在濃度為30-70%(重)的單糖或二糖溶液中。例如，蔗糖或葡萄糖。因為這一原理沒有限制，可以認為，高滲透力的溶液降低了線蟲不希望有的生長速度。
本發(fā)明的另一方面的內容中，線蟲在吸附劑(如活性炭)或合成樹脂(如Amberlite)存在下貯存。吸附劑最好呈粉狀、放入凝膠中的粉或片劑。在本發(fā)明這一情況中，線蟲乳油或懸浮液與適量吸附劑(如活性炭)混合，并在能抑制線蟲生長的條件下貯存。在這一情況下，線蟲可在基本上厭氧條件或好氧條件或真空下貯存。線蟲最好在基本上處于厭氧條件的容器中貯存。雖然厭氧條件有助于降低線蟲不希望的生長的可能性，但是人們發(fā)現(xiàn)，氧的存在沒有多大的影響。在線蟲-吸附劑混合物中，吸附劑最好為10-70%(重)。由此得出，線蟲乳油最好為混合物的90-30%(重)。在線蟲乳油中，線蟲的濃度最好為(0.2-2)×106個線蟲/克乳油。
吸附劑是能把各種化學物質吸附到它的表面上的物質。這樣就可以把吸附劑或其它相對惰性的物質(如木屑、海綿、砂、濾紙和非活性炭)區(qū)分開。
上述這些方法闡述了線蟲貯存和運輸的新方法，然而本發(fā)明另一方面的內容，不僅根據本發(fā)明而且也根據已知的貯存線蟲的方法，闡述了貯存和運輸線蟲的容器。
過去，運輸在載菌體基質上(如聚氨基甲酸乙酯海綿屑、濾紙、試紙、玻璃毛或木屑等)的線蟲是常事，以便提高總的表面積/體積比，改進裝在密封容器或開孔容器的線蟲周圍的空氣的轉移。根據本發(fā)明這一方面的內容，線蟲貯存在粉狀吸附劑或顆粒吸附劑上。在活性炭粉的情況下，線蟲可與活性炭混合，但在其它許多情況下，即吸附劑呈顆粒狀或運輸在載菌體基質上的線蟲的情況下，在線蟲用于所希望的地方之前，從載菌體基質中回收線蟲是必要的。回收線蟲可能耗時多，勞動強度大，并常常由于從載菌體基質中除去線蟲的收率低而引起線蟲大量損失。另外，在已分離的線蟲懸浮液中存在的一些載菌體基質小碎片可能給后處理帶來問題。例如，堵塞所用的設備。為了解決這一問題，這里提供了貯存和運輸線蟲的容器。該容器是有兩個空室和適合于把載菌體基質保留在上述第一空室中而又可讓線蟲滲透的設備構成的密封容器。第一個空室裝線蟲載菌體基質，第二個空室有助于從上述基質中回收線蟲。把載菌體基質保留在上述第一空室的設備最好由線蟲能穿透的、有適當篩目的篩子，或線蟲可滲透的海綿過濾器，或全部或部分可滲透線蟲的袋子構成。
雖然有許多可能屬于本發(fā)明的其它形式，現(xiàn)在僅參考附圖來描述幾個最優(yōu)方案。其中圖1說明貯存和運輸線蟲的第一個最優(yōu)方案。
圖2說明貯存和運輸線蟲的第二個最優(yōu)方案。
圖3是本發(fā)明第三個最優(yōu)方案的容器剖面圖。
圖4是本發(fā)明第四個最優(yōu)方案的容器剖面圖。
圖5是本發(fā)明第五個最優(yōu)方案的容器剖面圖。
圖6是本發(fā)明第六個最優(yōu)方案的容器剖面圖。
關于圖1。它描繪了密閉容器2(如塑料容器)，它裝有與吸附劑(如活性炭)混合的線蟲乳油3?；钚蕴康臄盗靠梢栽诤軐挼姆秶鷥茸兓?。但活性炭的數量在30-50%(重)的范圍內，得以滿意的結果。
關于圖2。線蟲乳油5裝在半透膜氣囊4內，例如滲析管。氣囊4裝在容器6中，該容器裝有活性炭或者水或緩沖液的活性炭懸浮液?？咕鷦┳詈没煸诰€蟲乳油或混在容器6、囊4周圍的液體中。圖2描繪的方案特別適合于活性炭與線蟲乳油保持分離的情況。滲透膜的孔徑最好小于10微米。因此，在另一方面，這里提供了線蟲貯存設備，它由可裝在可密閉的容器中的密封的半透膜氣囊構成。在半透膜氣囊和容器壁之間裝有很細的粉狀吸附劑或分散在水溶液中的吸附劑。吸附劑最好是活性炭。應當知道，活性炭的配方可使線蟲以高密度裝填，即每克100萬個毛紋斯太內爾線蟲。對包裝的大小設有限制，可以1克以下到1公斤或1公斤以上，這取決于應用的面積和單位面積的用量。
應當知道，本發(fā)明上述的每一個方案都可使線蟲在不同程度的厭氧和氧壓下貯存。線蟲可以在真空中貯存，或在氮氣、一氧化氮、二氧化碳或空氣中貯存。而且貯存條件不要求低溫?？梢钥吹剑瑥氖覝氐?7℃左右，線蟲可長時間維持生存能力。
轉過來看圖3。容器10由蓋12密閉的空殼體11構成。袋13懸掛在蓋12下面，它裝有線蟲載菌體基質14。袋13的一部分15，線蟲可滲透過去，而帶菌基質不能滲透。
蓋12裝有管口16，水可通過管口16進入袋13，以便從載菌體基質14中抽提線蟲。
使用中，通過管口16泵入水，線蟲通過可滲透部分15從載菌體基質14中洗出。空殼體11可用來裝線蟲洗滌液。作為一個替代的辦法，蓋12和袋13可從容器中取出，從袋13洗出的線蟲裝入另一適合的容器中。
現(xiàn)在表明，在另一可選擇的方案中，為了易于通過蓋12輸入水，管口16可用減薄的部分(Weakened portion)或薄片部分(pull tab portion)代替。
轉過來看圖4。容器20由蓋22密閉的空殼體21構成，它借助于線蟲可滲透網25分成兩個室。第一室和第二室分別為23和24。
使用中，支持線蟲培養(yǎng)物的線蟲載菌體基質26被送到密封容器20的第一室23中。當需要抽提線蟲時，取下蓋22，用水洗線蟲載菌體基質，懸浮的線蟲通過網25進入第二室24。管口27裝在殼體21的下半部第二室24中，以便能從容器20中放出懸浮線蟲。另一方面，管口可用減薄的部分或薄片部分代替。為了排出懸浮在洗滌水中的線蟲，可把容器刺穿。
轉過來看圖5。容器30由蓋32密閉的空殼體31構成。線蟲可滲透的袋33放在空殼體31內。它能使載菌體基質34保留在袋33中，而使水和懸浮的線蟲通過袋33。
在使用中，可僅把袋33從容器中取出，洗滌出線蟲?；蛉∠律w32，用水通過裝有載菌體基質34的袋33進行洗滌。減薄的部分35最好裝在空殼體31的底部，以便為水和懸浮的線蟲提供可排空的出口。
轉過來看圖6。容器40為蓋42密閉的空殼體41。在空殼體41的底部裝有填料43即粗粒泡沫物質，如聚氨基甲酸乙酯海綿。載菌體基質44置于粗粒的多孔海綿狀物質43的上方。使用中，取下蓋42或在蓋上裝一管口，水經載菌體基質44進行洗滌，從載菌體基質中抽提出線蟲。水和懸浮的線蟲經粗粒泡沫物質43到孔口45?？卓?5可為薄片部分，但另一方面，在容器底部的減薄的部分可由適于刺穿的物質組成。
前面描述的本發(fā)明的幾種方案和對于這些技術的明顯改進可在不違背本發(fā)明的范圍內作到。例如，通過適宜的柱塞設備，可使從容器的第一室取出線蟲變得更為方便。另一可取的方法，容器可有一個普通的靈活出口軟管，借助軟管可用壓力排出第二室內的水。
上述這些方法可用于各種線蟲，特別是純的線蟲或斯太內爾線蟲科和異小桿科菌種的混合物，其中包括毛紋斯太內爾線蟲、格氏斯太內爾線蟲(S·glaseri)、(以前為小卷蛾新寄生線蟲〔Neoaple-ctama carpocapsae〕、嗜桿菌異小桿科＊(Heterorhabditis bacteriophora)和夜蛾異小桿科＊(H·heliothidis)。
實用于本發(fā)明上述的運輸方法的現(xiàn)場使用容器，可由任何適宜的材料制成并有任何適宜的尺寸。例如，真空包裝的塑料小藥囊、類似注射器的鑄模、充有空氣或惰性氣的瓶子、罐子、洋鐵罐或滲析管。
＊此處可能有誤，Heterophabdilis應為Heterorhabdilis(譯者注)線蟲可直接從容器中取出使用或用水或其它溶液稀釋的方法取出使用，這取決于特定的產品配方和應用。
應該指出，評價貯存配方的性能是以貯存的線蟲的感染能力以及游動性(生存能力)為基礎的。
用在濾紙上的羊麗蠅類銅綠蠅幼蟲進行貯存的線蟲的常規(guī)生物鑒定。在23℃黑暗中孵化5天后，解剖幼蟲確定它們是否感染。得到的結果再與由新鮮線蟲得到的結果比較。
為了概括地描述發(fā)明的特征，現(xiàn)在描述一些特定的例子，僅作為一個說明。
例1格氏斯太內爾線蟲菌株NC513在人工介質上的單寄生培養(yǎng)物中培養(yǎng)，該人工介質由雞廢棄物組織勻漿和聚氨基甲酸乙酯海綿組成。從人工介質上收獲的第三期感染幼蟲，并用水洗滌。清潔的線蟲與0.1%甲醛溶液混合，并在37℃下貯存在密封瓶中。實驗結果在表1中給出。結果證明加入抗菌劑(甲醛)，增加了線蟲貯存穩(wěn)定性。作為對比，1.0%甲醛溶液優(yōu)于水。
在另一相同實驗中，在30℃下貯存54天后，格氏斯太內爾線蟲的生存能力為90%。
表1 在37℃下貯存后抗菌劑對格氏斯太內爾線蟲生存能力的影響配方 生存能力格氏斯太內爾線蟲在水中 13天后 19天后 30天后- 0 -格氏斯太內爾線蟲在0.1%甲醛溶液中 90 80 80
例2象例1概述的那樣，準備格氏斯太內爾線蟲菌株NC513。已洗滌的線蟲懸浮在M9沖緩溶液中，并在22、28、33和37℃下在密封的瓶中貯存30天，為了對照，懸浮在水中的線蟲貯存19天。
在表3給出了這些試驗的結果。它們表明生理沖緩緩劑M9的加入增加了線蟲的貯存穩(wěn)定性。
表3 格氏斯太內爾線蟲在不同溫度下貯存30天(在M9緩沖劑中)后的生存能力在19天(水)和30天(M9)后的生存能力%配方 22℃ 28℃ 33℃ 37℃格氏斯太內爾線蟲在水中 0 0 0 0格氏斯太內爾線蟲在M9緩沖劑＊90 60 20 -＊M9緩沖劑溶液的組成為在1立升蒸餾水中含Na2HPO46克KH2PO43克Nacl 5克MgSO4·7H2O 0.25克例3象例1概述的那樣，準備Agriotis毛紋斯太內爾線蟲菌株。線蟲懸浮在水或1.0%甲醛溶液中，過濾，用活性炭粉稍加覆蓋。然后線蟲在22℃貯存。表2列出貯存33天后的試驗結果。
這些結果證明了加入吸附劑(如活性炭)大大改善了線蟲的貯存穩(wěn)定性，并證明了通過加入抗菌劑(甲醛)進一步提高了穩(wěn)定性。
表2 吸附劑和抗菌劑對毛紋斯太內爾線蟲在22℃貯存33天后生存能力的影響配方 生存能力(%)毛紋斯太內爾線蟲在水中 0毛紋斯太內爾線蟲在水+活性炭中 80毛紋斯太內爾線蟲在1%甲醛溶液+活性炭中 90-95例4象例1概述的那樣，準備Agriotis毛紋斯太內爾線蟲菌株。已洗滌的線蟲懸浮在高滲透力溶液(30%蔗糖溶液)中，并在22℃貯存。貯存33天后線蟲的生存能力為85%。水的對比試驗表明，線蟲已無生存能力。
例5象例1概述的那樣，準備Otio毛紋斯太內爾線蟲菌株。已洗滌的線蟲(在每毫升0.1%甲醛溶液中4000個)與活性炭粉(在0.1%甲醛溶液中，濃度為20%〔重〕)按1∶1混合。
10毫升混合物經予過濾器微孔填料過濾。完全瀝干的帶有線蟲和活性炭粉的填料放入塑料小藥囊中，并密閉。
在室溫下貯存140天后，線蟲的生存能力為92%。貯存后感染能力稍有下降。
例6象例1概述的那樣，準備Mexican毛紋斯太內爾線蟲菌株。含65×106個已洗滌的線蟲的乳油(在每毫升0.1%甲醛溶液中有1.5×106個線蟲)與干的活性炭粉(直徑小于400微米)按1∶1混合，然后密封在塑料小藥囊中。
在24℃下貯存30天和在4℃下貯存至少80天，感染能力仍完整無損。
小藥囊中的混合物懸浮在水中，并通過高壓噴咀(2000千帕)噴到朝鮮薊上。并得出，在應用過程中活性炭無有害的影響。貯存線蟲的溫度對洋蔥羽蛾(artichoke plume moth，platyptilia cazrduidactyla)是滿意的。
一個藥囊中的混合物(90克)足以覆蓋500-5000米2土壤(單位面積用量104-105個線蟲/米2)。
參考文獻Dutky，S·R·，Thompson，J·B·，and Cantwell，G·E·(1964)DD-136線蟲大量繁殖的技術。J·Insect Pathol，6417-422;
Hara，A·H· et al.(1981)weiser小卷蛾新寄生線蟲(Neoaptectana carpocapsae weiser)昆蟲病原線蟲在狗食/洋菜介質上的單寄生大量培養(yǎng)，Advances in Agricul-tural Technology，Wester Series，№ 16 June。
Bedding R·A(1984)昆蟲寄生線蟲新寄生線蟲屬and異小桿層的大規(guī)模生產，貯存和運輸Ann App Biol 104，117-120。
勘誤表
權利要求
1.貯存昆蟲病原線蟲的一種方法。其中感染的昆蟲病原線蟲的幼蟲乳油與吸附劑混合，并在該微生物生長受到抑制的條件下貯存。
2.如權利1要求的方法，其中上述吸附劑選自活性炭和合成樹脂。
3.如權利1或2要求的方法，其中活性炭的濃度為10-70%(重)。線蟲乳油濃度為30-90%(重)。
4.權利1～3中任何一項要求的方法，其線蟲的濃度為(0.2-2)×106個線蟲/克線蟲乳油。
5.權利1-4中任何一個要求的方法，其中線蟲是斯太內爾線蟲科和異小桿科純的線蟲或任何菌種的混合物。
6.權利5中要求的方法，其中所說的菌種是毛蚊斯太內爾線蟲、格氏斯太內爾線蟲、毛紋斯太內爾線蟲、嗜桿菌異小桿科和夜蛾異小桿科。
7.權利1-6中任何一項要求的方法，其中微生物的生長由于抗菌劑的存在而受到抑制。
8.權利1-7中任何一項要求的方法，其中在貯存前用抗菌劑洗滌線蟲，抑制微生物的生長。
9.權利7或8要求的方法，其中所說的抗菌劑選自甲醛和次氯酸鈉。
10.權利7或8要求的方法，其中所說的抗菌劑是高滲透力溶液。
11.權利9要求的方法，其中所說的抗菌劑是濃度為0.1-1.0%(重)的甲醛溶液。
12.適合于延長線蟲貯存時間的配方由感染的昆蟲病原線蟲幼蟲乳油與吸附劑和抗菌劑混合組成。
13.權利12要求的線蟲配方，其中所說的線蟲的濃度為(0.2-2)×106個線蟲/克線蟲乳油。
14.權利12或13要求的配方，其中所說的配料貯存在密封的容器中。
15.貯存昆蟲病原線蟲的方法，其中感染的昆蟲病原線蟲幼蟲乳油在基本上厭氧的條件下貯存。
16.權利15要求的方法，其中貯存前線蟲用抗菌劑洗滌。
17.權利15要求的方法，其中線蟲在抗菌劑存在的條件下貯存。
18.權利15、16或17的方法，其中乳油至少約含0.2×106個線蟲/克。
19.如權利1或2或3要求的方法，其中線蟲在基本上厭氧的條件下貯存。
20.貯存和運輸線蟲的容器，該容器是可密閉的，并有兩個室和適合于把載菌體基質保留在上述第一空室中，而又可讓線蟲滲透的設備。第一室裝線蟲載菌體基質，第二室易于從上述基質中回收線蟲。
21.如權利20要求的容器，其中所說的保留載菌體基質在第一室的設備可選自有適宜篩目的篩子，線蟲可從該篩滲透;或選自子，它的全部或一部分是線蟲可滲透的;或選自線蟲可滲透的海綿過濾器。
專利摘要
本發(fā)明闡述了線蟲貯存和運輸的改進方法。一方面，本發(fā)明提供了一種貯存昆蟲病原線蟲的方法。感染的昆蟲病原線蟲幼蟲的乳油與吸附劑混合，并在該微生物生長受到抑制的條件下貯存。另一方面，本發(fā)明提供了另一種貯存昆蟲病原線蟲的方法。感染的昆蟲病原線蟲幼蟲貯存在基本上厭氧的條件下。
文檔編號C12N1/04GK85101908SQ85101908
公開日1987年1月10日 申請日期1985年4月1日
發(fā)明者塔科·尤卡瓦, 賈尼斯·瑪格麗特·比梯 申請人:澳大利亞生物科技公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan