專利名稱：鉑配合物、其制備和治療應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的用于醫(yī)療實(shí)踐中治療腫瘤疾病的鉑配合物。本發(fā)明還公開(kāi)了制備上述配合物的方法、該配合物作為藥物的應(yīng)用、和包含該鉑配合物作為活性物質(zhì)的藥物組合物。
背景技術(shù)：
本世紀(jì)七十年代末人們將作為有效的細(xì)胞抑制劑的鉑配合物引入醫(yī)療實(shí)踐中。鉑配合物的第一代藥物是順鉑(順-二氨合二氯鉑(Ⅱ))。上述配合物的進(jìn)一步發(fā)展過(guò)程中，合成和試驗(yàn)了十種鉑配合物；其中，卡鉑成為治療腫瘤的一種最重要物質(zhì)。但是，所述的兩種化合物只能非腸道給藥，它們都不適合口服給藥。至于涉及到口服給藥，已證實(shí)EP328274和423707中公開(kāi)的一些四價(jià)鉑的配合物是適合的。除四個(gè)鹵素或羧酸鹽配體外，這些四價(jià)鉑配合物包含兩個(gè)堿性不對(duì)稱基團(tuán)，其中一個(gè)是氨合物(ammin)、另一個(gè)是取代的烷基或環(huán)烷基胺。
目前，仍在尋找較已知鉑配合物具有更強(qiáng)的抗腫瘤功效的鉑配合物。
現(xiàn)在，本發(fā)明已找到了一些新的較現(xiàn)有技術(shù)的鉑配合物具有更強(qiáng)的抗腫瘤功效的鉑配合物。這些新配合物代表了本發(fā)明的基礎(chǔ)。
發(fā)明概述本發(fā)明一方面提供了一種具有通式(Ⅰ)的鉑配合物 其中X代表鹵原子，B代表相互獨(dú)立的鹵原子、羥基或含1-6個(gè)碳原子的羧酸鹽基團(tuán)，和
A代表含10-14個(gè)碳原子的初級(jí)三環(huán)胺，在其三環(huán)核上可以被一個(gè)或兩個(gè)含1-4個(gè)碳原子的烷基取代或不取代，以及本發(fā)明還提供了一種含可被含1-6個(gè)碳原子的羥烷基取代或不取代的β或γ環(huán)糊精的上述鉑配合物的包合配合物。
本發(fā)明尤其優(yōu)選的鉑配合物是其中A代表金剛氨基(adamantylaminogroup)、X和B如上述定義的式(Ⅰ)配合物，還有它們的含β或γ環(huán)糊精的包合配合物，此環(huán)糊精可如上面所公開(kāi)的被取代或不被取代。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的鉑配合物是其中A代表3,5-二甲基金剛氨基(3,5-dimethyladamantylamino group)、X和B如上述定義的式(Ⅰ)配合物，還有它們的含β或γ環(huán)糊精的包合配合物，此環(huán)糊精可如上面所公開(kāi)的被取代或不被取代。
本發(fā)明另一方面提供了制備式(Ⅰ)鉑配合物的方法，其特征在于其中X和A如上述定義的式(Ⅱ)的二價(jià)鉑配合物 在鉑原子上通過(guò)過(guò)氧化氫、在形成鉑(Ⅳ)二羥配合物的情況下被氧化，并且上述配合物的羥基可以通過(guò)酰化劑的作用被羧酸鹽基團(tuán)取代或不被取代。
本發(fā)明還提供了一種制備含β或γ環(huán)糊精的式Ⅰ鉑配合物的包合配合物的方法，該環(huán)糊精可被含1-6個(gè)碳原子的羥烷基取代或不取代，此方法的特征在于將有機(jī)溶劑中的式(Ⅰ)鉑配合物溶液與β或γ環(huán)糊精的水溶液混合，該環(huán)糊精可被含1-6個(gè)碳原子的羥烷基取代或不取代，然后蒸發(fā)所得到溶液中的溶劑。
本發(fā)明還有一方面是提供了上述式(Ⅰ)鉑配合物或其含β或γ環(huán)糊精的包合配合物用作一種藥劑。
最后本發(fā)明提供了一種治療腫瘤疾病的藥物組合物，其特征在于它包含至少一種用作活性物質(zhì)的上述式(Ⅰ)鉑配合物或其含上述可被取代或不取代的β或γ環(huán)糊精的包合配合物，和至少一種藥學(xué)賦形劑。
本發(fā)明的鉑配合物是新的化合物，因?yàn)橹敝连F(xiàn)在這些化合物既沒(méi)有在現(xiàn)有技術(shù)的任何文獻(xiàn)中特別公開(kāi)出來(lái)、也沒(méi)有對(duì)它們的特性進(jìn)行過(guò)表征、更沒(méi)有公開(kāi)其制備方法。這些化合物作為活性物質(zhì)用于治療腫瘤疾病也是新的并有創(chuàng)造性的，因?yàn)閺默F(xiàn)有技術(shù)通過(guò)顯而易見(jiàn)的方式無(wú)法推斷出四價(jià)鉑配合物中存在初級(jí)三環(huán)胺配體可導(dǎo)致本發(fā)明新化合物的抗腫瘤活性增強(qiáng)。
與迄今已知的鉑配合物相比、即與EP328274和423707中公開(kāi)的鉑配合物相比，本發(fā)明的鉑配合物的主要優(yōu)點(diǎn)不僅在于其口服時(shí)的較強(qiáng)功效和低毒性、而且具有廣譜的抗腫瘤活性。
另一方面，本發(fā)明將通過(guò)具體的實(shí)施例進(jìn)行更詳細(xì)的描述。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到這些實(shí)施例是對(duì)發(fā)明目的的舉例說(shuō)明、決不是限制權(quán)利要求書定義的本發(fā)明范圍。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明實(shí)施例1af-雙(乙酸離子)-b-(l-金剛胺)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(以下稱作“LA-12”)的合成在室溫下用過(guò)量的醋酸酐(50.2ml,532mmol)攪拌6.25g(13.3mmol)b-(1-金剛胺)-c-氨合-脫-二氯-af-二羥鉑(Ⅳ)配合物。在此期間，從原始溶液不斷沉淀出固體。沉淀終止后，過(guò)濾該固體并用少量醋酸酐和醚洗滌。在真空干燥器中干燥后，得到4.28g(58.2％)標(biāo)題產(chǎn)品。
通過(guò)1H和13C核磁共振光譜和遠(yuǎn)紅外光譜確定所得產(chǎn)品的特性，并通過(guò)高性能液相色譜確定其純度。
產(chǎn)品C14H26Cl2N2O4Pt的元素分析C(％) H(％) N(％) Cl(％)實(shí)測(cè)值30.244.75 4.9912.81計(jì)算值30.444.74 5.0712.84實(shí)施例2af-雙(乙酸離子)-b-(l-氨基-3,5-二甲基金剛烷)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(以下稱作“LA-15”)的合成在室溫下用過(guò)量的醋酸酐(8ml,84.7mmol)攪拌0.96g(1.93mmol)b-(1-氨基-3,5-二甲基金剛烷)-c-氨合-脫-二氯-af-二羥鉑(Ⅳ)配合物。溶解后，在反應(yīng)混合物中加入10ml醚。連續(xù)攪拌直至沉淀終止。過(guò)濾被沉淀出的固體，用醚沖洗，并在真空干燥器中干燥后，得到0.72g(64.3％)標(biāo)題產(chǎn)品。
通過(guò)1H和13C核磁共振光譜和遠(yuǎn)紅外光譜確定所得產(chǎn)品的特性，并通過(guò)高性能液相色譜確定其純度。
產(chǎn)品C16H30Cl2N2O4Pt的元素分析C(％) H(％) N(％) Cl(％)實(shí)測(cè)值32.885.214.7512.31計(jì)算值33.115.214.8312.22實(shí)施例2ab-(1-金剛胺)-c-氨合-de-二氯-af-二羥鉑(Ⅳ)配合物(以下稱作LA-11)的合成在室溫下將8.01g(18.44mmol)順式-(1-金剛胺)-氨合-二氯鉑(Ⅱ)配合物懸浮在120ml水中。在懸浮液中加入化學(xué)計(jì)算過(guò)量(20ml)的30％(w/w)過(guò)氧化氫的水溶液，在80℃加熱反應(yīng)混合物1小時(shí)，然后冷卻至室溫。通過(guò)過(guò)濾分離固體，用水沖洗并部分干燥。用總量為150ml的二甲基甲酰胺提取并沖洗產(chǎn)品。用醚沖洗以除去剩余的二甲基甲酰胺。在真空干燥器中干燥后，收率為6.45g，即理論值的74.6％(相對(duì)于初始鉑(Ⅱ)配合物)。
通過(guò)遠(yuǎn)紅外光譜分析確定產(chǎn)品的特性，并通過(guò)高性能液相色譜確定其純度。
所得到的產(chǎn)品(C10H22Cl2N2O2Pt)的元素分析C(％) H(％) N(％) Cl(％)實(shí)測(cè)值25.754.76 5.94 15.10計(jì)算值25.654.74 5.98 15.14實(shí)施例3含羥丙基--環(huán)糊精的化合物L(fēng)A-12的包合配合物(以下叫做“LA-12的包合藥物形式)的合成將化合物L(fēng)A-12溶解在丙酮中得到最終濃度為20g/l。在所得溶液中加入羥丙基--環(huán)糊精(164g/l)。在室溫下向該混合物中緩慢并攪拌地加入100mM pH7.3的Hepes的緩沖水相，直至丙酮與水相的最終體積比為1∶10。即使第一次加入水相(約10％水相總體積)后未溶解的環(huán)糊精就快速溶解。最后，通過(guò)低壓升華干燥法從包合配合物的溶液中除去丙酮和水。
通過(guò)用實(shí)驗(yàn)性腫瘤在動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)測(cè)試這些化合物來(lái)篩選本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性，所用的方法稱為V.Jelinek方法(《腫瘤》(neoplasma)12,469(1965),ibid.7,146(1960))。這些實(shí)驗(yàn)性腫瘤例如生長(zhǎng)在DBA2小鼠中的腹水形式(IP-L1210)或固體形式(SC-L1210)的小鼠白血病L1210、生長(zhǎng)在C3H小鼠中的固體和腹水形式(LsG)的Gardner淋巴肉瘤、生長(zhǎng)在NMRI小鼠中的固體(STE)和腹水形式(ATE)的Ehrlich腫瘤、生長(zhǎng)在DBA1小鼠中的腫瘤MC2111(可轉(zhuǎn)移的哺乳動(dòng)物腺癌)、生長(zhǎng)在C57B16小鼠中的固體和腹水形式(SC-B16,IP-B16)的轉(zhuǎn)移性黑素瘤、和生長(zhǎng)在C57B16小鼠中的Lewis轉(zhuǎn)移性肺癌。
除了通過(guò)Student’s t-檢驗(yàn)作出的點(diǎn)式估計(jì)外，用Cox的比例臨危模型和Carter方法(Carter W.H.等《癌癥研究》(Cancer Res.)42,2963(1982))估計(jì)存活時(shí)間并計(jì)算最適宜劑量。根據(jù)這些計(jì)算方法所畫出的活性曲線可計(jì)算最適宜劑量并估計(jì)毒性劑量。這些方法不僅可用于評(píng)價(jià)單一治療時(shí)的效果、而且也可評(píng)價(jià)所有聯(lián)合治療的組份的毒性和影響。因此，制做了劑量與活性之間的依賴性的模型并在一些實(shí)施例中也用此方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。
對(duì)于本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“治療”意指抑制攜帶腫瘤的生物體中疾病的特征性體征和癥狀，即抑制生物體的腫瘤生長(zhǎng)和減少其存活時(shí)間。腫瘤的生長(zhǎng)可以通過(guò)臨床和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察?？梢酝ㄟ^(guò)對(duì)腫瘤組織稱重或測(cè)量腫瘤的大小來(lái)對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)進(jìn)行評(píng)估。
通過(guò)降低患有固體形式的Gardner淋巴肉瘤(SC-LsG)、STE、SC-B16、SC-LLh MC-2111的動(dòng)物的腫瘤重量，即口服這組化學(xué)制劑的化合物，證實(shí)了本發(fā)明化合物對(duì)C3H品系雌性小鼠的這種有效治療作用。已證明，與對(duì)照組即未治療組相比，腫瘤的平均質(zhì)量在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著(P=0.05)降低或者甚至極顯著(P=0.01)降低。
同樣，即口服給藥時(shí)，本發(fā)明化合物可延長(zhǎng)某些生物體的存活時(shí)間，該生物體例如患有IP-L1210、MC211、SC-L1210、IP-LsG和ATE腫瘤的小鼠，還有或多或少患有IP-B16和IP-LsG的小鼠。由于上面所用的試驗(yàn)體系是致死性的，因此可通過(guò)比較治療組動(dòng)物(存活延長(zhǎng))與未治療的對(duì)照組動(dòng)物的存活時(shí)間來(lái)證明本發(fā)明化合物的抗腫瘤效果。在典型的實(shí)驗(yàn)(見(jiàn)實(shí)施例)中，實(shí)驗(yàn)組通常由十只動(dòng)物組成，治療組較對(duì)照組即未治療組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上存活顯著延長(zhǎng)。
為了利用它們的抗腫瘤作用，可以將所公開(kāi)的化合物以合適的應(yīng)用劑型和給藥的常規(guī)方式恰當(dāng)給生物體即哺乳動(dòng)物使用?？梢詥为?dú)使用，或者，優(yōu)選地作為活性物質(zhì)與適合且無(wú)毒的藥學(xué)載體一同使用，即溶解在例如水中的緩沖液、生理鹽水，溶解在甲基纖維素、聚乙二醇、聚丙二醇等的溶液中。口服給藥是最優(yōu)選的一種。根據(jù)將要治療的腫瘤類型、被治療的生物體的類型、其體重和/或體表面積、腫瘤的定位、其形態(tài)學(xué)的類型、服用方式等來(lái)確定最適宜劑量。從所做的生物試驗(yàn)顯然可以看出對(duì)于IP-L1210，口服LA-12的有效單一劑量?jī)H為10mg/kg(30mg/m2)，而LA-2(見(jiàn)下文)在此劑量時(shí)沒(méi)有作用。間歇性服用(第1、4、9天)典型劑量的LA-12時(shí)，對(duì)于患有白血病L1210的DBA2小鼠，最適宜劑量是22.9mg/kg口服×3(68.7mg/m2×3)，連續(xù)給藥(第1-9天)時(shí)對(duì)于同樣小鼠的最適宜劑量為9.6mg/kg口服×9(28.8mg/m2×9)。
本發(fā)明化合物的毒性低；在NMRI小鼠上的LD50大于600mg/kg(口服)。
顯然，可以預(yù)計(jì)對(duì)哺乳動(dòng)物有機(jī)體絕對(duì)無(wú)毒的劑量具有明顯的治療效果。根據(jù)已進(jìn)行的生物試驗(yàn)，可以預(yù)計(jì)人的可耐受量和有效的單一口服劑量為30mg/m2。
在下列試驗(yàn)中，將證明本發(fā)明化合物的抗腫瘤作用，下列現(xiàn)有技術(shù)的化合物用作參照以下稱作化合物L(fēng)A-2的雙(醋酸鹽)-b-氨合-cd-二氯-e-(環(huán)己基胺)鉑(Ⅳ)配合物(JM216,Johnson Matthey技術(shù)中心，Reafing,Berkshire,Great Britain,Kelland等，1993)，和作為醫(yī)藥制劑platidiam10的活性物質(zhì)的順-二氨合二氯鉑(Ⅱ)配合物。
實(shí)施例4舉例證明小鼠口服單獨(dú)af-雙(乙酸離子)-b-(1-金剛胺)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=1-金剛胺，“LA-12”)后的抗腫瘤活性、并與af-雙(乙酸離子)-b-氨合-cd-二氯-e-(環(huán)己基胺)鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=環(huán)己基胺，代碼JM216-Johnson Matthey技術(shù)中心，“LA-2”)和順-二氨合二氯鉑(Ⅱ)配合物(NSC119875,sicc.注射制劑PLATIDIAM10的活性物質(zhì))比較將150只重約18g的DBA2品系雌性大鼠分成14組一個(gè)參照組(21只動(dòng)物)和13個(gè)實(shí)驗(yàn)組(9-10只動(dòng)物)。用致死劑量的L1210白血病的腹水液體對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行腹膜內(nèi)接種。應(yīng)用前立即用特別制備的化合物L(fēng)A-12和LA-2的水懸浮液處理十組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。該懸浮液含劑量分別為160、80、40、20和10mg/kg、相應(yīng)體積0.2-0.4ml的化合物接種腫瘤后一天獲得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。對(duì)三組動(dòng)物皮下給予PLATIDIAM，其形式為通過(guò)以凍干粉末溶解在水中而制備的等滲水溶液，立即注射。監(jiān)測(cè)動(dòng)物以確定它們的存活時(shí)間。與參照組比較，評(píng)價(jià)根據(jù)所采用的劑量而測(cè)出的存活時(shí)間值。在假定暫定值的對(duì)數(shù)/正常特征的分布的條件下和在假定可能未知的其他條件下(Roth等，1962)，通過(guò)兩種平均值的等價(jià)檢驗(yàn)(Student’s t-檢驗(yàn))評(píng)價(jià)作為生物應(yīng)答的單一估計(jì)時(shí)間點(diǎn)。由存活時(shí)間的單一值計(jì)算幾何平均值。這些試驗(yàn)的平均值鑒定了其超出了臨界值的5％顯著水平的差值在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是明顯的。
已觀察到，與未治療的對(duì)照組相比，用LA-12治療的動(dòng)物口服10mg/kg劑量組存活時(shí)間的平均值較高，統(tǒng)計(jì)學(xué)上是明顯的(t檢驗(yàn)，p≤0.05)，即高出55％。皮下給藥劑量為5mg/kg的Platidiam，較對(duì)照組增加了32％的存活時(shí)間平均值，但是與對(duì)照組相比這些值的差別在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不明顯。LA-2沒(méi)有作用。
結(jié)果如下表所總結(jié)表1與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2和LA-12對(duì)患有白血病L1210動(dòng)物的抗腫瘤作用重16.6-19.1g的雌性DBA2小鼠。通過(guò)腹膜內(nèi)移植106腫瘤細(xì)胞的接種物。移植后第一天開(kāi)始治療(1×口服，platidiam 1×皮下，第一天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了存活時(shí)間的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-祝1/20.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均存活時(shí)間的相關(guān)值?；衔?劑量 N 幾何平均數(shù) 置信區(qū)間 存活注(mg/kg)(j) (天)(天)(對(duì)照組的％)對(duì)照021 12.7(10.0；16.1)100Platidiam10106.1 (5.5；6.8) 485 1016.7(9.4；29.6)＞132 2)2.5 1014.2(8.6；23.3)112LA-2 160 108.0 (5.2；12.2)63801010.7(6.6；17.4)85401010.3(6.3；16.7)81201011.9(6.9；20.4)94101012.5(7.2；21.7)99LA-12160 109.3 (5.8；14.9)7380109.5 (5.8；15.6)75401012.3(7.8；19.4)97201013.3(8.2；21.6)105101019.6(14.6；26.3) 155 1)n=一組中的動(dòng)物數(shù)1)與對(duì)照組相比的平均值的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，顯著性水平α=0.052)一只存活動(dòng)物第94天處死未發(fā)現(xiàn)腫瘤實(shí)施例5舉例證明af-雙(乙酸離子)-b-(1-金剛胺)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ)，A=1-金剛胺，“LA-12”)間歇性口服給藥后對(duì)小鼠的抗腫瘤活性、并與af-雙(乙酸離子)-b-氨合-cd-二氯-e-(環(huán)己基胺)鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ)，A=環(huán)己基胺，代碼JM216“LA-2”-Kelland等，1993)和順-二氨合二氯鉑(Ⅱ)配合物(NSC 119875,sicc.注射制劑PLATIDIAM10的活性物質(zhì))比較在患有白血病L1210的動(dòng)物的類似實(shí)驗(yàn)中，重復(fù)給予化合物(Ⅰ)(A=1-金剛胺，LA-12)三天，每天一次，即按同樣的方案接種口服LA-2和皮下Platidiam后第1、4和9天。
已觀察到，與未治療的對(duì)照組相比，用LA-12治療的動(dòng)物中口服4mg/kg/天×3的劑量組的存活時(shí)間平均值在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著提高(t檢驗(yàn)，p=0.05)。LA-2化合物只有在兩倍劑量時(shí)才有同樣的效果(148％)，即口服8mg/kg/天×3。根據(jù)Carter計(jì)算的LA-12的最適宜劑量?jī)H為口服4.55mg/kg/天×3，而LA-2的劑量為口服10.96mg/kg/天×3，即多于兩倍。因此本發(fā)明的特征化合物在其最適宜的治療方案中，具有上述專利中的代表性化合物兩倍以上的效果。
結(jié)果如下表所總結(jié)表2與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2和LA-12對(duì)患有白血病L1210動(dòng)物的抗腫瘤作用重19.8-21.2g的雌性DBA2小鼠。通過(guò)腹膜內(nèi)移植106腫瘤細(xì)胞的接種物。移植后第一天開(kāi)始治療(3×口服，platidiam3×皮下，第1、5和9天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了存活時(shí)間的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α=0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均存活時(shí)間的相關(guān)值。化合物 劑量 N幾何平均數(shù)置信區(qū)間 存活 注(mg/kg/天) (j) (天) (天) (對(duì)照組的％)對(duì)照 0 10 15.7 (11.6；21.1) 100Platidiam 1010 16.6 (14.8；18.6) 1065 10 26.3 (24.5；28.2) 168 2)2.5 10 28.0 (22.0；35.6) 178 2)LA-2 8 10 23.2 (16.8；32.0) ＞1481),4)4 10 18.5 (14.7；23.2) 1182 10 20.2 (12.4；32.8) ＞129 4)LA-12 8 10 18.5 (13.5；25.3) 1184 10 13.0 (19.8；26.5) 147 1)2 10 19.0 (12.7；28.4) ＞121 4)n=一組中的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組相比的平均值的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，顯著性水平α=1)0.05,2)0.01,3)0.0014)一只第50天存活的動(dòng)物實(shí)施例6舉例證明af-雙(乙酸離子)-b-(1-金剛胺)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=1-金剛胺，“LA-12”)連續(xù)和間歇性口服給藥后對(duì)患有白血病L1210小鼠的抗腫瘤活性、并與af-雙(乙酸離子)-b-氨合-cd-二氯-e-(環(huán)己基胺)鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=環(huán)己基胺，代碼JM216“LA-2”-Kelland等，1993)和順-二氨合二氯鉑(Ⅱ)配合物(NSC 119875,sicc.注射制劑PLATIDIAM 10的活性物質(zhì))比較在患有白血病L1210的動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行與實(shí)施例4和5相似的安排，給予化合物(I)(A=1-金剛胺，LA-12)九天，每天一次，重復(fù)兩次，即接種后第1-9天，或者在第1、4和9天一起用LA-2間歇性口服，這樣使得兩種方案中的累積劑量相等。Platidiam為皮下給藥。
與未治療的對(duì)照組相比，口服6mg/kg/天×9的劑量時(shí)，化合物L(fēng)A-12在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著增加了存活時(shí)間值，即增加了130％，據(jù)估計(jì)其抗腫瘤活性與皮下給予劑量為8和4mg/kg×1的Platidiam時(shí)相似。與對(duì)照組相比，任何劑量組的LA-2化合物沒(méi)有在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著增加存活時(shí)間，因此認(rèn)為無(wú)抗腫瘤活性。
在間歇性方案中(接種后第1、5和9天)通過(guò)點(diǎn)估計(jì)的方法沒(méi)有證實(shí)其效果。
對(duì)LA-2的劑量/效果依賴性的評(píng)價(jià)，表明在同樣的累積劑量時(shí)連續(xù)的治療方案更有優(yōu)點(diǎn)。
結(jié)果如下表所總結(jié)表3與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2和LA-12對(duì)患有白血病L1210動(dòng)物的抗腫瘤作用比較連續(xù)治療方案和間歇性治療方案重19.3-21.4g的雌性DBA2小鼠。通過(guò)腹膜內(nèi)接種106腫瘤細(xì)胞的接種物。接種后第一天開(kāi)始治療(分別9×口服第1-9天和3×第1、5和9天，Platidiam 1×皮下第1天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了存活時(shí)間的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α=0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均存活時(shí)間的相關(guān)值?；衔? 劑量 N幾何平 置信區(qū)間 存活 注(mg/kg/天) (j) 均數(shù)(天) (天)(對(duì)照組的％)對(duì)照 0 12 11.6 (7.7；17.4)100Platidiam8 10 23.7 (20.1；27.9) 204 2)4 10 20.2 (15.0；27.2) 174 1)2 10 17.9 (12.1；26.5) 155LA-2 8 10 11.5 (7.7；17.1)99 第1-9天4 10 20.0 (11.2；35.9) 1732 10 20.2 (10.1；34.7) 162LA-1212 10 13.6 (9.0；20.8)118第1-9天6 10 16.6 (12.7；55.8) 230 1)3 10 11.1 (6.5；19.0)96LA-2 36 10 15.1 (7.5；30.1)130第1、5、9天18 10 18.6 (10.8；32.0) 1609 10 11.4 (6.7；19.5)99LA-1236 10 15.9 (7.6；32.9)137第1、5、9天18 10 18.3 (12.7；55.8) 1589 10 13.3 (8.1；21.7)115n=一組中的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組相比的平均值的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，顯著性水平α=1)0.05,2)0.01,3)0.001實(shí)施例7舉例證明af-雙(乙酸離子)-b-(1-金剛胺)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=1-金剛胺，“ LA-12”)、LA-12的包合藥物形式和af-雙(乙酸離子)-b-(1-氨基-3,5-二甲基金剛烷)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=1-氨基-3,5-二甲基金剛烷，“LA-15”)連續(xù)性口服給藥后對(duì)患有白血病L1210小鼠的抗腫瘤活性，并與af-雙(乙酸離子)-b-氨合-cd-二氯-e-(環(huán)己基胺)鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ)，A=環(huán)己基胺，代碼JM216“LA-2”-Kelland等，1993)和順-二氨合二氯鉑(Ⅱ)配合物(NSC 119875,sicc.注射制劑PLATIDIAM10的活性物質(zhì))比較在患有白血病L1210的動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行與實(shí)施例4、5和6相似的安排，重復(fù)給予化合物L(fēng)A-12的新藥物形式和化合物L(fēng)A-15九天，每天一次，即接種后第1-9天，同時(shí)在同一方案中口服LA-2。Platidiam為皮下給藥。
與未治療的對(duì)照組相比，化合物L(fēng)A-12、其包合藥物形式和LA-15在其所使用的劑量時(shí)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上極顯著地增加了存活時(shí)間值，即增加了130％，據(jù)估計(jì)其抗腫瘤活性與皮下給予劑量為4mg/kg×1(123％)的Platidiam和口服給予劑量為3mg/kg×9(114％)的LA-2時(shí)相似。
結(jié)果如下表所總結(jié)表4與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2、LA-12 LA-12的新藥物形式和LA-15對(duì)患有白血病L1210動(dòng)物的抗腫瘤作用連續(xù)治療方案重18.0-19.7g的雌性DBA2小鼠。通過(guò)腹膜內(nèi)接種1、2、106腫瘤細(xì)胞的接種物。接種后第一天開(kāi)始治療(9×口服，第1-9天，Platidiam 1×皮下，第1天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了存活時(shí)間的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α=0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均存活時(shí)間的相關(guān)值。化合物 劑量 N幾何平均數(shù)置信區(qū)間存活(對(duì)照 注(mg/kg/天) (j) (天) (天) 組的％)對(duì)照 0 10 22.5 (19.6；25.9) 100Platidiam 4 10 50.2 (27.9；90.2) ＞2231)5/10 4)LA-212 10 24.4 (16.8；35.3)1086 10 30.8 (18.9；50.1)1371)3 10 48.1 (41.4；56.0)2143)LA-1212 10 47.2 (43.6；51.2)2103)6 10 38.8 (29.7；50.8)1722)3 10 44.6 (37.3；53.3)1983)LA-12，藥 12 10 51.1 (48.4；53.9)2273)物形式6 10 46.4 (39.1；55.1)206 3)3 10 40.0 (31.7；50.4)177 3)LA-15 12 10 29.3 (18.1；47.6)1306 10 48.8 (41.9；56.9)217 3)3 10 40.5 (30.0；54.8)180 2)n=一組中的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組相比的平均值的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，顯著性水平α=1)0.05,2)0.01,3)0.0014)LTS-長(zhǎng)期生存者(一組中長(zhǎng)期生存的動(dòng)物數(shù))實(shí)施例8舉例證明af-雙(乙酸離-)-b-(1-金剛胺)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=1-金剛胺，“LA-12”)單一口服給藥后對(duì)患有Gardner淋巴肉瘤小鼠的抗腫瘤活性、并與af-雙(乙酸離子)-b-氨合-cd-二氯-e-(環(huán)己基胺)鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=環(huán)己基胺，代碼JM216,“LA-2”-Kelland等，1993)和順-二氨合二氯鉑(Ⅱ)配合物(NSC 119875,sicc.注射制劑PLATIDIAM 10的活性物質(zhì))比較將200只重約25g的CH3品系雌性小鼠分成10組，即一個(gè)參照組和9個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組包括20只動(dòng)物。用致死劑量的Gardner淋巴肉瘤腫瘤勻漿對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行皮下移植。應(yīng)用前立即用特別制備的化合物L(fēng)A-12和LA-2的水懸浮液處理實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物。該懸浮液含劑量分別為32、8和2mg/kg、體積0.2-0.4ml的各自化合物以便接種腫瘤后第5天獲得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。立即皮下給予劑量為8、4和2mg/kg的PLATIDIAM。接種后第14天在麻醉狀態(tài)且從身體手術(shù)分離出腫瘤的情況下處死每一劑量組的半數(shù)動(dòng)物。稱重確定每一動(dòng)物的腫瘤質(zhì)量。留下另一半動(dòng)物以監(jiān)測(cè)存活時(shí)間。
觀察到，與對(duì)照組(100％)相比，用劑量為口服32mg/kg的LA-12治療的動(dòng)物的平均腫瘤質(zhì)量(77％)的降低在統(tǒng)計(jì)學(xué)很明顯(t檢驗(yàn)，p=0.05)。在現(xiàn)有技術(shù)的LA-2中未觀察到該作用。
結(jié)果如下表所總結(jié)表5與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2和LA-12對(duì)患有實(shí)體Gardner淋巴肉瘤動(dòng)物的抗腫瘤作用重20.7-28.3g的雌性CH3小鼠。通過(guò)皮下移植0.2腫瘤勻漿。移植后第5天開(kāi)始治療(1×口服，platidiam 1×皮下，第5天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了腫瘤質(zhì)量的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α=0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均腫瘤質(zhì)量的相關(guān)值?；衔? 劑量 n幾何平均數(shù)置信區(qū)間腫瘤質(zhì)量(對(duì)注(mg/kg/天) (j) (g) (g) 照組的％)對(duì)照 0 10 6.27 (5.13；7.35)100Platidiam8 10 1.64 (0.92；2.36)26 3)4 10 3.68 (3.06；4.30)59 3)2 10 5.19 (4.31；6.06)83LA-2 32 10 6.44 (5.61；7.28)1038 10 6.19 (5.52；6.87)992 10 5.61 (4.67；6.55)90LA-1232 10 4.80 (4.26；5.34)77 1)8 10 5.46 (4.43；6.49)882 10 5.02 (4.28；5.75)80n=一組中的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組相比的平均值的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，顯著性水平α=1)0.05,2)0.01,3)0.001實(shí)施例9舉例證明af-雙(乙酸離子)-b-(l-金剛胺)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ)A=l-金剛胺，“ LA-12”)重復(fù)連續(xù)口服給藥后對(duì)患有哺乳動(dòng)物腺癌MC2111小鼠的抗腫瘤活性、并與af-雙(乙酸離子)-b-氨合-cd-二氯-e-(環(huán)己基胺)鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=環(huán)己基胺，代碼JM216,“LA-2”-Kelland等，1993)和順-二氨合二氯鉑(Ⅱ)配合物(NSC119875,sicc.注射制劑PLATIDIAM10的活性物質(zhì))比較將130只重約20g的DBA1品系雌性小鼠分成12組，即一個(gè)參照組和11個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組包括10只動(dòng)物。用致死劑量的腫瘤勻漿對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行皮下接種。應(yīng)用前立即用特別制備的化合物L(fēng)A-2、LA-12和LA-15的水懸浮液處理實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物。該懸浮液含有劑量分別為12、6和3mg/kg/天口服×9、體積0.2-0.4ml的各個(gè)化合物以獲得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。接種后第5天立即皮下給予劑量為8和4mg/kg、體積為0.2-0.4ml的PLATIDIAM。
接種后第14天對(duì)對(duì)照組動(dòng)物和每個(gè)劑量組動(dòng)物進(jìn)行稱重并測(cè)量腫瘤大小。在麻醉狀態(tài)且從身體手術(shù)分離出腫瘤的情況下處死對(duì)照組的半數(shù)動(dòng)物。通過(guò)回歸分析評(píng)價(jià)由其大小決定的腫瘤質(zhì)量。由這種回歸函數(shù)確定每只動(dòng)物的腫瘤質(zhì)量。在假定質(zhì)量值的正常分布特征的條件下和在假定可能未知的彌散條件下，通過(guò)兩種平均值的等價(jià)檢驗(yàn)(Student’s t-檢驗(yàn))在點(diǎn)估計(jì)的情況下評(píng)價(jià)腫瘤質(zhì)量。由腫瘤質(zhì)量的單一值計(jì)算幾何平均值。評(píng)價(jià)超出了臨界值的5％顯著水平的這些試驗(yàn)檢驗(yàn)的平均值的差值在統(tǒng)計(jì)上較明顯。
與未治療組比較，評(píng)價(jià)了根據(jù)所采用的劑量而決定的存活時(shí)間。與此類似評(píng)價(jià)白血病和腹水瘤時(shí)的存活時(shí)間，即在假定暫定值的對(duì)數(shù)/正常特征的分布的條件下和在假定可能未知的彌散條件下(Roth Z,Josifko M.,MalyV.,Trcka V.:Statisticke metody v experimentalni medicine,SZN Prague1962,p.278)、通過(guò)兩種平均值的等價(jià)檢驗(yàn)(Student’s t-檢驗(yàn))的估計(jì)時(shí)間點(diǎn)。由存活時(shí)間的單一值計(jì)算幾何平均值。對(duì)于這些試驗(yàn)檢驗(yàn)的平均值，評(píng)價(jià)其超出了臨界值的5％顯著性水平的差值在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是明顯的。
觀察到，用劑量為3mg/kg/天×9的LA-12治療的動(dòng)物的腫瘤平均質(zhì)量在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著降低(t檢驗(yàn)，p≤0.05)。而且，與未治療的對(duì)照組相比(100％)，存活時(shí)間的平均值升高(128％)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是顯著的(t檢驗(yàn)，p=0.05)。與對(duì)照組相比，其它被試驗(yàn)物質(zhì)(除了Platidiam)在存活時(shí)間的點(diǎn)估計(jì)方面沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。
評(píng)價(jià)化合物L(fēng)A-2以及Platidiam具有抗腫瘤作用。在現(xiàn)有技術(shù)的LA-2中未觀察到該作用。
結(jié)果如下表所總結(jié)表6-1與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2、LA-12和LA-15對(duì)患有實(shí)體的哺乳動(dòng)物腺癌MC2111動(dòng)物的抗腫瘤作用連續(xù)治療方案重20.4-21.8g的雌性DBA1小鼠。通過(guò)皮下接種0.2ml 1∶1稀釋的腫瘤勻漿。接種后第5天開(kāi)始治療(9×口服，第5-13天，platidiam 1×皮下，第5天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了存活時(shí)間的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α=0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均存活時(shí)間的相關(guān)值?；衔? 劑量 n 幾何平均數(shù)置信區(qū)間存活(對(duì)照注(mg/kg/天) (j) (天) (天) 組的％) LTS對(duì)照 01021.6 (19.4；24.2)100Platidiam81035.1 (25.3；48.7) ＞1622) 1/1041034.3 (23.0；51.3) ＞1581) 1/10LA-2 12 1021.7 (17.9；26.3)10061024.9 (19.8；32.9)11531024.5 (21.0；28.5)113LA-1212 1025.1 (21.9；28.8)11661025.3 (20.0；32.0)11731027.7 (24.8；30.9)1282)LA-1512 9 25.5 (20.7；31.4)11861027.6 (21.8；35.0)12731025.4 (21.8；29.7)117n=一組中的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組相比的平均值的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，顯著性水平α=1)0.05,2)0.01LTS-長(zhǎng)期存活者，第120天被處死的動(dòng)物數(shù)表6-2與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2、LA-12和LA-15對(duì)患有實(shí)體的哺乳動(dòng)物腺癌MC2111動(dòng)物的抗腫瘤作用連續(xù)治療方案重20.4-21.8g的雌性DBA1小鼠。通過(guò)皮下接種0.2ml 1∶1稀釋的腫瘤勻漿。接種后第5天開(kāi)始治療(9×口服，第5-13天，platidiam 1×皮下，第5天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了腫瘤質(zhì)量的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α=0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均腫瘤質(zhì)量的相關(guān)值?；衔? 劑量 n幾何平均數(shù)置信區(qū)間腫瘤質(zhì)量(對(duì)注(mg/kg/天) (j) (g) (g) 照組的％)對(duì)照 0 10 4.65(4.34；4.96)100Platidiam8 10 3.20(2.90；3.49) 3)4 10 3.53(3.01；4.05)76 2)LA-2 12 10 3.59(2.94；4.24)77 2)6 10 3.86(3.11；4.61)83 2)3 10 4.00(3.68；4.32)86 2)LA-1212 10 4.05(3.82；4.28)87 2)6 10 3.73(3.25；4.21)80 2)3 10 4.02(3.63；4.41)86 1)LA-1512 9 3.74(3.28；4.21)80 2)6 10 3.95(3.50；4.40)85 1)3 10 4.19(3.91；4.47)90 1)n=一組中的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組相比的平均值的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，顯著性水平α=1)0.05,2)0.01LTS-長(zhǎng)期存活者；第120天被處死的動(dòng)物數(shù)實(shí)施例10舉例證明af-雙(乙酸離子)-b-(1-金剛胺)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ)，A=1-金剛胺，“LA-12”)重復(fù)口服給藥后對(duì)患有Ehrlich腹水瘤小鼠的抗腫瘤活性、并與af-雙(乙酸離子)-b-氨和-cd-二氯-e-(環(huán)己基胺)鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ)，A=環(huán)己基胺，代碼JM216,“LA-2”-Kelland等，1993)和順-二氨合二氯鉑(Ⅱ)配合物(NSC 119875,sicc.注射制劑PLATIDIAM 10的活性物質(zhì))比較將200只重約24g的ICR品系雌性小鼠分成10組，即一個(gè)對(duì)照組和9個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組包括20只動(dòng)物。用致死劑量的ATE腹水液對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行腹膜內(nèi)接種。應(yīng)用前立即用特別制備的化合物L(fēng)A-12和LA-2的水懸浮液處理實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物。該懸浮液含劑量分別為12、6和3mg/kg/天口服×9、體積0.2-0.4ml的各自化合物以便接種腫瘤后第1天獲得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。接種后第10天在麻醉狀態(tài)和剖腹手術(shù)后消除腹水的情況下處死每一劑量組的半數(shù)動(dòng)物、并從消除腹水前后的質(zhì)量差異來(lái)確定每一動(dòng)物的腫瘤質(zhì)量。留下剩余動(dòng)物以監(jiān)測(cè)存活時(shí)間。
觀察到，與未治療的對(duì)照組相比，被治療的動(dòng)物的平均腫瘤質(zhì)量較低(表7-1)。但是，與未治療的對(duì)照組相比，僅在LA-12和Platidiam中的平均存活時(shí)間增加在統(tǒng)計(jì)學(xué)上極為顯著(p≤0.01)，但LA-2中未觀察到該作用(表7-2)。
表7-1與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2和LA-12對(duì)患有Ehrlich腹水瘤(ATE)動(dòng)物的抗腫瘤作用連續(xù)治療方案重23.7-25.4g的雌性ICR小鼠。通過(guò)腹膜內(nèi)接種0.2ml腹水瘤。接種后第1天開(kāi)始治療(9×口服，第1-9天，platidiam 1×皮下，第1天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了腫瘤質(zhì)量的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α=0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均腫瘤質(zhì)量的相關(guān)值。化合物 劑量 n幾何平均數(shù)置信區(qū)間腫瘤質(zhì)量(對(duì)注(mg/kg/天) (j) (g) (g) 照組的％)對(duì)照 08 2.65 (1.74；3.56)100Platidiam 810 2.16 (1.10；3.22)82410 2.68 (1.81；3.55)10127 3.06 (2.13；3.98)115LA-2 12 9 2.10 (1.37；2.83)7967 2.13 (1.20；3.05)8036 3.17 (2.35；3.99)119LA-12 12 8 2.23 (1.43；3.02)8469 2.66 (2.00；3.31)10039 2.76 (1.86；3.65)104
n=一組中的動(dòng)物數(shù)， 第10天處死表7-2與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2和LA-12對(duì)患有Ehrlich腹水瘤(ATE)動(dòng)物的抗腫瘤作用連續(xù)治療方案重23.7-25.4g的雌性ICR小鼠。通過(guò)腹膜內(nèi)接種0.2ml腹水瘤。接種后第1天開(kāi)始治療(9×口服，第1-9天，platidiam 1×皮下，第1天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了存活時(shí)間的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α=0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均存活時(shí)間的相關(guān)值?；衔? 劑量 n 幾何平均數(shù) 置信區(qū)間存活(對(duì)照 注(mg/kg/天) (j)(天) (天)組的％)對(duì)照 0 10 11.4(7.4；17.6) 100Platidiam 8 10 21.0(16.2；27.1) 1841)4 10 21.8(19.5；24.3) 1902)2 10 13.8(8.7；21.6) 120LA-2 12 10 12.6(8.4；18.9) 1106 10 17.9(12.1；26.4) 1563 10 18.4(11.5；29.6) 161LA-12 12 10 15.5(9.3；25.8) 1356 10 25.1(22.7；27.7) 2192)3 10 18.0(12.6；25.7) 157n=一組中的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組相比的平均值的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，顯著性水平α=1)0.05,2)0.01實(shí)施例11舉例證明af-雙(乙酸離子)-b-(1-金剛胺)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=1-金剛胺，“ LA-12”)、LA-12的包含藥物形式和af-雙(乙酸離子)-b-(1-氨基-3,5-二甲基金剛烷)-c-氨合-de-二氯鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ)，A=1-氨基-3,5-二甲基金剛烷，“LA-15”)連續(xù)和間歇性口服給藥后對(duì)患有ATE小鼠的抗腫瘤活性，并與af-雙(醋酸鹽)-b-氨合-cd-二氯-e-(環(huán)己基胺)鉑(Ⅳ)配合物(化合物(Ⅰ),A=環(huán)己基胺，代碼JM216“LA-2”-Kelland等，1993)和順-二氨合二氯鉑(Ⅱ)配合物(NSC 119875,sicc.注射制劑PLATIDIAM 10的活性物質(zhì))比較在患有ATE的動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行與實(shí)施例10相似的安排，重復(fù)給予化合物L(fēng)A-12、其包合藥物形式和化合物L(fēng)A-15九天，每天一次，即接種后第1-9天，同時(shí)在同一方案中口服LA-2。Platidiam為皮下給藥。
用藥結(jié)束后，接種后第10天在麻醉狀態(tài)和剖腹手術(shù)后消除腹水的情況下處死每一劑量組的半數(shù)動(dòng)物、并從消除腹水前后的質(zhì)量差異來(lái)確定每一動(dòng)物的腫瘤質(zhì)量。通過(guò)在75mm長(zhǎng)的肝素化毛細(xì)管中進(jìn)行微血球離心機(jī)離心確定單個(gè)動(dòng)物的腹水液中的腹水臨界質(zhì)量(ascitocrit)。我們已從腹水臨界質(zhì)量(ascitocrit)的百分比和腫瘤質(zhì)量確定了與腹水液中的細(xì)胞質(zhì)量相應(yīng)的“總腹水臨界質(zhì)量(ascitocrit)”值。留下剩余動(dòng)物以監(jiān)測(cè)存活時(shí)間。在這些動(dòng)物中，在每天的基礎(chǔ)上監(jiān)測(cè)存活時(shí)間。與參照組相比對(duì)根據(jù)所使用的劑量而定的存活時(shí)間值進(jìn)行評(píng)價(jià)。
通過(guò)兩種平均值的等價(jià)檢驗(yàn)(Student’s t-檢驗(yàn))評(píng)價(jià)作為生物反應(yīng)的每一估計(jì)時(shí)間點(diǎn)。由存活時(shí)間的每一值計(jì)算幾何平均值，由腫瘤質(zhì)量和總腹水臨界質(zhì)量(ascitocrit)的每一值計(jì)算算術(shù)平均值。在假定質(zhì)量值和總腹水臨界質(zhì)量(ascitocrit)的正?？赡苄苑植家约凹俣ㄖ档膶?duì)數(shù)/正常分布的條件下、所有假定可能未知的彌散條件下，通過(guò)兩種平均值的等價(jià)檢驗(yàn)(Student’s t-檢驗(yàn))評(píng)價(jià)平均值之間的差異。對(duì)于這些試驗(yàn)檢驗(yàn)(criterium)的平均值的差異，評(píng)價(jià)出其超出臨界值分別為5％和1％顯著水平的差值在統(tǒng)計(jì)學(xué)上較顯著和極顯著。
根據(jù)Cox平衡的危險(xiǎn)模型(Carter等1982)由存活時(shí)間值計(jì)算最適宜劑量。將Weinbull分布的參數(shù)和初始值的對(duì)數(shù)變化用于估計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的基本和改變的存活函數(shù)。
與對(duì)照組相比，LA-12的包合藥物形式在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著增加了存活時(shí)間、并且已證實(shí)與劑量為8和4mg/kg皮下×1的Platidiam具有相似的抗腫瘤效果。與對(duì)照組相比，化合物L(fēng)A-2、LA-12和LA-15的存活時(shí)間在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒(méi)有增加(表8.1)。
我們觀察到，與未治療組相比，治療組動(dòng)物的腫瘤質(zhì)量的平均值較低(表8.2)，但差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著。
僅僅在劑量為6mg/kg/天口服×9的化合物L(fēng)A-15中，腫瘤(總腹水臨界質(zhì)量(ascitocrit))的細(xì)胞級(jí)份的質(zhì)量平均值在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著降低(表8.3)，這是該化合物抗腫瘤作用的證據(jù)。
所得到的結(jié)果總結(jié)在下表中表8-1與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2、LA-12、LA-12的包合藥物形式和LA-15對(duì)患有Ehrlich腹水瘤(ATE)動(dòng)物的抗腫瘤作用連續(xù)治療方案重30.1-33.7g的雌性ICR小鼠。通過(guò)腹膜內(nèi)接種0.2ml腹水的5.106腫瘤細(xì)胞。接種后第1天開(kāi)始治療(9×口服，第1-9天，platidiam 1×皮下，第1天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了存活時(shí)間的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α=0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均存活時(shí)間的相關(guān)值?；衔? 劑量 n 幾何平均數(shù) 置信區(qū)間 存活時(shí)間(對(duì) 注(mg/kg/天) (j)(天) (天) 照組的％)對(duì)照 0 10 8.9 (6.6；12.0) 100Platidiam 8 10 18.5(13.6；25.1)208 3)4 10 17.5(15.0；20.5)197 3)2 10 11.4(7.9；16.3) 128LA-2 12 10 9.9 (6.4；15.4) 1116 10 13.2(8.7；20.0) 1483 10 10.1(6.2；16.3) 114LA-12 12 10 11.9(7.1；20.1) 1346 10 13.6(8.6；21.4) 1533 10 12.7(8.4；19.4) 143LA-12，藥 12 10 14.4(10.3；20.0)162 1)物形式6 10 16.3(12.3；21.5)183 1)3 10 12.2 (8.1；18.5)131LA-15 12 10 8.6 (5.7；12.9)976 10 9.6 (6.1；15.0)108 3)3 10 8.8 (5.8；13.4)99n=一組中的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組相比的平均值的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，顯著性水平α=1)0.05,2)0.01,3)0.001表8-2與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2、LA-12、LA-12的包合藥物形式和LA-15對(duì)患有Ehrlich腹水瘤(ATE)動(dòng)物的抗腫瘤作用連續(xù)治療方案重30.1-33.7g的雌性ICR小鼠。通過(guò)腹膜內(nèi)接種0.2ml腹水的5.106腫瘤細(xì)胞。接種后第1天開(kāi)始治療(9×口服，第1-9天，platidiam 1×皮下，第1天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了腫瘤質(zhì)量的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α=0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均腫瘤質(zhì)量的相關(guān)值?；衔? 劑量 n幾何平均數(shù)置信區(qū)間腫瘤質(zhì)量(對(duì) 注(mg/kg/天) (j) (g) (g) 照組的％)對(duì)照06 3.93 (1.54；6.32)100Platidiam 88 2.36 (1.08；3.64)6046 3.53 (1.93；3.31)9027 2.83 (1.14；4.52)72LA-2 128 2.74 (1.73；3.75)7065 2.32 (0.84；3.80)5937 3.53 (2.15；4.91)90LA-1212 5 1.86 (0.27；3.45)4766 3.07 (1.92；4.21)7835 4.32 (3.24；5.40)110LA-12，藥12 7 4.03(1.30；6.76) 102物形式67 4.13(2.21；6.05) 10537 3.93(2.24；5.62) 100LA-1512 3 3.77(1.53；6.01) 9666 2.08(1.00；3.16) 5337 3.51(2.12；4.91) 89n=一組中的動(dòng)物數(shù)，第10天解剖。
表8-3與注射PLATIDIAM相比化合物L(fēng)A-2、LA-12、LA-12的包合藥物形式和LA-15對(duì)患有Ehrlich腹水瘤(ATE)動(dòng)物的抗腫瘤作用連續(xù)治療方案重30.1-33.7g的雌性ICR小鼠。通過(guò)腹膜內(nèi)接種0.2ml腹水的5.106腫瘤細(xì)胞。接種后第1天開(kāi)始治療(9×口服，第1-9天，platidiam 1×皮下，第1天)。
針對(duì)各自的劑量，下表列出了腫瘤質(zhì)量的平均值、幾何平均數(shù)的置信區(qū)間P=1-α-0.95和表示為對(duì)照組的百分比的平均腫瘤質(zhì)量的相關(guān)值。化合物劑量 n 幾何平均數(shù) 置信區(qū)間腫瘤質(zhì)量注(mg/kg/天) (j)(g) (g)(對(duì)照組的％)對(duì)照 06 0.68(0.59；0.78)100Platidiam88 0.68(0.62；0.75)10046 0.80(0.54；1.00)11627 0.79(0.39；1.18)115LA-2 12 8 0.65(0.49；0.82)9565 0.69(0.34；1.03)10037 0.74(0.64；0.83)108LA-1212 5 0.44(0.19；0.69)6466 0.68(0.46；0.89)9935 0.68(0.31；1.06)100LA-12，藥 12 7 0.80(0.46；1.15)117物形式6 7 0.60(0.40；0.81)883 7 0.93(0.24；0.62)99LA-15 12 3 0.82(0.14；1.78)1206 6 0.40(0.19；0.61)593 7 0.84(0.71；0.97)1231)n=一組中的動(dòng)物數(shù)，第10天解剖。
與對(duì)照組相比的平均值的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，顯著性水平α=1)0.05,2)0.013)總腹水臨界質(zhì)量(ascitocrit)-腫瘤的細(xì)胞組分的質(zhì)量
權(quán)利要求
1．一種具有通式(Ⅰ)含氧化數(shù)Ⅳ的鉑配合物 其中X代表鹵原子，B代表相互獨(dú)立的鹵原子、羥基或含1-6個(gè)碳原子的羧酸鹽基團(tuán)，和A代表含10-14個(gè)碳原子的初級(jí)三環(huán)胺，在其三環(huán)核上可以被一個(gè)或兩個(gè)含1-4個(gè)碳原子的烷基取代或不取代，和一種含可被含1-6個(gè)碳原子的羥烷基取代或不取代的β或γ環(huán)糊精的上述鉑配合物的包合配合物。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的式(Ⅰ)配合物，其中A代表金剛氨基、X和B如權(quán)利要求1所定義。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的式(Ⅰ)配合物，其中A代表3,5-二甲基金剛氨基、X和B如權(quán)利要求1所定義。
4．一種制備權(quán)利要求1的式(Ⅰ)鉑配合物的方法，其特征在于，其中X和A如權(quán)利要求1所定義的式(Ⅱ)的二價(jià)鉑配合物 在形成鉑(Ⅳ)二羥配合物的情況下在鉑原子上用過(guò)氧化氫氧化，并且上述配合物的羥基可以通過(guò)酰化劑的作用被羧酸鹽基團(tuán)取代或不被取代。
5．一種制備含β或γ環(huán)糊精的式Ⅰ鉑配合物的包合配合物的方法，該環(huán)糊精可被含1-6個(gè)碳原子的羥烷基取代或不取代，此方法的特征在于，將有機(jī)溶劑中的式(Ⅰ)鉑配合物溶液與可被含1-6個(gè)碳原子的羥烷基取代或不取代的β或γ環(huán)糊精的水溶液混合，然后蒸發(fā)所得到溶液中的溶劑。
6．用作一種藥劑的如權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)鉑配合物或其含β或γ環(huán)糊精的包合配合物。
7．一種治療腫瘤疾病的藥物組合物，其特征在于它包含至少一種用作活性物質(zhì)的權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)鉑配合物或其含β或γ環(huán)糊精的包合配合物，和至少一種藥學(xué)賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種式(Ⅰ)鉑配合物,其中X代表鹵原子,B代表相互獨(dú)立的鹵原子、羥基或含l—6個(gè)碳原子的羧酸鹽基團(tuán),和A代表含10—14個(gè)碳原子的初級(jí)三環(huán)胺,在其三環(huán)核上可以被一個(gè)或兩個(gè)含l—4個(gè)碳原子的烷基取代或不取代;而且公開(kāi)了一種可被含l—6個(gè)碳原子的羥烷基取代或不取代的含β或γ環(huán)糊精的上述鉑配合物的包合配合物。本發(fā)明還公開(kāi)了一種制備式(Ⅰ)鉑配合物的方法,即用過(guò)氧化氫氧化式(Ⅱ)的二價(jià)鉑配合物并且所得產(chǎn)物的羥基通過(guò)?；瘎┑淖饔帽霍人猁}基團(tuán)取代或不被取代。這些公開(kāi)的配合物也可用作治療腫瘤疾病的藥物組合物或這種藥物組合物的一部分。
文檔編號(hào)C08B37/16GK1303388SQ99806649
公開(kāi)日2001年7月11日 申請(qǐng)日期1999年5月24日 優(yōu)先權(quán)日1998年5月27日
發(fā)明者弗蘭特塞克·扎克, 阿道夫·米斯特爾, 安娜·波洛瓦, 米蘭·梅爾卡, 雅羅斯拉夫·圖拉奈克, 達(dá)納·扎盧斯卡 申請(qǐng)人:普利瓦-拉徹馬公司