一種全人源her2抗體、其編碼基因及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗體技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種全人源HER2抗體、其編碼基因及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤。HER家族調(diào)節(jié)正常乳腺的生長(zhǎng)和發(fā)育，HER2 的過度表達(dá)與乳腺癌有關(guān)。曲妥珠單抗（Trastuzumab)，商品名赫賽?。ê召愅。?，是第一 個(gè)用于治療人表皮生長(zhǎng)因子受體2 (HER2)陽性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的人源化的單克隆抗體藥物。 雖然在HER2陽性的惡性腫瘤中，赫賽汀已成為標(biāo)準(zhǔn)的治療方案，但仍然有40%的患者對(duì)赫 賽汀沒有響應(yīng)。此外，在抗HER2的治療方法中，耐藥性已成為一個(gè)常見的嚴(yán)重問題。生長(zhǎng) 因子的冗余和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之間的串?dāng)_被認(rèn)為是在乳腺癌患者中促進(jìn)耐藥性的主 要原因。帕妥珠單抗（Pertuzumab)是美國(guó)Genentech公司與羅氏公司聯(lián)合開發(fā)近來研制 出的一種新的抗HER2人源化抗體，與赫賽汀不同，它所針對(duì)的抗原表位位于HER2受體的細(xì) 胞外II區(qū)，但臨床實(shí)驗(yàn)研宄結(jié)果表明單獨(dú)使用帕妥珠僅產(chǎn)生較弱的抗腫瘤治療作用。雖然 治療HER2陽性的轉(zhuǎn)移性乳腺癌，盡管有多種方案可供選擇，但是仍然沒有滿足需求。治療 這種疾病的優(yōu)化方案持續(xù)出現(xiàn)，但大多數(shù)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者出現(xiàn)了復(fù)發(fā)的情況。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明提供了一種全人源的HER2抗體，其中重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO: 1，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO: 2。
[0004] 本發(fā)明還提供了一種全人源的HER2抗體，其中重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO: 10,輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO: 11。
[0005] 本發(fā)明的全人源HER2抗體，其是Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv或scFv的形式。所述 Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv或scFv具有本領(lǐng)域所慣常理解的含義。
[0006] 本發(fā)明的上述兩種全人源HER2抗體，還可以包括人IgG的重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定 區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述人IgG為IgGl。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述人IgG 重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID N0:5,所述人IgG輕鏈恒定區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID N0:6〇
[0007] 本發(fā)明提供了編碼本發(fā)明全人源HER2抗體的核苷酸序列。
[0008] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，編碼氨基酸序列為SEQ ID NO: 1的重鏈可變區(qū)的核苷 酸序列為SEQ ID NO: 3,編碼氨基酸序列為SEQ ID NO: 2的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列為SEQ ID N0:4〇
[0009] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，編碼氨基酸序列為SEQ ID NO: 10的重鏈可變區(qū)的核苷 酸序列為SEQ ID NO: 12,編碼氨基酸序列為SEQ ID NO: 11的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列為 SEQ ID NO:13〇
[0010] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，當(dāng)本發(fā)明的兩種全人源HER2抗體為全長(zhǎng)抗體時(shí)，在本 發(fā)明的核苷酸序列中，編碼重鏈恒定區(qū)的核苷酸序列為SEQ ID N0:7,編碼輕鏈恒定區(qū)的核 苷酸序列為SEQ ID NO:8。
[0011] 本發(fā)明提供了一種表達(dá)載體，其中本發(fā)明的核苷酸序列與表達(dá)載體的表達(dá)控制序 列可操作地連接。在具體的實(shí)施方案中，所述表達(dá)載體是pGEM-Τ載體或293載體。
[0012] 本發(fā)明提供了一種細(xì)胞，其包含本發(fā)明的表達(dá)載體。所述細(xì)胞可以是原核或真核 的。在具體的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞可以哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如FreeStyle 293F細(xì)胞。
[0013] 本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的全人源HER2抗體和可藥用載體。
[0014] 本發(fā)明提供了一種聯(lián)合藥物，其包含本發(fā)明的全人源HER2抗體和其他HER2陽性 腫瘤治療劑，所述HER2陽性腫瘤治療劑為赫賽汀和/或帕妥珠。其中，所述聯(lián)合藥物可以 以如下的量施用于受試者：〇. 001_500mg/kg全人源HER2抗體+0. 001-500mg/kg赫賽汀和 /或帕妥珠；〇. 001-300mg/kg全人源HER2抗體+0. 001-300mg/kg赫賽汀和/或帕妥珠； 0· 001-200mg/kg 全人源 HER2 抗體 +0· 001-200mg/kg 赫賽汀和 / 或帕妥珠；0· 01-200mg/kg 全人源HER2抗體+0. 01-200mg/kg赫賽汀和/或帕妥珠；0. 01-100mg/kg全人源HER2抗 體+0· 01-100mg/kg赫賽汀和/或帕妥珠；0· l-90mg/kg全人源HER2抗體+0· l-90mg/kg赫 賽汀和/或帕妥珠；〇. l_70mg/kg全人源HER2抗體+0. l-70mg/kg赫賽汀和/或帕妥珠； 0· l-60mg/kg全人源HER2抗體+0· l-60mg/kg赫賽汀和/或帕妥珠；0· l-50mg/kg全人源 HER2抗體+0· l_50mg/kg赫賽汀和/或帕妥珠；0· l_40mg/kg全人源HER2抗體+0· l_40mg/ kg赫賽汀和/或帕妥珠；l_40mg/kg全人源HER2抗體+l-40mg/kg赫賽汀和/或帕妥珠。 本發(fā)明的全人源HER2抗體與所述其他HER2陽性腫瘤治療劑可以分開或同時(shí)給予受試者。 給藥途徑可以為本領(lǐng)域常用的抗體給藥途徑。
[0015] 本發(fā)明提供了一種試劑盒，其包含本發(fā)明的全人源HER2抗體。所述試劑盒可用于 檢測(cè)樣品中的HER2蛋白。所述試劑盒還可包含本領(lǐng)域檢測(cè)HER2試劑盒中的其他常用組分。
[0016] 本發(fā)明提供了本發(fā)明的全人源HER2抗體用于制備用于治療受試者中的HER2陽性 腫瘤的藥物的用途。
[0017] 所述"HER2陽性腫瘤"是指如果IHC〔免疫組化法〕檢查結(jié)果為3個(gè)加號(hào)（+++)， 即，大于30%的腫瘤細(xì)胞的胞膜呈現(xiàn)完整的強(qiáng)著色，就表明為HER2陽性；如果是2個(gè)加號(hào) (++)，即，至少10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中度完整的胞膜染色，那么進(jìn)一步做FISH〔熒光原 位雜交法〕或CISH〔顯色原位雜交法〕檢查，倘若結(jié)果為陽性〔發(fā)生基因擴(kuò)增〕，就可以確診 為HER2陽性。優(yōu)選地，HER2陽性腫瘤檢測(cè)結(jié)果是使用我國(guó)食品藥品監(jiān)督管理總局認(rèn)證的 檢測(cè)試劑盒（IHC，F(xiàn)ISH和CISH檢測(cè)試劑盒）獲得的結(jié)果。執(zhí)業(yè)醫(yī)師熟知如何判定腫瘤是 否為HER2陽性腫瘤。
[0018] 所述HER2陽性的腫瘤可以選自HER2陽性的乳腺癌、胃癌、肺癌、非小細(xì)胞肺癌、 骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、皮膚或眼內(nèi)黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區(qū)癌、 結(jié)腸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、食道癌、小腸 癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌、甲狀腺癌、甲狀芳腺癌、腎上腺癌、軟組織癌、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、 膀胱癌、腎或尿道癌、腎細(xì)胞癌、腎盂癌、間皮瘤、肝細(xì)胞癌、膽囊癌、慢性或急性白血病、淋 巴細(xì)胞淋巴瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS)癌、脊柱腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤 (glioblastoma multiforme)、星形細(xì)胞瘤、神經(jīng)鞘瘤、室管膜瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦膜瘤、 鱗狀細(xì)胞瘤和垂體腺瘤。
[0019] 優(yōu)選地，所述受試者是人。
【附圖說明】
[0020] 圖IA顯示了重組全長(zhǎng)抗人HER2抗體GB235-019和GB235-042重鏈表達(dá)載體 (293-VH-CH)的結(jié)構(gòu)示意圖；圖IB顯示了重組全長(zhǎng)抗人HER2抗體GB235-019和GB235-042 輕鏈表達(dá)載體（293-VL-CL)的結(jié)構(gòu)示意圖。以PCR方法，利用相應(yīng)模板和引物（詳見實(shí)施 例5)分別獲得含5'端EcoRI酶切位點(diǎn)的信號(hào)肽、重鏈可變區(qū)（VH)、含TGA終止密碼子和 3'端BamH I酶切位點(diǎn)的重鏈恒定區(qū)（CH)基因片段，并以over-lapping PCR方法將三段聯(lián) 接，獲得GB235-019和GB235-042抗體的重鏈全長(zhǎng)基因片段。以相同方法獲得GB235-019和 GB235-042抗體含信號(hào)肽、輕鏈可變區(qū)（VL)和輕鏈恒定區(qū)（CL)的輕鏈全長(zhǎng)基因片段。利用 EcoR I和BamH I酶切形成的粘性末端分別將重鏈和輕鏈全長(zhǎng)基因片段克隆至pGEM-T載 體。
[0021] 圖2A和圖2B顯示了重組全長(zhǎng)抗人HER2抗體GB235-019和GB235-042的SDS-PAGE 電泳結(jié)果圖。將純化得到的GB235-019和GB235-042抗體和赫賽汀對(duì)照樣品在50mM二硫 蘇糖醇還原條件下經(jīng)10%聚丙烯酰氨凝膠電泳解析，結(jié)果顯示68235-019和68235-042抗 體和赫賽汀均呈現(xiàn)分子量為50KDa和25KDa的兩條帶，分別為抗體的重鏈和輕鏈。