短小芽孢桿菌和蛭弧菌的粉狀制劑及其應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及飼料添加劑技術領域，具體地說，是短小芽孢桿菌和蛭弧菌的粉狀制 劑及其應用。
【背景技術】
[0002] 弧菌屬于弧菌科弧菌屬，是一類革蘭氏陰性、具極生鞭毛、能運動、無芽孢的短桿 狀細菌，其中有的弧菌有一定的彎曲，欠柔軟，有的彎曲不明顯?；【呛Ｑ蠹毦膬?yōu)勢類 群之一，廣泛分布于世界各地各類河口、內(nèi)灣、沿岸、水體養(yǎng)殖區(qū)和外海的水體及沉積物中， 各種海洋生物體表或體內(nèi)也常生存著高密度海洋弧菌，在海洋環(huán)境中占據(jù)著重要的生態(tài)地 位，具有多種多樣的生理、生態(tài)功能，在海洋微食物環(huán)中扮演重要角色，對海洋的營養(yǎng)物的 循環(huán)起著非常重要的作用。但同時，弧菌又是水生動物中的一類重要的病原菌。
[0003] 隨著高密度海水養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，對養(yǎng)殖環(huán)境的污染日益加劇。水產(chǎn)品的病害已 成為海水養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要問題?；【∈怯苫【鷮偌毦鸬囊活惣毦约膊。摬≡?全球范圍內(nèi)廣泛發(fā)生，其爆發(fā)性流行不僅給海水養(yǎng)殖魚類、貝類及甲殼類等經(jīng)濟動物的養(yǎng) 殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，還導致野生的海水魚類、貝類及甲殼類的大量死亡。弧菌病是最 嚴重的疾病之一，其死亡率甚至高達100%。
[0004] 為了控制病害，通常過度使用抗生素類藥物，這不僅造成養(yǎng)殖產(chǎn)品的藥物殘留，而 且還提高了病原細菌的耐藥性，引起抗性基因的轉(zhuǎn)移，導致生態(tài)失調(diào)。2005年，歐盟已禁止 在動物養(yǎng)殖中使用一切非治療性抗生素。因此，尋找抗生素的替代藥物、探索新的防治方式 已經(jīng)迫在眉睫。
[0005] 中國專利文獻CN101781627A公開了一種海水蛭弧菌微生態(tài)制劑的制備與應用， 涉及一種海水微生態(tài)制劑，需要提供適合于海水養(yǎng)殖用的蛭弧菌制劑的制備方法。該發(fā) 明由以下步驟組成：制備宿主菌懸液；蛭弧菌的分離、純化；蛭弧菌增殖培養(yǎng)，其特征是將 施氏假單胞菌接斜面活化后，在試管中加入生理鹽水制得菌懸液，然后用營養(yǎng)肉湯增殖培 養(yǎng)，在所得菌液中加入絮凝劑，搖勻后靜置沉淀，加入生理鹽水得到10 12cfu/mL的宿主菌 懸液；用雙層瓊脂平板法對采集的海水和底泥樣品進行蛭弧菌的分離和純化，將含有宿主 菌懸液和采集樣品的培養(yǎng)基混勻后倒入下層海水瓊脂上培養(yǎng)，將宿主菌和分離得到的蛭 弧菌加入到滅菌天然海水中培養(yǎng)至輕弧菌濃度為1〇 8?10 9pfu/mL，備用。中國專利文獻 CN102217655A公開了一種粉狀噬菌蛭弧菌制劑及其制備方法，以沸石粉作為賦形載體，利 用噴霧干燥技術制備粉狀噬菌蛭弧菌制劑。中國專利文獻CN102726634A公開了一種海參 用微生態(tài)飼料及其制備方法，飼料包括噬菌蛭弧菌、枯草芽孢桿菌和輔料；所述噬菌蛭弧 菌在微生態(tài)飼料中的濃度為1〇 6_1〇1(1個/g，所述枯草芽孢桿菌在微生態(tài)飼料中的濃度為 106-101(|個/g，所述輔料包括氮源、碳源和磷酸鹽。中國專利文獻CN103719535A公開了一種 噬菌蛭弧菌微膠囊，所述微膠囊的壁為明膠，顆粒呈球形，表面有凹陷，但沒有孔和裂紋，所 述顆粒粒徑大小為3?12ym，分布基本均勻，且其中，噬菌蛭弧菌的含量為3. 69X107pfu/ g?3. 70X107pfu/g，大腸桿菌DH5a的含量為 8. 6X109pfu/g?2. 10X101Qpfu/g。該微 膠囊的制備方法，其包括步驟：1)大腸桿菌DH5a菌懸液的制備；2)噬菌蛭弧菌培養(yǎng)液的 制備；和3)將步驟1)的大腸桿菌DH5a菌懸液和步驟2)的噬菌蛭弧菌培養(yǎng)液與無菌明膠 溶液均勻混合后，進行噴霧干燥，最終制備成微膠囊。
[0006] 中國專利文獻CN103525723A公開了一種具有群體感應系統(tǒng)抑制作用的短小芽孢 桿菌，其保藏編號為CCTCCM2013240。該發(fā)明還提供這種短小芽孢桿菌的應用以及以這種 短小芽孢桿菌或其發(fā)酵液為活性成分的微生物制劑。該發(fā)明以紫色桿菌為篩選模型，利用 "T"型劃線法和濾紙片法篩選出一株能夠抑制紫色桿菌紫色色素產(chǎn)生的菌株F3-1，試驗結 果表明菌株F3-1能夠抑制紫色桿菌的QS信號分子，具有抑制細菌群體感應的作用，可用于 制備防治水產(chǎn)細菌性病害的微生物制劑。
[0007] 但是關于本發(fā)明的可以清除弧菌引起的疾病的一種短小芽孢桿菌和蛭弧菌的粉 狀制劑及其應用目前還未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術中的不足，提供一種短小芽孢桿菌和蛭弧菌的粉狀 制劑。
[0009] 本發(fā)明的再一的目的是，提供一種短小芽孢桿菌和蛭弧菌的粉狀制劑的應用。
[0010] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案是：一種短小芽孢桿菌和蛭弧菌的粉狀 制劑，所述的粉狀制劑中包含保藏編號為CCTCCM2013240的短小芽孢桿菌和蛭弧菌。
[0011] 所述的蛭弧菌為噬菌蛭弧菌、斯托普蛭弧菌和斯塔爾蛭弧菌中的一種或多種。
[0012] 為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術方案是：所述的短小芽孢桿菌和蛭弧 菌的粉狀制劑在制備飼料添加劑中的應用。
[0013] 所述的飼料添加劑可以清除弧菌引起的疾病。
[0014] 所述的弧菌包括：霍亂弧菌、擬態(tài)弧菌、梅契尼科夫弧菌、霍利斯弧菌、海魚弧菌、 河流弧菌、弗尼斯弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、創(chuàng)傷弧菌、辛辛那提弧菌、鯊魚弧菌。
[0015] 所述的飼料添加劑為對蝦飼料添加劑。
[0016] 所述的短小芽孢桿菌和蛭弧菌的粉狀制劑在制備飼料中的應用。
[0017] 所述的飼料為對蝦飼料。
[0018] 本發(fā)明優(yōu)點在于：
[0019] 本發(fā)明制備的具有群體感應系統(tǒng)抑制作用的短小芽孢桿菌和蛭弧菌的粉狀制劑 可以廣譜、有效地清除弧菌引起的疾病，添加到對蝦飼料中不僅可以抑制對蝦腸道病原弧 菌的生長、減少對蝦弧菌病的發(fā)生，還能促進對蝦生長、降低養(yǎng)殖成本，值得在水產(chǎn)養(yǎng)殖中 廣泛應用。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合實施例對本發(fā)明提供的【具體實施方式】作詳細說明。
[0021] 具有群體感應系統(tǒng)抑制作用的短小芽孢桿菌，其釋放出來的蛋白酶可以淬滅群體 感應信號分子，進而使致病菌調(diào)控毒力因子表達的機能喪失或者減弱，那么致病菌就是一 頭沒有獠牙的狼，而宿主有足夠的時間把它圍困進而依靠自身免疫消除抗原。
[0022] 將具有群體感應系統(tǒng)