一種鴨病毒性肝炎的滅活疫苗及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鴨病毒性肝炎的滅活疫苗及其 制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鴨病毒性肝炎簡稱鴨肝炎，是由鴨病毒性肝炎病毒引起的一種以肝臟呈現(xiàn)出血性 炎癥為特征的急性烈性傳染病。病鴨和帶毒鴨是主要傳染源，主要通過消化道和呼吸道感 染。飼養(yǎng)管理不良，缺乏維生素和礦物質(zhì)，鴨舍潮濕、擁擠，均可促使鴨病毒性肝炎發(fā)生。鴨 病毒性肝炎一旦發(fā)生，在鴨群中傳播很快，發(fā)病率可達(dá)1〇〇%。鴨病毒性肝炎主要感染20 日齡以內(nèi)的雛鴨，潛伏期為1-4天，突然發(fā)病，病程短促。病初精神萎靡，不食，行動呆滯，縮 頸，翅下垂，眼半閉呈昏迷狀態(tài)，有的出現(xiàn)腹瀉。不久，病鴨出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，不安，運(yùn)動失調(diào)， 身體倒向一側(cè)，兩腳發(fā)生痙攣，數(shù)小時(shí)后死亡。死前頭向后彎，呈角弓反張姿勢。剖析可見 特征性病變在肝臟。肝腫大，呈黃紅色或花斑狀，表面有出血點(diǎn)和出血斑，膽囊腫大，充滿膽 汁。脾臟有時(shí)腫大，外觀也類似肝臟的花斑。多數(shù)腎臟充血、腫脹。心肌如煮熟狀。有些病 例有心包炎、氣囊中有微黃色滲出液和纖維素絮片。
[0003] 目前，在我國同時(shí)流行由1型鴨肝炎病毒和3型鴨肝炎病毒引起的雛鴨病毒性肝 炎?，F(xiàn)有的鴨病毒性肝炎疫苗為1型鴨病毒性肝炎弱毒活疫苗，主要通過如下方法制備：將 鴨肝炎病毒弱毒株接種雞胚，收集胚液，加入保護(hù)劑后凍干。使用時(shí)，用生理鹽水稀釋，采用 肌肉注射成鴨或雛鴨。弱毒活疫苗存在如下問題：（1)保存和運(yùn)輸需-20°C低溫條件，不方 便；（2)免疫鴨后，疫苗病毒在體內(nèi)存活時(shí)間長、易排毒，且病毒對環(huán)境抵抗力強(qiáng)、易毒力返 強(qiáng)；（3)疫苗的免疫效果不穩(wěn)定，易受母源抗體干擾，造成免疫失敗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SH株，其保藏編號為 CGMCCNo. 10098。
[0005] 上述的鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SH株在制備鴨病毒性肝炎二價(jià)疫苗中的應(yīng)用也 屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0006] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種鴨肝炎病毒的組合物。
[0007] 本發(fā)明提供的鴨肝炎病毒的組合物的活性成分由鴨甲型肝炎病毒1型病毒和鴨 甲型肝炎病毒3型病毒組成。
[0008] 上述組合物中，所述鴨甲型肝炎病毒1型病毒和所述鴨甲型肝炎病毒3型病毒的 病毒量比為1:1。
[0009] 上述組合物中，所述鴨甲型肝炎病毒1型病毒具體為鴨甲型肝炎病毒1型病毒液； 所述鴨甲型肝炎病毒3型病毒具體為鴨甲型肝炎病毒3型病毒液。
[0010] 上述組合物中，所述鴨甲型肝炎病毒1型病毒液的病毒量具體為 106 25ELD5(l/100ml;所述鴨甲型肝炎病毒3型病毒液的病毒量具體為106 25ELD5(l/100ml;所述 鴨甲型肝炎病毒1型病毒液和鴨甲型肝炎病毒3型病毒液的體積比具體為1:1。
[0011] 上述組合物中，所述鴨甲型肝炎病毒1型病毒液進(jìn)一步具體為滅活的鴨甲型肝炎 病毒1型病毒液；所述鴨甲型肝炎病毒3型病毒液進(jìn)一步具體為滅活的鴨甲型肝炎病毒3型病毒液。
[0012] 上述組合物中，所述鴨甲型肝炎病毒1型的病毒株進(jìn)一步具體為鴨甲型肝炎病毒 1型DHAV-SH株CGMCCNo. 10098;所述鴨甲型肝炎病毒3型的病毒株進(jìn)一步具體為鴨甲型 肝炎病毒 3 型DHAV-FS株CGMCCNo. 4457。
[0013] 上述組合物中，所述滅活的鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SH株病毒液的制備方法如 下：在鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SH株病毒液中加入甲醛溶液，孵育后得到所述滅活的鴨甲 型肝炎病毒1型DHAV-SH株病毒液；
[0014] 所述滅活的鴨甲型肝炎病毒3型DHAV-FS株病毒液的制備方法如下：在鴨甲型肝 炎病毒3型DHAV-FS株病毒液中加入甲醛溶液，孵育后得到所述滅活的鴨甲型肝炎病毒3 型DHAV-FS株。
[0015] 上述組合物中，所述滅活的鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SH株病毒液的制備方法中， 所述孵育溫度為37°C ;所述孵育時(shí)間為24小時(shí)；
[0016] 所述滅活的鴨甲型肝炎病毒3型DHAV-FS株病毒液的制備方法中，所述孵育溫度 為37°C ;所述孵育時(shí)間為24小時(shí)。
[0017] 上述的組合物在制備鴨病毒性肝炎二價(jià)疫苗中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0018] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種鴨病毒性肝炎二價(jià)疫苗。
[0019] 本發(fā)明提供的鴨病毒性肝炎二價(jià)疫苗其活性成分為上述的組合物。
[0020] 上述疫苗中，包括抗原和油佐劑；
[0021] 上述疫苗中，所述抗原為將上述的組合物與吐溫-80混合得到的混合物。
[0022] 上述疫苗中，所述組合物中的所述鴨甲型肝炎病毒1型病毒、所述組合物中的所 述鴨甲型肝炎病毒3型病毒和所述油佐劑的配比為9. 6X105_25ELD5Q: 9. 6X105_ 25ELD5Q: 4ml。
[0023] 上述疫苗中，所述油佐劑為將MontanideISA206、硬脂酸鋁和司本-80混合得 到。
[0024] 上述疫苗中，所述MontanideISA206、硬脂酸錯和司本-80的配比具體為 94ml:2g:6ml〇
[0025] 上述疫苗中，所述抗原與所述油佐劑的體積比具體為1:1. 5。
[0026] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種制備鴨病毒性肝炎二價(jià)疫苗的方法。
[0027] 本發(fā)明提供的制備鴨病毒性肝炎二價(jià)疫苗的方法包括如下步驟：
[0028]1)分別制備抗原和油佐劑；
[0029] 所述抗原的制備方法包括如下步驟：將上述的組合物和吐溫-80混合，得到所述 抗原；
[0030] 所述組合物中的所述鴨甲型肝炎病毒1型病毒、所述組合物中的所述鴨甲型肝炎 病毒3型病毒和所述吐溫-80的配比具體為9. 6X105_ 25ELD5Q: 9. 6X105_25ELD5Q: 4ml;
[0031] 所述油佐劑的制備方法包括如下步驟：將MontanideISA206、硬脂酸鋁和司 本-80混合，得到所述油佐劑；
[0032] 所述MontanideISA206、硬脂酸錯和司本-80的配比具體為94ml: 2g:6ml;
[0033] 2)將所述抗原和所述油佐劑混勾，乳化，得到所述鴨病毒性肝炎二價(jià)疫苗；
[0034] 所述抗原和所述油佐劑體積比具體為1:1. 5。
[0035] 本發(fā)明的最后一個(gè)目的是提供一種油佐劑。
[0036] 本發(fā)明提供的油佐劑是由MontanideISA206、硬脂酸鋁和司本-80組成。
[0037] 上述油佐劑，所述MontanideISA206、硬脂酸錯和司本-80的配比具體為 94ml:2g:6ml〇
[0038] 上述的油佐劑在制備鴨病毒性肝炎疫苗中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0039]上述的DHAV-SH株CGMCCNo.10988和 / 或DHAV-FS株CGMCCNo.4457在制備鴨 病毒性肝炎疫苗中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0040] 上述的DHAV-SH株的分類命名為鴨甲型肝炎病毒1型，該菌株已于2014年12 月03日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址：北京 市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研宄所，郵編10010