一種制備鮑魚硫酸多糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及從海洋動(dòng)物的加工副產(chǎn)物中制備多糖的技術(shù)領(lǐng)域，更具體，涉及從鮑魚的性腺或臟器中制備硫酸多糖的技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]鮑魚是中國傳統(tǒng)的名貴食材，位居四大海味之首。鮑魚的臟器，包括性腺，是鮑魚加工的副產(chǎn)物，目前多作為低值飼料處理甚至被丟棄，造成了生物資源的浪費(fèi)和環(huán)境的污染。朱蓓薇等人的研宄發(fā)現(xiàn)，鮑魚臟器中的硫酸多糖具有抗氧化、抗凝血、免疫調(diào)節(jié)等作用，非常具有開發(fā)價(jià)值。
[0003]通過檢索，發(fā)現(xiàn)如下三篇與本專利申請相關(guān)的公開專利文獻(xiàn):1.朱蓓薇等公開了鮑魚多糖的提取方法(CN200510047409.X)，是將鮑魚去殼取肉(包括內(nèi)臟)，用組織搗碎機(jī)破壁，加水混合均勻于20?80°C浸提2?6h，離心分離，不溶物再次加水重復(fù)提取I?2次，上清液合并。濃縮提取液至含糖1.5?3.0%，加3?4倍體積的95%乙醇，O?4°C下醇沉12?16h，離心后真空法或噴霧法干燥得產(chǎn)品。提取還可以用加堿提取、超聲波提取、酶提取。酶提取可以用單一酶、雙酶、復(fù)合酶、自溶酶和復(fù)合法提取。酶為胃蛋白酶、胰蛋白酶等。2.陳錦權(quán)等公開了一種鮑魚多糖的制備工藝(CN 201110123164.X),它包括以下步驟:①將洗凈的鮑魚肉或臟器打漿得到鮑魚預(yù)處理液，常溫下采用高壓脈沖電場處理；②采用殼聚糖對PEF處理后的鮑魚料液進(jìn)行絮凝除去粗蛋白，以提高多糖純度采用電滲析技術(shù)對預(yù)處理液進(jìn)行處理，有效脫去重金屬；④采用乙醇沉淀制備鮑魚多糖。3.集美大學(xué)翁武銀公開了一種鮑魚多糖、脂質(zhì)和蛋白肽的聯(lián)產(chǎn)制備方法(CN 201310142151.6)，技術(shù)工藝包括以鮑魚內(nèi)臟為原料，通過復(fù)合酶解、膜分離、醇沉、離心分離、冷凍結(jié)晶、脫色、干燥等手段提取制備鮑魚多糖、脂質(zhì)和蛋白肽。
[0004]通過比對，上述公開專利的技術(shù)方案和目標(biāo)產(chǎn)品與本專利申請有本質(zhì)的不同，本專利申請具有新穎性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種從鮑魚內(nèi)臟或性腺中制備鮑魚硫酸多糖的方法，該方法工藝成本低，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，產(chǎn)品純度高、品質(zhì)好，可用于醫(yī)藥、保健品行業(yè)等。
[0006]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明制備鮑魚硫酸多糖的方法，包括以下步驟:
[0007]S1、以鮑魚內(nèi)臟或性腺為原料，粉碎后，堿法或酶法使多糖與蛋白解離，提取出粗多糖，提取液靜置冷卻后離心，取上清液；
[0008]S2、所述上清液經(jīng)離子交換樹脂吸附，水沖洗至流出液澄清后，分別用兩種濃度氯化鈉溶液依次洗脫，收集流出液；所述離子交換樹脂為大孔徑強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂，所述兩種濃度氯化鈉溶液是指體積為離子交換樹脂3?5倍的1.4mol/L氯化鈉溶液和體積為離子交換樹脂2?4倍的3mol/L氯化鈉溶液；
[0009]S3、所述流出液加入1.2?3倍體積的95%乙醇，靜置8h以上，收集沉淀部分；
[0010]S4、得到沉淀部分加入水或O?4%氯化鈉水溶解后，采用堿法解離蛋白后，靜置冷卻后離心，取上清液，酶法解離蛋白；
[0011]S5、調(diào)酸除蛋白，氧化脫色，醇沉，沉淀溶解后膜法除鹽，收集膜內(nèi)部分，經(jīng)冷凍干燥后獲得鮑魚硫酸多糖。
[0012]步驟SI中，所述堿法提取為加入2?4 %氯化鈉水溶液，氫氧化鈉溶液調(diào)pH8?9,50 ~ 60°C加熱攪拌L 5?3h。
[0013]步驟SI中，所述酶法提取為加入pH8.0Tris-醋酸緩沖液，加入原料干重2%胰蛋白酶35?45°C振搖3?5h，加入原料干重2%木瓜蛋白酶45?60°C振搖3?5h，90?100 °C加熱攪拌5?10分鐘。
[0014]步驟S4所述堿法解離蛋白，具體為用氫氧化鈉溶液調(diào)pH 8?9，50?60 °C恒溫?cái)嚢鐸?3h。
[0015]步驟S4所述酶法解離蛋白，具體為加入沉淀干重0.1?0.5%胰蛋白酶，35?45°C攪拌4?6h。
[0016]步驟S5中:所述調(diào)酸除蛋白，具體為加入0.2?2%亞硫酸氫鈉作保護(hù)劑，鹽酸調(diào)pH 1.5?2.0，低溫離心，收集上清液；所述氧化脫色，具體為加入體積比I %過氧化氫，調(diào)PH8.5，室溫放置I日后，鹽酸調(diào)pH 6.5?7.0 ;所述醇沉，具體為加入1.2?3倍95%乙醇，靜置8h以上。
[0017]在步驟S3，醇沉之前，為節(jié)約醇沉?xí)r乙醇的用量，流出液可采用超濾方法濃縮，并可起到除鹽效果，然后醇沉。
[0018]整合上述步驟，本發(fā)明一種最優(yōu)的方式，鮑魚硫酸多糖的制備方法，包括以下步驟:
[0019]Step 1、以鮑魚內(nèi)臟或性腺為原料，粉碎后，堿法提取或酶法提取，提取液靜置冷卻后離心，取上清液；
[0020]Step 2、Step I得到的上清液反復(fù)流經(jīng)大孔徑強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂，使硫酸多糖吸附于所述離子交換樹脂，用水沖洗所述離子交換樹脂，至流出液澄清無色，然后用3?5倍樹脂體積的1.4mol/L氯化鈉溶液循環(huán)流經(jīng)所述離子交換樹脂，收集流出液；2?4倍樹脂體積的3mol/L氯化鈉溶液循環(huán)流經(jīng)所述離子交換樹脂，收集流出液；合并兩種流出液；
[0021]Step 3,Step 2得到的流出液若體積過大，可用超濾方法除鹽和濃縮；加入L 2?3倍體積的95%乙醇，靜置8h以上，收集沉淀部分；
[0022]Step 4、Step 3得到沉淀部分用O?4%氯化鈉溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH 8?9，50?60°C恒溫?cái)嚢鐸?3h，靜置冷卻后離心，取上清液，加入沉淀干重0.1?0.5%胰蛋白酶，35?45°C攪拌4?6h ;
[0023]Step 5,Step 4后的溶液，冷卻后加入0.2?2%亞硫酸氫鈉作保護(hù)劑，鹽酸調(diào)pH
1.5?2.0，迅速低溫離心，上清液加入I % (v/v)過氧化氫，調(diào)pH8.5，室溫放置I日后，鹽酸調(diào)pH 6.5?7.0，加入1.2?3倍95%乙醇，靜置8h以上，沉淀部分用水溶解后，膜法除鹽，收集膜內(nèi)部分，經(jīng)冷凍干燥后獲得鮑魚硫酸多糖。
[0024]其中，Step I所述堿法提取為加入2?4%氯化鈉水溶液，氫氧化鈉溶液調(diào)pH8?9，50?60°0加熱攪拌1.5?3h ;所述酶法提取為加入pH8.0Tris-醋酸緩沖液，加入原料干重2%胰蛋白酶35?45°C振搖3?5h，加入原料干重2%木瓜蛋白酶45?60°C振搖3?5h，90?100°C加熱攪拌5?1mino
[0025]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果:
[0026]以本發(fā)明所提供的方法獲得的硫酸多糖純度高，蛋白含量低于10%，制備條件溫和，對硫酸多糖功能基團(tuán)破壞小，硫酸基含量大于5%。
[0027]本發(fā)明使用強(qiáng)堿性陰離子離子交換樹脂，能夠特異性的富集硫酸多糖，避免了蛋白、中性多糖等雜質(zhì)的引入，保證了產(chǎn)品的品質(zhì)。而且與其它工藝方法相比，使用樹脂富集的方法能夠減少醇沉?xí)r的乙醇用量，降低成本和能耗。
[0028]本發(fā)明使用的離子交換樹脂、膜分離等市場上均有供工業(yè)化生產(chǎn)的材料和設(shè)備，易于建立工藝生產(chǎn)線。
[0029]本發(fā)明使用的原料為鮑魚性腺和內(nèi)臟，它們是鮑魚加工的副產(chǎn)物，而且是鮑魚主要含硫酸多糖的部位，以它們?yōu)樵仙a(chǎn)硫酸多糖，得率高，而且成本低，實(shí)現(xiàn)了對海洋生物資源的綜合利用。
【附圖說明】
[0030]圖1是實(shí)施例1所得的鮑魚硫酸多糖的核磁共振氫譜和碳譜；
[0031]圖2是實(shí)施例1所得的鮑魚硫酸多糖的碳譜；<