一株具有高絮凝活性且對亞甲基藍有脫色作用的耐冷細菌的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一株具有高絮凝活性和對亞甲基藍脫色作用的耐冷細菌。
【背景技術】
[0002] 現(xiàn)在廣泛應用的絮凝劑成分都是一些無機或有機高分子化合物，主要用于工業(yè)廢 水、污水處理和生物發(fā)酵過程中的液固分離。這些絮凝劑的優(yōu)點是絮凝效果好，價格便宜， 但是對生態(tài)環(huán)境污染和人類健康危害局限著它們的應用。而絮凝劑總的發(fā)展趨勢是廉價實 用，高效低毒，微生物絮凝劑因使用高效方便，無二次污染，被預測將會取代現(xiàn)在大量使用 的無機和有機高分子絮凝劑，對它的研宄也說明生物絮凝具有廣闊的前景。國內(nèi)外研宄報 道可以分泌絮凝劑的菌種已經(jīng)超過50種，其中大多數(shù)是細菌，也有放線菌、真菌等。這些生 物絮凝劑對各種工業(yè)廢水和污水的絮凝效率達到60%?98%，可喜的是它們還表現(xiàn)出廣 譜的絮凝活性，目前報道生物絮凝劑可以高效絮凝的有機廢水包括啤酒廢水、乳品廢水、醬 油廢水、制藥廢水、印染廢水、生活污水、給水處理等。
[0003] 但到目前為止，生物絮凝劑尚未得到推廣應用。生產(chǎn)成本過高是阻礙其推廣的主 要原因。以細菌為例，葡萄糖和果糖通常是絮凝劑合成的最佳碳源，同時需要酵母膏和牛 肉膏，酪蛋白，酪氨酸等作最適氮源，這些高價值原材料的使用使絮凝劑的合成成本大幅提 高。近些年，有人探索使用廉價培養(yǎng)物，如農(nóng)業(yè)廢棄纖維素原料、食品生產(chǎn)廢水等培養(yǎng)絮凝 劑生產(chǎn)菌，來降低生產(chǎn)成本；但是從發(fā)酵液中提取制備絮凝劑也需要耗費大量的乙醇和丙 酮等有機溶劑，從而推高成本。所以有人提出生產(chǎn)絮凝菌劑，也就是直接將絮凝菌種接種到 待絮凝環(huán)境中，這種方法存在的問題是絮凝菌在新環(huán)境中的活性是否可以保證。尤其是對 一些不利于菌種生長的極端環(huán)境，如低溫環(huán)境。我國北方地區(qū)氣候寒冷，冰凍期長，冬春季 節(jié)水溫可降至(TC?2°C。若能得到低溫微生物絮凝劑并用于污水處理及低溫生物修復，則 對北方地區(qū)生態(tài)恢復具有重要意義。目前國內(nèi)外研宄的產(chǎn)絮凝劑的菌大多是中溫菌，在低 溫菌方面還很少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供一株耐冷假單胞菌（Pseudomonas sp.)，可產(chǎn)絮凝劑，并對亞甲基藍具 有高脫色率，可用于低溫環(huán)境修復和印染污水處理等方面。
[0005] 本發(fā)明具有高絮凝活性且對亞甲基藍有脫色作用的耐冷細菌為假單胞菌 (Pseudomonas sp. )DH-8,保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地 址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2010年12月10日，保藏編號為CGMCC No.4444〇
[0006] 本發(fā)明假單胞菌DH-8為革蘭氏陽性菌，菌落圓形呈乳白色，2?3. 5mm，潮濕，有明 顯凸起的部分，邊緣光滑整齊。可產(chǎn)生淀粉酶和蛋白酶水解淀粉和明膠，能分解尿素和硝酸 還原能力，可利用檸檬酸作碳源，氧化酶陽性。
[0007] 本發(fā)明假單胞菌DH-8可在0?35°C溫度范圍內(nèi)生長，最適生長溫度為15?20°C， 在o°c可以生長，是一株耐冷細菌。
[0008] 本發(fā)明假單胞菌DH-8通過16S rDNA序列比對分析，與假單胞菌屬（Pseudomonas sp.)內(nèi)各種之間有極高的同源性，同源性為99%。通過結合菌體形態(tài)特征、生長條件、生理 生化鑒定結果確定假單胞菌DH-8屬于假單胞菌屬（Pseudomonas sp.)。
[0009] 本發(fā)明假單胞菌DH-8可產(chǎn)絮凝劑，其絮凝劑對高嶺土顆粒的絮凝效率達到 96. 8%，對亞甲基藍脫色率最高達98%，在相同投加量下性能明顯優(yōu)于無機絮凝劑、有機絮 凝劑、微生物絮凝劑。適用于低溫印染污水處理及低溫條件下的生物發(fā)酵。本發(fā)明經(jīng)過實 驗驗證假單胞菌DH-8在溫度低至5°C時仍然可以生長，其產(chǎn)生的絮凝劑仍保留80%的絮凝 效率。
[0010] 本發(fā)明假單胞菌DH-8屬于假單胞菌屬（Pseudomonas sp.)，保藏在中國微生物菌 種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日 期為2010年12月10日，保藏編號為CGMCC No. 4444。
【附圖說明】
[0011] 圖1為本發(fā)明假單胞菌DH-8放大20000倍的電鏡照片；圖2為假單胞菌DH-8所 產(chǎn)絮凝劑粗制品；圖3為假單胞菌DH-8產(chǎn)絮凝劑粗制品對高嶺土的絮凝效果；圖4為假單 胞菌DH-8所產(chǎn)絮凝劑純品；圖5為各絮凝劑亞甲基藍溶液的脫色效果對比圖。
【具體實施方式】
[0012] 本發(fā)明技術方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的 任意組合。
【具體實施方式】 [0013] 一：本實施方式具有高絮凝活性且對亞甲基藍有脫色作用的耐冷細 菌為假單胞菌（Pseudomonas sp.)DH-8,保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，保藏地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2010年12月10日，保 藏編號為 CGMCC No. 4444。
[0014] 本實施方式假單胞菌DH-8為革蘭氏陽性菌，菌落圓形呈乳白色，2?3. 5mm，潮濕， 有明顯凸起的部分，邊緣光滑整齊。可產(chǎn)生淀粉酶和蛋白酶水解淀粉和明膠，能分解尿素和 硝酸還原能力，可利用檸檬酸作碳源，氧化酶陽性。假單胞菌DH-8放大20000倍的電鏡照 片如圖1所示。
[0015] 本實施方式假單胞菌DH-8可在0?35°C溫度范圍內(nèi)生長，最適生長溫度為15? 20°C，在0°C可以生長，是一株耐冷細菌。
[0016] 本實施方式假單胞菌（Pseudomonas sp. )DH_8從處理低溫污水的生物反應器中篩 選得到。分離方法按以下步驟進行：
[0017] 從處理低溫污水的生物反應器中取活性污泥，將Ig活性污泥置于50mL離心管 中，用漩渦振蕩器震蕩15min，制成梯度稀釋樣品懸液進行平板涂布，梯度依次為10'ΚΓ 2、 10'10'10'1〇Λ最初菌種篩選培養(yǎng)基選用2種，分別為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和LB培養(yǎng) 基。涂布后將平板置于4°C培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基平板上長出菌落后，挑取形態(tài)不同的有代表性的 單個純菌落，再經(jīng)過多次平板劃線分離，確定為純菌株后，進行編號，試管斜面法保存。共分 離到低溫菌有29株。對分離到的細菌進行產(chǎn)絮能力的初篩和復篩試驗，結果獲得一株可高 效絮凝的耐冷細菌，對高嶺土絮凝顆粒大，絮凝效果好，即為本實施方式的假單胞菌DH-8。
[0018] 對分離篩選得到的假單胞菌DH-8進行分子鑒定，以假單胞菌DH-8基因組DNA為模 板，采用細菌