一種高含量磷脂酰乙醇胺的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于制藥工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種高含量磷脂酰乙醇胺的制備 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine簡(jiǎn)稱PE)又稱乙醇胺磷酸甘油醋，結(jié) 構(gòu)上是由乙醇胺和磷脂酸兩部分組成的一類磷脂化合物。較早時(shí)應(yīng)用于食品加工及保健品 研宄等領(lǐng)域，隨著研宄的不斷深入，磷脂酰乙醇胺逐漸的被人們應(yīng)用到藥物制劑領(lǐng)域，在如 今最活躍的脂質(zhì)體技術(shù)領(lǐng)域，不僅高純度磷脂酰乙醇胺是脂質(zhì)體制劑的重要輔料來(lái)源，也 是其他重要的脂質(zhì)體輔料如合成磷脂〇)〇PE、DEPE等）的關(guān)鍵起始原料。目前中國(guó)藥典收 載的藥用磷脂主要控制指標(biāo)包括甘油三酯、游離脂肪酸、過(guò)氧化值、酸值等，另外甲氧基苯 胺值是過(guò)氧化物的再次氧化產(chǎn)物指標(biāo)，在制劑中有嚴(yán)格控制，因此開發(fā)注射用磷脂酰乙醇 胺需要嚴(yán)格控制上述關(guān)鍵指標(biāo)。
[0003] 目前分離磷脂酰乙醇胺的方法有co2超臨界萃取法、溶劑萃取法、吸附法、柱層析 法等。
[0004] C02超臨界萃取法只適合制備混合磷脂，所得產(chǎn)品磷脂酰乙醇胺含量普遍偏低。磷 脂酰乙醇胺與其他磷脂的分子量較接近，膜分離法要得到單一磷脂酰乙醇胺仍存在困難， 其產(chǎn)品含量偏低不能滿足藥用磷脂要求。溶劑提取法是通過(guò)磷脂酰乙醇胺在兩相溶劑中的 溶解度的差異達(dá)到富集純化的目的，對(duì)理化性質(zhì)非常相似的各類磷脂雜質(zhì)的選擇性較差。
[0005] 吸附法是一種較常用的純化方法，通過(guò)選擇不同理化特性的吸附劑對(duì)待吸附原料 液進(jìn)行攪拌吸附，達(dá)到純化的效果，常見(jiàn)的吸附劑有：三氧化二鋁、硅膠等，該方法只對(duì)磷脂 酰膽堿、酸值等指標(biāo)有一定的吸附效果，很難保證含量、溶血磷脂酰膽堿（LPC)等關(guān)鍵指標(biāo) 符合藥用標(biāo)準(zhǔn)。
[0006] 硅膠柱層析法是另一種較常用的分離純化方法，固定相與待分離物質(zhì)的比例、洗 脫溶劑種類和比例對(duì)柱層析的分離效果與除雜能力有巨大的影響，柱層析方法的溶劑及比 例選擇與產(chǎn)品本身的性質(zhì)以及雜質(zhì)性質(zhì)有關(guān)，該方法雖常見(jiàn)，但能夠使產(chǎn)品純度高同時(shí)又 能符合注射用要求的方法未見(jiàn)報(bào)道。
[0007] 采用柱層析純化磷脂酰乙醇胺的專利較多，如中國(guó)專利CN100336818C、 CN103183705A分別公開了不同來(lái)源的磷脂酰乙醇胺粗品經(jīng)柱層析硅膠過(guò)柱，利用鹵代烷 烴-甲醇洗脫得到磷脂酰乙醇胺含量分別為96. 2%、91. 4%?94. 5%的產(chǎn)品，這兩篇專利 均采用鹵代烷烴-甲醇兩相體系為洗脫液，所得產(chǎn)品含量偏低，其他指標(biāo)如甘油三酯、脂肪 酸、過(guò)氧化值、甲氧基苯胺值等指標(biāo)無(wú)法得到有效控制，難以滿足藥用輔料要求。
[0008] 中國(guó)專利CN103102366A公開了一種于醇溶性磷脂中分離磷脂酰乙醇胺的方法， 該方法以硅膠為填充劑，乙醇為洗脫劑，得到磷脂酰乙醇胺含量為86%?96. 2%的產(chǎn)品。 此方法采用單組分溶劑進(jìn)行分離洗脫，受極性影響，很難控制產(chǎn)品中甘油三酯、脂肪酸、過(guò) 氧化值、甲氧基苯胺值等指標(biāo)，且該方法很難實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0009] 以上三篇專利技術(shù)無(wú)論是用低碳醇洗脫，還是用鹵代烷烴-甲醇洗脫，所得到磷 脂酰乙醇胺產(chǎn)品仍然存在缺陷，含量、雜質(zhì)限度與氧化指標(biāo)等不能同時(shí)滿足注射藥用磷脂 的要求。
[0010] 在現(xiàn)有專利技術(shù)純化磷脂酰乙醇胺的應(yīng)用中，其產(chǎn)品雜質(zhì)（磷脂酰膽堿、溶血磷 脂酰膽）、氧化指標(biāo)（酸值、過(guò)氧化值、甲氧基苯胺值）不能完全符合藥用磷脂的要求。目前 開發(fā)藥用磷脂的技術(shù)領(lǐng)域里，沒(méi)有專門針對(duì)控制過(guò)氧化值、甲氧基苯胺值等理化指標(biāo)的方 法，磷脂酰乙醇胺具有高不穩(wěn)定性，開發(fā)該類產(chǎn)品需要過(guò)度依賴于起始原料的新鮮度。受技 術(shù)約束，目前國(guó)內(nèi)藥用磷脂酰乙醇胺主要依賴進(jìn)口，且價(jià)格昂貴，供貨周期長(zhǎng)，導(dǎo)致磷脂酰 乙醇胺相關(guān)產(chǎn)品開發(fā)周期長(zhǎng)、成本高，不利于市場(chǎng)的普及應(yīng)用。
[0011] 因此，開發(fā)以腦磷脂粗品為原料，通過(guò)柱層析并對(duì)三元混合溶劑比例進(jìn)行控制，經(jīng) 過(guò)兩次洗脫，即可以提高產(chǎn)品含量又可以降低甘油三酯、游離脂肪酸、酸值、過(guò)氧化值、甲氧 基苯胺值等關(guān)鍵指標(biāo)，使得產(chǎn)品質(zhì)量符合藥用要求，對(duì)新型靶向制劑的發(fā)展具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高含量磷脂酰乙醇胺的制備方 法。本發(fā)明通過(guò)柱層析以三元混合溶劑為洗脫劑進(jìn)行兩次洗脫，一步提高磷脂酰乙醇胺含 量并且有效控制產(chǎn)品中雜質(zhì)限度（磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰膽堿、游離脂肪酸、甘油三酯） 和氧化指標(biāo)（酸值、過(guò)氧化值、甲氧基苯胺值）。
[0013] 方法的步驟如下：
[0014] 以腦磷脂粗品為原料，加入多鹵代烷烴溶解，經(jīng)過(guò)柱層析以多鹵代烷烴-低碳 醇-水所組成的三元混合溶劑進(jìn)行兩次洗脫處理，干燥，得到高純度磷脂酰乙醇胺產(chǎn)品。
[0015] 方法所用腦磷脂粗品原料為來(lái)源于大豆、蛋黃的磷脂粗品，其中磷脂酰乙醇胺含 量大于50%。
[0016] 所用填料包括硅膠或二醇基硅膠。
[0017] 所用填料與原料的比例為1:1?10:1 (kg/kg)。
[0018] 所用的多鹵代烷烴包括二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷。
[0019] 所用的低碳醇包括無(wú)水乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇。
[0020] 第一次洗脫所用的三元混合溶劑包括多鹵代烷烴，低碳醇和水。其中多鹵代烷烴 占混合溶劑的比例為85. 7 %?98. 0 %，水占混合溶劑的比例為0. 1 %?0. 2 %，其余為低碳 醇。
[0021] 第二次洗脫所用的三元混合溶劑包括多鹵代烷烴，低碳醇和水。其中多鹵代烷烴 占混合溶劑的比例為73. 5 %?85. 0 %，水占混合溶劑的比例為0. 3 %?2. 0 %，其余為低碳 醇。
[0022] 第一次洗脫體積用量（v)與原料重量（w)比為6:1?18:1 (L/Kg)。
[0023] 第二次洗脫體積用量（v)與原料重量（w)比為10:1?45:1 (L/Kg)。
[0024] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
[0025] (1)本發(fā)明采用三元混合溶劑體系，結(jié)合兩次洗脫，就可以保證磷脂酰乙醇胺含量 符合要求的同時(shí)達(dá)到脫色、除雜（降低磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰膽堿、甘油三酯、游離脂肪 酸含量等雜質(zhì)限度）、降值（降低酸值、過(guò)氧化值、甲氧基苯胺值）的效果。
[0026] (2)本發(fā)明解決了現(xiàn)有同類專利技術(shù)所存在的技術(shù)瓶頸，從技術(shù)層面解決了降低 過(guò)氧化值、甲氧基苯胺值等理化指標(biāo)的難題，大大減少了磷脂酰乙醇胺產(chǎn)品對(duì)起始原料新 鮮程度的過(guò)度依賴。
[0027] (3)本發(fā)明對(duì)原料的處理量大，生產(chǎn)操作簡(jiǎn)便，可商業(yè)化大生產(chǎn)得到符合藥用磷 脂要求合格產(chǎn)品，填補(bǔ)國(guó)內(nèi)空白，打破國(guó)外的技術(shù)和產(chǎn)品壟斷，有利于國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上的普及應(yīng) 用。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 以下實(shí)施例所得產(chǎn)品中磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰膽堿、甘油三酯、 游離脂肪酸含量以及酸值、過(guò)氧化值等關(guān)鍵均按照中國(guó)藥典收載的磷脂檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè) 定，甲氧基苯胺值按照歐洲藥典8. 0版2. 5. 36方法測(cè)定。
[0029] 實(shí)施例1 :
[0030] 取大豆腦磷脂粗品（PE彡50% )1公斤，加入二氯甲烷溶解配成原料液，填裝10 公斤硅膠進(jìn)行柱層析，第一次以洗脫劑（二氯甲烷85. 7%、乙醇14. 2%、水0. 1% )洗脫18 升，第二次再以洗脫劑（三氯甲烷73. 5%、丙醇24. 5、水2. 0% )洗脫45升收集洗脫液，經(jīng) 過(guò)真空濃縮，冷凍干燥得到磷脂酰乙醇胺產(chǎn)品，PE轉(zhuǎn)移率為85. 4%，磷脂酰乙醇胺含量為 99. 5%、磷脂酰膽堿含量為0. 3%、溶血磷脂酰膽堿含量為未檢出，酸值為0. 8、過(guò)氧化值未 檢出、甲氧基苯胺值為3. 6,甘油三酯、游離脂肪酸含量均符合規(guī)定。
[0031] 實(shí)施例2:
[0032] 取蛋黃腦磷脂粗品（PE多50% ) 1公斤，加入三氯甲烷溶解配成原料液，填裝7公 斤二醇基硅膠進(jìn)行柱層析，第一次以洗脫劑（三氯甲烷90. 0%、丙醇9. 8%、水0. 2% )洗脫 15升，第二次再以洗脫劑（二氯甲烷75. 0%、丙醇24. 5%、水0. 5% )洗脫30升收集洗脫 液，經(jīng)過(guò)真空濃縮，冷凍干燥得到磷脂酰乙醇胺產(chǎn)品，PE轉(zhuǎn)移率為83. 5%，磷脂酰乙醇胺含 量為99. 0%、磷脂酰膽堿含量為0. 5%、溶血磷脂酰膽堿含量未檢出，酸值為0. 4、過(guò)氧化值 未檢出、甲氧基苯胺值為1. 0,甘油三酯、游離脂肪酸含量均符合規(guī)定。
[0033] 實(shí)施例3 :
[0034] 取大豆腦磷脂粗品（PE彡50% ) 10公斤，加入二氯乙烷溶解配成原料液，填裝50 公斤二醇基硅膠進(jìn)行柱層析，第一次以洗脫劑（二氯乙烷93.0%、乙醇6.8%、水0. 2%)洗 脫460升，第二次再以洗脫劑（二氯乙烷80.0%、乙醇19.0%、水1.0% )洗脫440升收集 洗脫液，經(jīng)過(guò)真空濃縮，冷凍干燥得到磷脂酰乙醇胺產(chǎn)品，PE轉(zhuǎn)移率為82. 2%，磷脂酰乙醇 胺含量為98. 5%、磷脂酰膽堿含量為0. 2%、溶血磷脂酰膽堿含量未檢出，酸值為1. 0、過(guò)氧 化值未檢出、甲氧基苯胺值為3. 0,甘油三酯、游離脂肪酸含量均符合規(guī)定。
[0035] 實(shí)施例4 :
[0036] 取蛋黃腦磷脂粗品（PE彡50% ) 10公斤，加入二氯甲烷溶解配成原料液，填裝30 公斤二醇基硅膠進(jìn)行柱層析，第一次以洗脫劑（二氯甲烷88. 2%、丙醇11. 6%、水0. 2% ) 洗脫150升，第二次再以洗脫劑（二氯甲烷83.0%、乙醇16. 7%、水0.3% )洗脫400升收 集洗脫液，經(jīng)過(guò)真空濃縮，冷凍干燥得到磷脂酰乙醇胺產(chǎn)品，PE轉(zhuǎn)移率為77. 3%，磷脂酰乙 醇胺含量為