一種防治甘蔗黑穗病的生防菌株zhr0及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物保護(hù)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種防治甘蔗黑穗病的生防菌株ZHR0 及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 甘鹿黑穗?。╯ugarcanesmut)是由甘鹿鞭黑粉菌（Ustiliagoscitaminea Sydow)引起的一種真菌性病害，1877年在南非納塔爾首先報道，該病現(xiàn)已成為重要的世界 流行病害。染病的種蔗導(dǎo)致萌芽早，分蘗增多，葉片狹窄，淡綠色，蔗莖細(xì)小。甘蔗黑穗病典 型的癥狀是在病蔗梢部產(chǎn)生一個長而不分枝的黑色鞭狀物（稱為黑穗鞭），長短不一，短的 直或稍彎曲，長的向下卷曲。黑穗鞭中心為一條由薄壁組織或維管束組織構(gòu)成的心柱，心 柱外面附著一層黑色的冬孢子，冬孢子成熟后，薄膜破裂，大量黑色粉狀的冬孢子隨氣流飄 散。
[0003] 黑穗病直接降低蔗莖產(chǎn)量，同時降低蔗糖分，嚴(yán)重影響品質(zhì)，因此甘蔗黑穗病被稱 為甘蔗的"癌癥"。目前，中國甘蔗主栽品種普遍感染黑穗病，田間發(fā)病率超過10%，有的田 塊甚至超過50%，經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重，嚴(yán)重制約了甘蔗產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
[0004] 甘蔗黑穗病菌屬真菌中的擔(dān)子菌亞門黑粉菌屬甘蔗鞭黑粉菌，Ustiliago scitamineaSydow病菌從甘蔗的芽或幼芽的幼嫩分生組織侵入，是一種典型的莖寄生病 害，屬于系統(tǒng)性寄生病害。雖然對甘蔗黑穗病的認(rèn)識較早，但對病害的防治一直沒有穩(wěn)定而 有效的措施。傳統(tǒng)的防治方法如改善栽培措施、蔗種消毒、化學(xué)防治、選用抗病品種等。傳 統(tǒng)育種法很難篩選到高抗基因，而且難以克服抗病性和產(chǎn)量質(zhì)量性狀之矛盾；系統(tǒng)性病害 用化學(xué)藥物難以控制，而且化學(xué)防治中病菌易產(chǎn)生抗藥性，造成環(huán)境污染。因此許多病害尤 其是一些土傳病害、系統(tǒng)性病害的生物防治和拮抗菌的利用引起了國內(nèi)外的高度重視。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種防治甘蔗黑穗病的生防菌株ZHR0,對甘蔗產(chǎn)業(yè)危害較大 的黑穗病進(jìn)行生物防治。
[0006] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
[0007] -種菌株，所述菌株為Bacillusamyloliquefaciens(解淀粉芽孢桿菌ZHR0) ZHR0菌株，并且所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解淀粉芽孢桿菌ZHR0)菌株保藏 于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCCNO:M2014577。
[0008] 保藏單位地址：中國.武漢.武漢大學(xué)；保藏日期：2014年11月24日。
[0009] 所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解淀粉芽抱桿菌ZHR0)菌株在防治甘 蔗黑穗病的應(yīng)用。
[0010] 所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解淀粉芽抱桿菌ZHR0)菌株的篩選方 法，包括以下步驟：
[0011] (1)取數(shù)株甘蔗葉片放入滅菌塑料袋中迅速帶回實驗室，取5?20g甘蔗葉片經(jīng)過 消毒滅菌處理后剪碎放入滅菌的三角瓶中，加50?200ml無菌水，滅菌玻璃珠5?20g，于 搖床上150_180rpm振蕩20?45min后，靜置5?15min;
[0012] (2)吸取上清液稀釋至lO'lO'KT6三個梯度，從三個梯度稀釋液中各吸取 0. 05?0. 2mL液體分別接種在LB固體培養(yǎng)基上，28?32 °C恒溫培養(yǎng)三天，每個梯度重復(fù)三 次，根據(jù)培養(yǎng)基上菌落大小和形態(tài)分離純化并保存菌種。
[0013] 一種ZHR0生防菌劑的制備方法，將所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解 淀粉芽孢桿菌ZHR0)菌株接種在LB液體培養(yǎng)基上，100?300rpm振蕩培養(yǎng)12-16h，用滅菌 水稀釋至活菌總濃度為1X109-1X101(lCFU/ml，得到ZHR0生防菌劑。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明具有如下有益效果：
[0015] 本發(fā)明得到一種Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解淀粉芽抱桿菌ZHR0)菌 株，并通過對峙培養(yǎng)試驗和溫室桶栽實驗證明所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解 淀粉芽孢桿菌ZHR0)菌株具有較好的防治甘蔗黑穗病的效果，防效可達(dá)50%以上。
【具體實施方式】
[0016] 實施例1
[0017]所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解淀粉芽抱桿菌ZHR0)菌株是2013年 9月份在甘蔗葉片中分離得到的一株解淀粉芽孢桿菌。
[0018] 一種菌株的篩選方法，所述菌株為Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解淀粉芽 孢桿菌ZHR0)菌株，該方法包括以下步驟：
[0019] (1)取數(shù)株甘蔗葉片放入滅菌塑料袋中迅速帶回實驗室，取5g甘蔗葉片經(jīng)過 消毒滅菌處理后剪碎放入滅菌的三角瓶中，加50ml無菌水，滅菌玻璃珠5g，于搖床上 150_180rpm振蕩 30min后，靜置 10min;
[0020] (2)吸取上清液稀釋至lO'lO'KT6三個梯度，從三個梯度稀釋液中各吸取 0.lmL液體分別接種在LB固體培養(yǎng)基上，30°C恒溫培養(yǎng)三天，每個梯度重復(fù)三次，根據(jù)培養(yǎng) 基上菌落大小和形態(tài)分離純化并保存菌種。
[0021] 所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解淀粉芽抱桿菌ZHR0)菌株的基本生 物學(xué)特性為：革蘭氏染色陽性，菌體桿狀，芽孢卵圓形，最適生長溫度28-32°C，最適生長 PH6. 0-7. 0。
[0022] 通過 16SrDNA測序及NCBI比對，所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0 (解淀 粉芽孢桿菌ZHR0)菌株的16SrDNA序列與解淀粉芽孢桿菌的同源性達(dá)到99%。
[0023] 將所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0 (解淀粉芽抱桿菌ZHR0)菌株保藏于 中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCCNO:M2014577。
[0024] 實施例2
[0025] 所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解淀粉芽孢桿菌ZHR0)與甘鹿黑穗病 菌的第一組對峙培養(yǎng)試驗，具體方法如下：
[0026] 先在含PDA培養(yǎng)基的平板底部中央處畫兩條相互垂直的直線，用滅菌槍頭吸取 5ul在LB液體培養(yǎng)基上過夜培養(yǎng)的所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解淀粉芽孢 桿菌ZHR0)菌株接種在平板中心；再吸取5ul甘蔗黑穗病菌液（lX106CFU/ml，正負(fù)擔(dān)孢子 1:1)沿兩條垂直線滴于距中心2cm處，置于28°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天。平板中心的菌落為所 述Bacillus amyloliquefaciens ZHRO(解淀粉芽孢桿菌ZHRO)菌株，四周為甘蔗黑穗病菌 的四個菌落。
[0027] 由甘蔗黑穗病菌的菌落形狀能夠看出黑穗病菌在接近ZHR0-側(cè)生長受到明顯抑 制，這表明所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解淀粉芽孢桿菌ZHR0)菌