一種耐鹽基團(tuán)及包括該基因的重組載體的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分子生物學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域。涉及一種鹽地堿蓬基因及包括該基因的 重組載體。
【背景技術(shù)】
[0002] 土壤鹽漬化是影響干旱半干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要因素。隨著近年來國家 對(duì)鹽堿地的開發(fā)和利用日益重視，對(duì)抗鹽基因的分離與功能研宄成為生物學(xué)的熱門研宄方 向。創(chuàng)制耐鹽作物品種是在環(huán)球工業(yè)化的大背景下取得糧食產(chǎn)量穩(wěn)定持續(xù)增長的重要手段 之一，但是由于缺乏對(duì)作物耐鹽的分子機(jī)理以及與耐鹽有關(guān)基因的了解，阻礙了耐鹽作物 的培育。隨著對(duì)植物鹽脅迫應(yīng)答的分子機(jī)理研宄不斷深入，特別是以擬南芥為研宄對(duì)象，植 物在鹽脅迫條件下的離子平衡和耐鹽反應(yīng)調(diào)節(jié)途徑的研宄取得了突破性的進(jìn)展。目前，對(duì) 抗鹽基因的分離和應(yīng)用是當(dāng)前利用基因工程方法進(jìn)行抗鹽作物培育的首要任務(wù)。
[0003] 植物耐鹽是一個(gè)涉及到從細(xì)胞滲透，離子脅迫及其繼發(fā)脅迫，到整株協(xié)調(diào)等諸多 生化生理反應(yīng)的復(fù)雜過程。這些反映的調(diào)節(jié)無疑都是建立在基因功能的基礎(chǔ)上。而一些基 因又是某些反應(yīng)的產(chǎn)物?；蛐螒B(tài)和功能的多樣性使耐鹽機(jī)理研宄變得更為復(fù)雜。鹽地堿 蓬則是耐鹽機(jī)能研宄的強(qiáng)有力的模式生物。
[0004] 鹽地堿蓬（Suaeda salsa)又名翅堿蓬、黃須菜，為藜科（Chenopodiaceae) -年生 草本真鹽生植物，肉質(zhì)化真鹽生植物，生長于海涂或鹽場的鹽灘之上，具有耐鹽堿、耐旱、耐 澇等特性；鹽地堿蓬在我國分布極為廣泛，多數(shù)生于濱海洼地以及渠岸或田邊輕度鹽堿化 土壤，具有抗鹽堿和耐海水的特點(diǎn)，是廣闊灘涂土地的一種指示植物。鹽地堿蓬在改善并利 用鹽堿地、降低土壤鹽分、減少土壤水分蒸發(fā)、促進(jìn)植物抗鹽機(jī)制研宄、提供抗鹽種質(zhì)資源 和抗鹽基因工程等方面有著非常重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種耐鹽基團(tuán)。
[0006] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種耐鹽基團(tuán)編碼的蛋白質(zhì)。
[0007] 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供含一種耐鹽基團(tuán)的重組載體。
[0008] 本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供含一種耐鹽基團(tuán)的宿主細(xì)胞。
[0009] 本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供一種耐鹽基團(tuán)的用途。
[0010] 本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：
[0011] 一種耐鹽基團(tuán)，該耐鹽基因是SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。
[0012] 上述一種耐鹽基團(tuán)編碼的蛋白質(zhì)，是SEQ ID No. 2所示的氨基酸序列。
[0013] 含一種耐鹽基團(tuán)的重組載體。
[0014] 含一種耐鹽基團(tuán)的宿主細(xì)胞，是將上述重組載體導(dǎo)入到農(nóng)桿菌菌株中，得到轉(zhuǎn)化 宿主細(xì)胞。
[0015] 一種耐鹽基團(tuán)增強(qiáng)楊樹或擬南芥耐鹽性能的用途。
[0016] 實(shí)驗(yàn)證明，一種耐鹽基團(tuán)使楊樹或擬南芥耐鹽的功能得到了明顯的提升。
【附圖說明】
[0017] 圖1為一種耐鹽基團(tuán)克隆電泳示意圖。
[0018] 圖2為耐鹽基團(tuán)660bp插入表達(dá)載體pK2GW7(I)后示意圖。
[0019] 圖 3 為 pK2GW7 (I) _S. sa660bp 轉(zhuǎn)化 C58 農(nóng)桿菌后 PCR 結(jié)果。
[0020] 圖4為pK2GW7(I)_S. sa660bp轉(zhuǎn)化擬南芥后，T3純合體半定量PCR測定表達(dá)水平 結(jié)果。
[0021] 圖5為轉(zhuǎn)基因擬南芥T3純合體抗鹽實(shí)驗(yàn)效果照片。其中A為未經(jīng)鹽水處理野生 型擬南芥，B⑶為IOOmM NaCl處理，其中B為野生型擬南芥；C為低表達(dá)量擬南芥；D為高表 達(dá)量擬南芥。
[0022] 圖6為轉(zhuǎn)耐鹽基團(tuán)楊樹半定量PCR測定表達(dá)水平結(jié)果。
[0023] 圖7為轉(zhuǎn)基因楊樹抗鹽實(shí)驗(yàn)效果。其中A為未經(jīng)鹽水處理野生型楊樹，B⑶為 IOOmMNaCl處理，其中B為野生型楊樹；C為低表達(dá)量楊樹；D為高表達(dá)量楊樹。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件以及手冊(cè)中所述的條 件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0025] 下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，本發(fā)明的實(shí)施例是為了使本領(lǐng)域 的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明，但并不對(duì)本發(fā)明作任何限制。
[0026] 實(shí)施例1
[0027] 1. 一種耐鹽基團(tuán)的克?。海}地堿蓬簡稱S. sa)
[0028] 從鹽地堿蓬整株（取自天津市濱海新區(qū)北塘口東海路沿線）中收獲種子，把種子 分別播種于1/2MS和l/2MS+100mmol/LNaCl溶液的培養(yǎng)基中，將五周后分別獲得的兩種植 物幼苗送華大公司進(jìn)行RNA Sequncing，將得到的數(shù)據(jù)序列比對(duì)，通過基因表達(dá)差異倍數(shù)篩 選得到了差異最大的基因序列660bp(SEQ ID No. 1)，見圖1。使用植物RNeasy Plant Mini Kit (Trans gene Code#EP101_01 50rxns)提取總 RNA，并且利用 EasyScript Frist-Strand cDNA SynSgesis SuperMix(Trans gene Code#AE301_03 IOOrxns)反轉(zhuǎn)錄出 cDNA。根據(jù) SEQ ID No. I 設(shè)計(jì)引物 SEQ ID No. 3F :5' -CTGCATGGGCTTGGCTTG-3' 和 SEQ ID No. 4R :
[0029] 5' -GCTCCCAGACATCAATGGTAAG-3'，獲得一種耐鹽基團(tuán)全長cDNA序列，其具體步驟 如下：
[0030] DcDNA第一鏈的合成
[0031] 用反轉(zhuǎn)錄試劑盒TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver. 3.0,以鹽地堿蓬總RNA為模板， Oligo(dT)為引物，在AMV逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA第一鏈，反轉(zhuǎn)錄體系如下：
[0032]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種耐鹽基團(tuán)，其特征是該耐鹽基團(tuán)是SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。
2. 權(quán)利要求1的一種耐鹽基團(tuán)編碼的蛋白質(zhì)，其特征在于所述蛋白質(zhì)是SEQ ID No. 2 所示的氨基酸序列。
3. 含權(quán)利要求1 一種耐鹽基團(tuán)的重組載體。
4. 含一種耐鹽基團(tuán)的宿主細(xì)胞，其特征是將權(quán)利要求3的重組載體導(dǎo)入到農(nóng)桿菌菌株 中，得到轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。
5. -種耐鹽基團(tuán)增強(qiáng)楊樹或擬南芥耐鹽性能的用途。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種耐鹽基團(tuán)及包括該基因的重組載體，耐鹽基團(tuán)，是SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；耐鹽基團(tuán)編碼的蛋白質(zhì)，是SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；含一種耐鹽基團(tuán)的重組載體。實(shí)驗(yàn)證明一種耐鹽基團(tuán)能使楊樹或擬南芥耐鹽的功能得到了明顯的提升。
【IPC分類】A01H5-00, C12N15-29, C12N15-84, C07K14-415
【公開號(hào)】CN104611346
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510084395
【發(fā)明人】王潔華, 王蕊, 魏志蓉, 羅翠, 楊少輝
【申請(qǐng)人】天津大學(xué)
【公開日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2015年2月16日