一種微波輔助提取駱駝蓬生物堿的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種微波輔助提取駱駝蓬生物堿的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 胳蛇蓬（PeganumharmalaL.)為漢薬科（Zygophyllaceae)胳蛇蓬屬（Peganum) 植物，以全草及種子入藥，廣泛分布于亞洲、北非等地。在我國，駱駝蓬主要生長在西北 等地，常作為中藥、維藥和蒙古族藥材，收載于《中華人民共和國藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊(cè)》 (WS3-bw-0080-98, 1999年版）中，具有消腫止痛、通血調(diào)經(jīng)的作用，用于關(guān)節(jié)骨痛、月經(jīng)閉 阻、咳嗽氣喘等癥。目前，以駱駝蓬種子為主要成分的復(fù)方駱駝蓬軟膏已上市應(yīng)用，具有清 瀉局部異常黑膽質(zhì)、粘液質(zhì)，消腫止癢，散氣止痛。用于濕寒所引起的關(guān)節(jié)酸痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎、坐骨神經(jīng)痛、濕瘆，疥癬，疥瘡等。
[0003] 研宄表明：駱駝蓬主要要含有生物堿類、黃酮類化合物等成分，其中生物堿為有效 成分，包括鴨嘴花堿（visicine),駱蛇蓬堿（harmaline)、去氫駱蛇蓬堿（harmine)、鴨嘴花 酮堿、哈兒明堿等，藥理作用十分廣泛，具有平喘、抗菌、抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、止癢殺蟲及對(duì)中 樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和氣管平滑肌等方面的作用。自1841年第一個(gè)從駱駝蓬中生物堿 分離鑒定以來，人們對(duì)其化學(xué)成分和藥理活性開展了廣泛的研宄，早在30年代駱駝蓬堿和 去氫駱駝蓬堿作為單胺氧化酶抑制劑用于帕金森病的治療，70年代我國首次將駱駝蓬堿制 劑用于治療消化道腫瘤的治療，其抗癌作用引起國際上廣泛的重視。同時(shí)，其良好的抗輻 射、殺蟲、抗病毒及抗氧化活性也引起人們的關(guān)注，醫(yī)藥行業(yè)對(duì)駱駝蓬生物堿的需求量越來 越大。
[0004] 目前，人們已采用多種化學(xué)分離方法提取制備駱駝蓬中總生物堿，在中國專利 CN101433565A、CN101491557A、CN1250560C、CN101229203A、CN104107199A及相關(guān)文獻(xiàn)中均 有報(bào)道。但這些方法在提取制備生物堿過程中存在工藝復(fù)雜、有機(jī)溶劑使用量大和對(duì)環(huán)境 污染、且得率較低的問題，不能滿足對(duì)提高生物利用度、充分利用資源、保護(hù)環(huán)境和工業(yè)化 生產(chǎn)的要求。
[0005] 1)乙醇回流提取后，酸液酸化，氨水堿化析出沉淀，得到總生物堿提取物，再經(jīng)硅 膠柱和大孔吸附樹脂等色譜法分離，既得單體化合物（CN101433565A)
[0006]2)用5%的鹽酸浸提，酸液用陽離子交換樹脂交換，用氨水堿化樹脂，再用乙醚、 氯仿或無水乙醇洗脫得到駱駝蓬總生物堿（李春杰，新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1987, 10, 27)?；?qū)?駱駝蓬提取液酸化后，濾過，濾液上陽離子交換樹脂，以水除雜，酸液洗脫后，收集洗脫液， 加堿中和，脫鹽處理后得到駱駝蓬總生物堿（CN101491557A)
[0007] 3)比較了三種提取方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用氯仿氨水混合溶媒沉淀法分離提取駱駝蓬子 中的生物堿（浸膏中總生物堿的回收率6.93% )優(yōu)于陽離子交換樹脂法和氯仿提取法。 (張學(xué)農(nóng)，新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1993, 16, 350)
[0008] 4)用乙醇提取后，氯化汞處理后去氫駱駝蓬堿和駱駝蓬堿以復(fù)合物沉淀下來，然 后用H2S處理得到駱蛇蓬生物堿。（Munir,Fitoterapia, 1995,66, 73)
[0009] 5)用堿性乙醇浸潤后回流提取，經(jīng)堿化游離，甲酸乙酯、乙酸乙酯等回流分離、硅 藻土與活性碳減壓過濾、回收溶劑、烘干、再用醇溶液回流提取。然后用水沉等方法處理后， 得到駱駝蓬總生物堿。（CN1250560C)
[0010] 6)采用二氧化碳超臨界萃取技術(shù)，堿水冷浸除雜后再用酸性醇溶液提取，減壓后 再用鹽酸浸泡，過濾后加氨水堿化，過濾干燥既得駱駝蓬總生物堿。（CN101229203A)
[0011] 7)將駱駝蓬乙醇提取液在旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器中制得紫褐色粗提膏。加鹽酸加熱至溶 解，熱過濾后用氯仿提取兩次；用氫氧化鈉溶液中和母液，析出棕黃色固體。再用鹽酸，加熱 溶解后。通過乙醇加熱等處理，析出結(jié)晶，制得駱駝蓬總堿鹽酸鹽。重結(jié)晶后，得駱駝蓬生 物堿。（CN104107199A)
[0012] 8)采用超聲技術(shù)，在考察最優(yōu)條件后，駱駝蓬總生物堿的得率為2. 043g/50g，即 40.lmg/g。（李越魚昆，西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，14, 110)
[0013] 以上方法在推進(jìn)駱駝蓬生物堿提取技術(shù)時(shí)，也均有不足之處：1)在提取駱駝蓬生 物堿時(shí)雖然工藝簡單，但提取率不高。在分離駱駝蓬生物堿單體時(shí)，采用了硅膠柱及大孔吸 附樹脂等色譜分離法，雖然分離出10個(gè)化合物，但操作復(fù)雜，沒有與現(xiàn)代色譜分離技術(shù)相 融合；2)氯仿等有機(jī)試劑的使用，對(duì)環(huán)境造成污染，且使用陽離子交換樹脂，其再生及與處 理復(fù)雜；3)盡管浸膏中總生物堿的回收率6. 93%，回收率較高。但如果以駱駝蓬種子的重 量計(jì)，則回收率很低。且提取過程使用有毒溶劑氯仿等；4)提取過程使用重金屬，影響總生 物堿的品質(zhì)；5)提取過程復(fù)雜，且有機(jī)試劑用量較大，增加成本；6)使用二氧化碳臨界萃取 脫脂后，提取成本增加，且酸性乙醇提取后不宜過濾；7)使用氯仿等有機(jī)溶劑，對(duì)環(huán)境造成 污染；8)總生物堿提取率較低，僅為40.lmg/g。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明的針對(duì)目前駱駝蓬中生物堿制備方法不足，提取過程有機(jī)溶劑浪費(fèi)和環(huán)境 破壞嚴(yán)重，提供一種高效提取駱駝蓬生物堿的方法。
[0015] 本發(fā)明實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案如下：
[0016] 一種微波輔助提取駱駝蓬生物堿的方法，包括如下步驟
[0017] 1)取駱駝蓬，烘干至恒重，用體積濃度為60~95%乙醇作溶劑，液料比為10~ 50ml/g，微波加熱輔助提取8~12分鐘，提取溫度為60~100°C，過濾得提取液，提取液濃 縮至無醇味，得濃縮液；
[0018] 優(yōu)選的，乙醇濃度為75%，料液比為31ml/g，提取溫度為81°C，提取時(shí)間為10分 鐘；
[0019] 微波功率為400~1000W，優(yōu)選的為600W ;
[0020] 2)將濃縮液上制備型高效液相色譜C18反相硅膠柱，用體積比為70 : 30~96 : 4 的0.lmol/L乙酸銨緩沖鹽溶液和乙腈為洗脫相，以0. 5~1.OmL/min的流速，在20~40°C 溫度范圍內(nèi)，分離制備，通過紫外280nm在線監(jiān)測(cè)，收集特定吸收峰的洗脫液，揮干，即得鴨 嘴花堿（visicine)、駱蛇蓬堿（harmaline)和去氫駱蛇蓬堿（harmine)三種生物堿。
[0021] 優(yōu)選的，洗脫相中乙腈的體積比變化如下：0~15min，4%~8% ;15. 1~30min， 8%~10% ;30. 1 ~80min，10%~30% ;
[0022] 優(yōu)選的，洗脫相的流速為0. 7ml/min。
[0023] 所述的visicine,harmaline和harmine三種生物堿的分子結(jié)構(gòu)式：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種微波輔助提取駱駝蓬生物堿的方法，包括如下步驟 1) 取駱駝蓬，烘干至恒重，用體積濃度為60~95%乙醇作溶劑，液料比為10~50ml/ g，微波加熱輔助提取8~12分鐘，提取溫度為60~100°C，過濾得提取液，提取液濃縮至無 醇味，得濃縮液； 2) 將濃縮液上制備型高效液相色譜C18反相硅膠柱，用體積比為70 : 30~96 : 4的 0. lmol/L乙酸銨緩沖鹽溶液和乙腈為洗脫相，以0. 5~1. 0 mL/min的流速，在20~40°C 溫度范圍內(nèi)，分離制備，通過紫外280nm在線監(jiān)測(cè)，收集特定吸收峰的洗脫液，揮干，即得鴨 嘴花堿、駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿三種生物堿。
2. 如權(quán)利要求1所述微波輔助提取駱駝蓬生物堿的方法，其特征在于，微波功率為 400 ~10001
3. 如權(quán)利要求1所述微波輔助提取駱駝蓬生物堿的方法，其特征在于，步驟（1)中，乙 醇濃度為75%，料液比為31 ml/g，提取溫度為81°C，提取時(shí)間為10分鐘。
4. 如權(quán)利要求1所述微波輔助提取駱駝蓬生物堿的方法，其特征在于，洗脫相中乙腈 的體積比變化如下：〇~15min，4%~8 % ;15. 1~30min，8%~10% ;30. 1~80min，10%~ 30% 〇
5. 如權(quán)利要求1所述微波輔助提取駱駝蓬生物堿的方法，其特征在于，洗脫相的流速 為 0? 7 ml/min〇
6. 如權(quán)利要求1所述微波輔助提取駱駝蓬生物堿的方法，其特征在于，所述駱駝蓬為 種子和/全草。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種微波輔助提取駱駝蓬生物堿的方法，包括如下步驟：取駱駝蓬植物，烘干至恒重，用體積濃度為60～95%乙醇作溶劑，液料比為10～50ml/g，微波加熱輔助提取8～12分鐘，提取溫度為60～100℃，過濾得提取液，提取液濃縮至無醇味，上制備型高效液相色譜C18反相硅膠柱，用體積比為70∶30～96∶4的0.1mol/L乙酸銨緩沖鹽溶液和乙腈為洗脫相，以0.5～1.0mL/min的流速，在20～40℃溫度范圍內(nèi)，分離制備，通過紫外280nm在線監(jiān)測(cè)，收集特定吸收峰的洗脫液，揮干，即得鴨嘴花堿、駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿三種生物堿。方法簡便易行，可控，生物堿的得率高于現(xiàn)有提取方法。
【IPC分類】C07D487-04, C07D471-04
【公開號(hào)】CN104628731
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510039879
【發(fā)明人】尚小飛, 潘虎, 苗小樓, 王東升, 王學(xué)智, 王瑜, 張繼瑜
【申請(qǐng)人】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
【公開日】2015年5月20日
【申請(qǐng)日】2015年1月27日