一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及植物有效成分提取技術(shù)，特別設(shè)及一種從竹葉中制備異荘草素提取物 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 異荘草素（Isoorientin)，亦稱異荘草巧，是荘草素的同分異構(gòu)體，黃色結(jié)晶，分子 式：〔2品。〇11，分子量：448. 38,可溶于甲醇、己醇、異丙醇、正丙醇等有機(jī)溶劑，烙點(diǎn)；230°C~ 232 °C?，F(xiàn)代研究表明，異荘草素對(duì)屯、肌缺血、缺氧有明顯的保護(hù)作用。
[0003] 異荘草素常見(jiàn)的提取來(lái)源為荘草（寥科植物荘寥（Polygonum orientals L.)的 干燥果穂及帶葉莖枝）；我們研究發(fā)現(xiàn)竹葉黃酬中異荘草素含量一般在2% W上，而竹葉黃 酬來(lái)源于竹葉，提取原料安全廉價(jià)，自然資源可W得到更充分的利用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法， 本發(fā)明采用負(fù)壓提取，通過(guò)控制負(fù)壓提取時(shí)的料液比、負(fù)壓條件和溫度條件等，制備得到高 純度的異荘草素提取物。
[0005] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：
[0006] 一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法，包括W下步驟：
[0007] 步驟（1)、原料處理；將竹葉除雜、洗凈；
[000引步驟（2)、負(fù)壓提取；將所述步驟（1)處理的原料放入負(fù)壓容器中，加入提取溶劑， 在所述負(fù)壓容器中浸提1-化后過(guò)濾并收集濾液，濃縮，得本發(fā)明所述的異荘草素提取物；
[0009] 所述負(fù)壓提取的條件為；負(fù)壓為-0. 065Mpa~-0. 075Mpa，溫度30~35°C;所述原 料和提取溶劑按照1:10~1:15 (g/ml)的料液比浸提。
[0010] 優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述步驟（1)中，所述原料洗凈后，還進(jìn)行W下處理；將洗凈 后的竹葉干燥后粉碎過(guò)20-60目篩。
[OCm] 優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述步驟（2)中，所述提取溶劑為去離子水、或者PH值為 1. 0-3. 0、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65-85%的己醇溶液。
[0012] 優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述步驟（2)中，所述負(fù)壓提取的條件為；負(fù)壓為-0. 065Mpa， 溫度35°C ;所述提取溶劑為所述己醇溶液為PH值為2. 0、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65 %的己醇溶液；所 述原料和提取溶劑按照1:10 (g/ml)的料液比浸提。
[0013] 優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述步驟（2)中，所述濃縮的程度為：濃縮至比重10~15,采 用波美計(jì)測(cè)量。
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0015] (1)本發(fā)明采用負(fù)壓提取，通過(guò)控制負(fù)壓提取時(shí)的料液比、負(fù)壓條件和溫度條件等 因素，制備得到高純度的異荘草素提取物。本發(fā)明制備的異荘草素提取物中，異荘草素純度 高達(dá)8%~10%。所述純度是指在異荘草素提取物中異荘草素的質(zhì)量含量。
[0016] (2)本發(fā)明方法相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，提取溫度更低，可w低至30°c，可w確保提取過(guò) 程中異荘草素活性成分不被破壞。
【具體實(shí)施方式】
[0017] W下通過(guò)具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[001引 實(shí)施例1 :
[0019] 一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法，包括W下步驟：
[0020] 步驟（1)、原料處理；將竹葉除去雜物、洗凈；
[002U 步驟（2)、負(fù)壓提??；將所述步驟（1)處理的竹葉放入負(fù)壓容器中，加入PH值為 2.0、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65%的己醇溶液（所述竹葉和己醇溶液按照l(shuí):10(g/ml)的料液比浸提， 即按照Ig竹葉添加10ml己醇溶液的比例）；在負(fù)壓容器中浸提化后過(guò)濾并收集濾液，濃 縮至比重10 (波美計(jì)測(cè)量），得本發(fā)明所述的異荘草素提取物。所述負(fù)壓提取的條件為；負(fù) 壓-0. 065Mpa，溫度 35°C。
[0022] 經(jīng)HPLC測(cè)定，最終異荘草素提取物中，異荘草素的純度為8. 3%。
[0023] 實(shí)施例2 ;
[0024] 一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法，包括W下步驟：
[002引步驟（1)、原料處理；將竹葉除去雜物、洗凈；干燥后粉碎過(guò)50目篩，得到竹葉粉；
[0026] 步驟（2)、負(fù)壓提?。幌蛩霾襟E（1)的竹葉粉中加入PH值為2.0、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 70%的己醇溶液（所述竹葉粉和己醇溶液按照l(shuí):10(g/ml)的料液比浸提，即按照Ig竹葉 粉添加10ml己醇溶液的比例）；在負(fù)壓容器中浸提1.化后過(guò)濾并收集濾液，濃縮，得本發(fā) 明所述的異荘草素提取物。所述負(fù)壓提取的條件為；負(fù)壓-0. 〇65Mpa，溫度30°C。
[0027] 經(jīng)HPLC測(cè)定，最終異荘草素提取物中，異荘草素的純度為11.8%。
[002引實(shí)施例3 ;
[0029] 一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法，包括W下步驟：
[0030] 步驟（1)、原料處理；將竹葉除去雜物、洗凈；
[003U 步驟（2)、負(fù)壓提?。合蛩霾襟E（1)的竹葉粉中加入PH值為2.0、質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為75%的己醇溶液（所述竹葉和己醇溶液按照l(shuí):12(g/ml)的料液比浸提，即按照Ig竹 葉添加12ml己醇溶液的比例）；在負(fù)壓容器中浸提1.化后過(guò)濾并收集濾液，濃縮濃縮至 比重10 (波美計(jì)測(cè)量），得本發(fā)明所述的異荘草素提取物。所述負(fù)壓提取的條件為；負(fù) 壓-0. 075Mpa，溫度 30°C。
[0032] 經(jīng)HPLC測(cè)定，最終異荘草素提取物中，異荘草素的純度為8. 5%。
[0033] 實(shí)施例4 ;
[0034] 一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法，包括W下步驟：
[003引步驟（1)、原料處理；將竹葉除去雜物、洗凈；干燥后粉碎過(guò)20目篩，得到竹葉粉；
[0036] 步驟（2)、負(fù)壓提?。幌蛩霾襟E（1)的竹葉粉中加入去離子水（所述竹葉粉和去 離子水按照l(shuí):15(g/ml)的料液比浸提，即按照Ig竹葉粉添加15ml去離子水的比例）；在 負(fù)壓容器中浸提1.化后過(guò)濾并收集濾液，濃縮，得本發(fā)明所述的異荘草素提取物。所述負(fù) 壓提取的條件為；負(fù)壓-0. 〇65Mpa，溫度30°C。
[0037] 經(jīng)HPLC測(cè)定，最終異荘草素提取物中，異荘草素的純度為8. 6%。
[003引實(shí)施例5嗜酸粒細(xì)胞性細(xì)胞調(diào)亡誘導(dǎo)試驗(yàn)和MBP激酶活性實(shí)驗(yàn)
[0039] 嗜酸粒細(xì)胞性細(xì)胞調(diào)亡誘導(dǎo)試驗(yàn)：試驗(yàn)根據(jù)Vermes等的方法（Journal of Immunological Methods 184卷39-51頁(yè)1995年）進(jìn)行。使嗜酸粒細(xì)胞性細(xì)胞HL-60細(xì) 胞懸浮于RPMI1640培養(yǎng)基中，細(xì)胞濃度為1-3 X 1〇6細(xì)胞/ml。向該細(xì)胞懸浮液500 y 1中 添加被檢測(cè)物質(zhì)（上述實(shí)施例1-4中最后收集得到的異荘草素提取物）或培養(yǎng)基，使異荘 草素提取物在細(xì)胞懸浮液中的濃度為100 y g/ml，在37°C、5% Ch的條件下培養(yǎng)6小時(shí)或 24小時(shí)。離屯、洗凈后，加入磯脂獻(xiàn)結(jié)合蛋白（Annexin)V緩沖液，然后添加5ul磯脂獻(xiàn)結(jié)合 蛋白V-門TC。通過(guò)流動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)法，W磯脂獻(xiàn)結(jié)合蛋白V陽(yáng)性細(xì)胞作為細(xì)胞調(diào)亡誘導(dǎo)細(xì) 胞，用相對(duì)總細(xì)胞數(shù)的百分比評(píng)價(jià)。
[0040] MBP激酶活性試驗(yàn)：試驗(yàn)根據(jù)De Souza等的方法炬lood 99卷3432-3438頁(yè)2002 年）進(jìn)行。將嗜酸粒細(xì)胞性細(xì)胞化-60細(xì)胞懸浮于RPMI1640培養(yǎng)基，細(xì)胞濃度為1-3X1Q6 細(xì)胞/ml。該細(xì)胞懸浮液500 y 1中添加被檢測(cè)物質(zhì)或培養(yǎng)基，使?jié)舛葹?00 y g/ml，在37°C、 5% 0)2的條件下培養(yǎng)6小時(shí)或24小時(shí)。離屯、洗凈后，添加可溶解緩沖液，溶解細(xì)胞，使用含 有MBP 5mg/ml的凝膠進(jìn)行電泳。凝膠經(jīng)脫變性、再變性處理后，用32P-ATP標(biāo)記，實(shí)施3小 時(shí)的磯酸化反應(yīng)。凝膠干燥后，使用圖象分析儀解析放射活性。在36kDa生長(zhǎng)出標(biāo)記帶時(shí)， 記做MBP激酶活化陽(yáng)性（+)。
[0041] 異荘草素提取物在化-60細(xì)胞中觀察到了濃度依賴性的細(xì)胞調(diào)亡誘導(dǎo)。另外進(jìn)行 凝膠MBP激酶分析（In-gel MBP kinase assay)時(shí)，異荘草素提取物激活36kDa MBP激酶。 W上結(jié)果提示。異荘草素提取物對(duì)嗜酸粒細(xì)胞能誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡，該細(xì)胞調(diào)亡與36kDa MBP 激酶有關(guān)。由此推斷本發(fā)明異荘草素提取物中含有可W用于抗嗜酸粒細(xì)胞性炎癥作用藥物 的成分。
[0042] 所得結(jié)果如下表1所示：
[0043] 確認(rèn)實(shí)施例2具有強(qiáng)的細(xì)胞調(diào)亡誘導(dǎo)活性，并伴有MBP激酶的活化。
[0044] 表 1
[0045]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟（1)、原料處理：將竹葉除雜、洗凈； 步驟（2)、負(fù)壓提取：將所述步驟（1)處理的原料放入負(fù)壓容器中，加入提取溶劑，在所 述負(fù)壓容器中浸提1-2h后過(guò)濾并收集濾液，濃縮，得本發(fā)明所述的異葒草素提取物； 所述負(fù)壓提取的條件為：負(fù)壓為-〇. 〇65Mpa~-0. 075Mpa，溫度30~35°C;所述原料和 提取溶劑按照1:10~1:15(g/ml)的料液比浸提。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法，其特征在于，所述 步驟（1)中，所述原料除雜后，還進(jìn)行以下處理：將洗凈后的竹葉干燥后粉碎過(guò)20-60目篩。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法，其特征在于，所述 步驟（2)中，所述提取溶劑為去離子水、或者PH值為1.0-3. 0、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65-85%的乙醇 溶液。
4. 如權(quán)利要求1所述的一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法，其特征在于，所述 步驟⑵中， 所述負(fù)壓提取的條件為：負(fù)壓為-〇. 〇65Mpa，溫度35°C ; 所述提取溶劑為所述乙醇溶液為PH值為2. 0、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65%的乙醇溶液； 所述原料和提取溶劑按照1:10(g/ml)的料液比浸提。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟(1)、原料處理：將竹葉除雜、洗凈；步驟(2)、負(fù)壓提?。簩⑺霾襟E(1)處理的原料放入負(fù)壓容器中，加入提取溶劑，在所述負(fù)壓容器中浸提1-2h后過(guò)濾并收集濾液，濃縮，得本發(fā)明所述的異葒草素提取物；所述負(fù)壓提取的條件為：負(fù)壓為-0.065Mpa～-0.075Mpa，溫度30～35℃；所述原料和提取溶劑按照1:10～1:15(g/ml)的料液比浸提。本發(fā)明采用負(fù)壓提取，通過(guò)控制負(fù)壓提取時(shí)的料液比、負(fù)壓條件和溫度條件等因素，制備得到高純度的異葒草素提取物。
【IPC分類】C07D407-04
【公開號(hào)】CN104650052
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510078150
【發(fā)明人】季進(jìn)軍
【申請(qǐng)人】寧波杰順生物科技有限公司
【公開日】2015年5月27日
【申請(qǐng)日】2015年2月13日