三叉黑頂藻中分離的能治療糖尿病的活性肽及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及的是生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從三叉黑頂藻中分離得到的治療糖尿病 的活性肽。
【背景技術(shù)】
[0002] 非胰島素依賴性糖尿?。∟IDDM或II型糖尿?。┦蔷用绹谒奈粚е滤劳龅脑?因，在全世界有5-7%的人口受它的困擾，并且在西方國家中它的影響日漸嚴重?；继悄?病時，或者身體不能產(chǎn)生足夠的胰島素，或者產(chǎn)生的胰島素無效，導致血液中葡萄糖水平升 高，這種疾病醫(yī)學上稱為高血糖癥。盡管任何年齡的人都有可能患糖尿病，但多數(shù)糖尿病患 者的年齡超過45歲。此病似乎有家族性，并且體重超標的個體發(fā)病的危險率增加。
[0003] 糖尿病是一種慢性病，無法根治并且伴發(fā)其它幾種疾患。它是導致25-74歲年齡 段人失明的主要原因。10%的糖尿病患者并發(fā)腎病。糖尿病是導致非創(chuàng)傷性下肢切除最常 見的原因。糖尿病患者腿切除的危險率增加30倍。糖尿病患者并發(fā)心臟疾病的危險率增 加 2-4倍，并且中風的可能性增加5倍。
[0004] 導致糖尿病的原因還不清楚，遺傳因素和環(huán)境因素似乎均起作用。有兩種糖尿?。?胰島素依賴性（I型）和非胰島素依賴性（II型）。I型糖尿病是自身免疫疾病，常發(fā)生于 兒童和青年。導致I型糖尿病的自身抗原還不知道，患者的存活依賴每日靜脈注射胰島素。
[0005]II型糖尿病是由于機體不能產(chǎn)生足夠量的胰島素或者雖然能產(chǎn)生胰島素但是不 能恰當?shù)厥褂脧亩鴮е碌男玛惔x疾病，它被認為是最常見的糖尿病類型。盡管知道缺乏 胰島素的分泌和對胰島素的抗性是導致II型糖尿病的主要原因，但是其中的精確的遺傳 因素目前還不清楚。糖尿病患者通常有下列一種或幾種缺陷。它們是：胰臟產(chǎn)生的胰島 素過少；肝臟分泌的葡萄糖過量；骨骼肌利用葡萄糖功能障礙；葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白（Glut-1， Glut-2)功能障礙；胰島素受體失敏和多糖代謝分解功能障礙。
[0006] 叉狀黑頂藻（拉丁名字：SphacelariafurcigeraKuetz.)為褐藻門黑頂藻目黑 頂藻科黑頂藻屬其中的一種海水藻類植物。生長在中潮帶的巖石上或其他藻體上。6-8月 為其生長盛期。我國東南沿海均有分布。申請人通過研究叉狀黑頂藻發(fā)現(xiàn)，該藻類通過小 鼠喂食實驗，發(fā)現(xiàn)，該藻類具有較好的降低血糖的效果。為了進一步的研究究竟是什么物質(zhì) 起到降糖的作用，申請人通過提取實驗發(fā)現(xiàn)了一系列的小肽具有較好的降血糖的效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 一方面本發(fā)明涉及一類降血糖多肽。其結(jié)構(gòu)具有以下形式： SCHDZ-01：KTNMKHMAGAAAAGAVVG SCHDZ-05：PSQATVVCCSRVLLSSRGSSGSSRVIIL SCHDZ-06:GSSPSSRAPPPSQTLPPAIILPSRTVCDQQPS SCHDZ-13：AKEEFFIVLDCPPSGSSRVPQAAR SCHDZ-15：IILVHIHSGHHPATVHSG SCHDZ-17:HGFSRQPTHAEHSSCDV SCHDZ-20：EMHGSGSNGRPPSLDAPPI SCHDZ-23：EEEGGSDCVFNHMMEWQTA SCHDZ-25：SSEPRVDCVGSPPQVVLLLLP SCHDZ-28：PDCVQEWSSEEDDGSSNP SCHDZ-31：DDCCVVFGNMPLSPG SCHDZ-35：PDDESPLVPFAKGSSRVL 另一方面，本發(fā)明提供一種分離所述多肽的方法，將叉狀黑頂藻先用PBS緩沖液清洗， 然后用20mmol/LHC1溶液勻漿制備成粗制液；（2)將步驟（1)所得粗制液用8000轉(zhuǎn)/分 鐘離心15分鐘，收集上清液，將上清液用三層紗布過濾，用葡聚糖G-50(S印hadexG-50) (1. 5cmX90cm)分離，30mmol/LHC1溶液洗脫，流速1.OmL/分鐘，收集洗脫產(chǎn)物，調(diào)節(jié)溶液 至pH6. 0~7. 0,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，上清液冷凍干燥備用；經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚 丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE)，回收小分子量的條帶，經(jīng)過驗證，獲得了 40個小的多肽，經(jīng) 過試驗證實了其中有11個具有較好的生物學活性。
[0008] 另一方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，所述的組合物含有如上所述的胰高血糖 素樣肽-1突變體多肽。
[0009] 如上所述的藥物組合物，其還含有還包含一種或多種藥學上可接受的載體；優(yōu) 選地，所述藥學上可接受的載體選自：水溶性填充劑、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、注射用水和滲透 壓調(diào)節(jié)劑； 更優(yōu)選地，所述水溶性填充劑選自以下的一種或幾種：甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨 醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖和半乳糖； 更優(yōu)選地，所述pH調(diào)節(jié)劑為生理可接受的酸、堿和/或鹽，優(yōu)選選自以下的一種或幾 種： 非揮發(fā)性酸如枸櫞酸、磷酸、乳酸、酒石酸或鹽酸，堿如氫氧化鉀、氫氧化鈉或氫氧化鉀 或氫氧化銨，鹽如碳酸鈉或碳酸鉀或碳酸銨鹽，碳酸氫鈉或碳酸氫鉀或碳酸氫銨鹽； 更優(yōu)選地，所述穩(wěn)定劑為選自以下的一種或幾種：EDTA-2Na、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸 鈉、亞硫酸鈉、磷酸氫二鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇 4000、十二烷基硫酸鈉或三羥甲基氨基甲烷等，進一步優(yōu)選自：焦亞硫酸鈉、磷酸氫二鉀、 精氨酸、聚乙二醇6000、三羥甲基氨基甲烷中的一種或幾種； 更優(yōu)選地，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑選自氯化鈉和/或氯化鉀。
[0010] 本發(fā)明再一方面還提供上述多肽在制備治療糖尿病的藥物中的應用。
[0011] 并且，所述藥物組合物優(yōu)選為注射劑，更優(yōu)選地為凍干粉針或溶液注射劑。
[0012] 本發(fā)明的又一方面還提供一種藥物組合物，包含上述所述的突變體多肽。
[0013] 優(yōu)選地，還包含可接受的輔料成分。
[0014] 發(fā)明的優(yōu)點在于： 提供了一系列多肽能夠提高降糖活性，同時具有較好的穩(wěn)定性。
【具體實施方式】
[0015] 實施例1多肽的分離 將叉狀黑頂藻先用PBS緩沖液清洗，然后用20mmol/LHC1溶液勻漿制備成粗制液；（2) 將步驟（1)所得粗制液用8000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，收集上清液，將上清液用三層紗布 過濾，用葡聚糖G_50(SephadexG-50)(1.5cmX90cm)分離，30mmol/LHC1 溶液洗脫，流速 1.OmL/分鐘，收集洗脫產(chǎn)物，調(diào)節(jié)溶液至pH6. 0~7. 0,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，上清液 冷凍干燥備用；經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE)，回收小分子量的條 帶，經(jīng)過驗證，獲得了 40個小的多肽，經(jīng)過試驗證實了其中有11個具有較好的生物學活性。
[0016] 實施例2多肽對正常小鼠血糖的影響 小鼠隨機分為12組，每組10只.禁食過夜后，正常對照組皮下注射蒸餾水0. 2mL，其余11組小鼠分別皮下注射樣品多肽各0. 2mL，最后1組口腔灌胃樣品1 0. 2 mL. 2h后尾部取血，測rfn糖侑.結(jié)里見衷1 :
【主權(quán)項】
1. 一種降血糖多肽，其特征在于：來源于叉狀黑頂藻。
2. 如權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于：其序列如SEQ ID NO :1-12任一項所示。
3. 降低患有高血糖疾病的哺乳動物宿主內(nèi)血糖水平的方法，所述方法包括給該宿主口 服含有權(quán)利要求1所示的多肽的藥物組合物。
4. 含有于生理學上可接受載體的權(quán)利要求1-2任一項所述的肽、它們的類似物或模擬 物或者其混合物的藥物組合物。
5. 權(quán)利要求1-2任一項所述的多肽在制備用于降低血糖的藥物組合物中的用途。
6. 按照權(quán)利要求5的用途，其中的施用是口服或者靜脈內(nèi)注射給藥。
7. 按照權(quán)利要求5的用途，其中藥物針對的疾病為高血糖疾病。
8. 按照權(quán)利要求7的用途，其中所述的高血糖疾病是糖尿病。
9. 按照權(quán)利要求8的用途，其中所述的糖尿病是I型糖尿病或II型糖尿病。
【專利摘要】本發(fā)明提供了三叉黑頂藻的多肽、它的制備方法及在治療高血糖癥中的使用方法。所述多肽有降血糖作用,口服給藥后也有這種活性。同時提供的還有利用這些活性藥物治療高血糖疾病的方法,尤其是糖尿病,其中優(yōu)選口服給予這些活性藥物。
【IPC分類】A61K38-16, A61P3-10, C07K14-405, C07K7-08, A61K38-10
【公開號】CN104650198
【申請?zhí)枴緾N201510066244
【發(fā)明人】馬海龍
【申請人】馬海龍
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年2月9日