一種peg化伊立替康的軛合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種PEG化伊立替康的軛合前體藥物，特別的涉及一種PEG化伊立替 康的軛合物的制備方法及其初步的抗腫瘤活性研究。
【背景技術(shù)】
[0002] 伊立替康是一種喜樹堿類衍生物，屬于細(xì)胞毒性抗腫瘤藥，具有廣譜的抗腫瘤作 用，對(duì)小細(xì)胞性肺癌、非小細(xì)胞性肺癌、子宮頸癌、結(jié)腸癌、卵巢癌等有一定療效，它是通過(guò) 抑制細(xì)胞存活必需的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topo I)阻礙單鏈DNA的再連接而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞毒性作 用的。其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下式：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種PEG化伊立替康的軛合物，其特征在于，所述化合物分子結(jié)構(gòu)如下：
其中L是雙功能連接基。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于L是氨基酸。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于所述的氨基酸選自L-氨基酸。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于L為甘氨酸，丙氨酸，賴氨酸，苯丙氨酸， 異亮氨酸，脯氨酸，纈氨酸，組氨酸，亮氨酸，色氨酸，蘇氨酸或蛋氨酸中的一種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種PEG化伊立替康軛合物的制備方法，其特征在于所述化 學(xué)修飾劑以兩親性的PEG為載體，采用丁二酸酐對(duì)PEG的端羥基進(jìn)行活化，得到羧基化的聚 乙二醇，用活性酯（NHS)對(duì)其活化后再與氨基酸連接制得。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種PEG化伊立替康軛合物的制備方法，其特征在于 PEG-二酸的制備方法按照以下步驟進(jìn)行： ① 將丁二酸酐加到三氯甲烷中，加熱至65°C使溶解； ② 將PEG溶解于三氯甲烷后滴加到上述溶液中，加入吡啶后，65°C下回流反應(yīng)； ③ 反應(yīng)完畢后，旋干溶劑，殘余物中加飽和NaHCO3溶液，抽濾，濾液用HCl酸化，將pH調(diào) 到 4. 0±L 0 ; ④ 氯仿萃取，飽和NaCl洗滌，無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后加到大量無(wú)水乙醚中， 過(guò)濾，干燥至恒重即得PEG - DA。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的PEG-二酸的制備方法，其特征在于PEG與丁二酸酐的摩爾 比為1:1~1:40，優(yōu)選1:6~1:20，反應(yīng)時(shí)間為2~56 11，優(yōu)選4~24 11。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5~6所述的一種PEG化伊立替康的軛合物制備方法，其特征在于由 PEG的羧酸衍生物與氨基酸連接制備的所述的化學(xué)修飾劑的方法按照以下步驟進(jìn)行： ① PEG-二酸一活性酯的合成 PEG-二酸溶于二氯甲烷中后冰浴至0~5°C，N-羥基丁二酰亞胺（NHS)溶于N，N-二甲 基甲酰胺中后滴加到上述溶液中；Ν，Ν' -二環(huán)己基碳酰亞胺（DCC)溶解于二氯甲烷中，再滴 到反應(yīng)液中。冰浴條件下反應(yīng)后置于室溫下反應(yīng)。反應(yīng)完成后，過(guò)濾除去白色沉淀，濾液用 飽和NaCl洗滌，無(wú)水Na 2SO4干燥，過(guò)濾，濾液旋干后加二氯甲烷攪拌溶解，再過(guò)濾，濾液再濃 縮后加到大量無(wú)水乙醚中，析出白色骨狀沉淀PEG -DA一NHS0 ② PEG-二酸一氨基酸的合成 將PEG-二酸一活性酯溶于DMF中，氨基酸溶于飽和NaHCO3*，然后將氨基酸體系滴加 到PEG-二酸一活性酯體系中，室溫下攪拌反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加 I mol · L η HCl至pH為 4±0. 5，用二氯甲烷萃取，飽和NaCl洗滌，無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后加到乙醚中， 置于-20°C下析出白色固體PEG - DA - AA。
9. 根據(jù)權(quán)利要求5-8所述的一種PEG化伊立替康的軛合物制備方法，其特征在于PEG 化伊立替康的制備方法是將PEG化學(xué)修飾劑與伊立替康通過(guò)酯鍵相連，制備PEG化的伊立 替康，按照以下步驟進(jìn)行： ① PEG-二酸一氨基酸溶于二氯甲烷中后冰浴至1°C ; ② 伊立替康溶于二氯甲烷中，再滴加到上述溶液中，加入DMAP、DCC，并于冰浴條件下反 應(yīng)一段時(shí)間后再于室溫反應(yīng)； ③ 反應(yīng)終止后，用0. 06 mol · L ^1HCl洗滌反應(yīng)液8次至HCl相無(wú)黃色出現(xiàn)，二氯甲烷 相用無(wú)水Na2SO 4干燥，過(guò)濾，濾液旋干得黃色黏狀物，加異丙醇，30°C下攪拌溶解，-20°C下 靜置一段時(shí)間后得淡黃色固體PEG - DA - AA - CPT-11。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種PEG化伊立替康軛合物的制備方法，其特征在于步驟① 中PEG-DA與NHS的摩爾比為l:l~l:40，優(yōu)選l:6~l:20，反應(yīng)時(shí)間為2~56h，優(yōu)選8~24h， 步驟②中PEG-DA-NHS與氨基酸的摩爾比為1 :1~1:40，優(yōu)選1:4~1:20，反應(yīng)時(shí)間為2~56 h，優(yōu)選 8~24 h。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種PEG化伊立替康軛合物的制備方法，其特征在于PEG- DA-AA與CPT-Il的摩爾比為優(yōu)選1:6~1:20,反應(yīng)時(shí)間為2~56 h，優(yōu)選8~24 h。
12. 根據(jù)權(quán)利要求5~9所述的一種PEG化伊立替康軛合物的制備方法，其特征在于PEG 使用前應(yīng)通過(guò)真空干燥而除水。
13. 根據(jù)權(quán)利要求5-9所述的一種PEG化伊立替康軛合物的制備方法，其特征在于所述 的PEG修飾劑的分子量為2 000~20 000,優(yōu)選2 000~10 000。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種PEG化伊立替康的軛合物，化學(xué)分子式如（1）。公開了制備軛合物的方法和藥學(xué)性質(zhì)研究，包括體外釋放實(shí)驗(yàn)及MTT實(shí)驗(yàn)。采用丁二酸酐使聚乙二醇的端羥基羧基化，活性酯（NHS）對(duì)其活化后再以氨基酸為連接臂將其與伊立替康連接，得PEG化伊立替康。經(jīng)過(guò)PEG修飾后的伊立替康增強(qiáng)了藥物的水溶性，降低了藥物毒副作用，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了體外緩釋效應(yīng)。
【IPC分類】A61P35-00, C08G65-48, A61K47-48, A61K31-4745
【公開號(hào)】CN104650344
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410553120
【發(fā)明人】高子彬, 齊獻(xiàn)利, 張麗男, 戴甜, 谷艷玲, 張曉博, 孫勇軍, 吳韶梅, 謝英花, 劉磊
【申請(qǐng)人】河北科技大學(xué)
【公開日】2015年5月27日
【申請(qǐng)日】2014年10月20日