核酸提取用設(shè)備的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及核酸提取用設(shè)備。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，由于基因利用技術(shù)的發(fā)展，基因診斷、基因治療等利用了基因的醫(yī)療備受 注目。另外，在農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)領(lǐng)域也開發(fā)了很多使用基因來鑒別品種、改良品種的方法。作 為用于利用基因的技術(shù)，PCR (Polymerase Chain Reaction:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）等技術(shù)廣泛 普及。如今，PCR在生物體的信息解析中成為必不可少的技術(shù)。PCR是通過對(duì)含有作為擴(kuò)增 對(duì)象的核酸（靶核酸）和試劑的溶液（反應(yīng)液）實(shí)施熱循環(huán)而使靶核酸擴(kuò)增的方法。作為 PCR的熱循環(huán)，普遍的是以2個(gè)梯度或3個(gè)梯度的溫度實(shí)施熱循環(huán)的方法。
[0003] 另一方面，醫(yī)療領(lǐng)域中以流行性感冒為代表的感染癥的診斷目前主要使用免疫層 析等的簡(jiǎn)易檢查試劑盒。但是，對(duì)于這樣的簡(jiǎn)易檢查而言，有時(shí)精度不夠，希望將能夠期待 更高的檢查精度的PCR應(yīng)用于感染癥的診斷。另外，醫(yī)療機(jī)構(gòu)的普通門診患者等由于診察 的時(shí)間受限的關(guān)系，所以檢查所花費(fèi)的時(shí)間被限制在短時(shí)間內(nèi)。因此，例如流行性感冒的檢 查的現(xiàn)狀是犧牲檢查的精度，利用簡(jiǎn)易的免疫層析等的檢查而短時(shí)間地進(jìn)行。
[0004] 鑒于上述情況，醫(yī)療領(lǐng)域中，為了實(shí)現(xiàn)利用能夠期待更高精度的PCR進(jìn)行的檢查， 必須縮短反應(yīng)所需的時(shí)間。作為用于短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行PCR的反應(yīng)的裝置，例如專利文獻(xiàn)1中， 公開了一種生物體試樣反應(yīng)裝置，其通過使填充有反應(yīng)液和不與反應(yīng)液混合且比重比反應(yīng) 液小的液體的生物體試樣反應(yīng)用芯片在水平方向的旋轉(zhuǎn)軸的周圍旋轉(zhuǎn)，從而使反應(yīng)液移動(dòng) 而實(shí)施熱循環(huán)（專利文獻(xiàn)1)。另外，作為PCR的一個(gè)方法，已公開利用了磁性珠的方法（專 利文獻(xiàn)2)、使用磁性珠作為液滴的移動(dòng)機(jī)構(gòu)，通過使基板上的在溫度變化區(qū)域的液滴移動(dòng) 而進(jìn)行PCR熱循環(huán)的方法（專利文獻(xiàn)3)等。
[0005] 專利文獻(xiàn)
[0006] 專利文獻(xiàn)1 :日本特開2009 - 136250號(hào)公報(bào)
[0007] 專利文獻(xiàn)2 :日本特開2009 - 207459號(hào)公報(bào)
[0008] 專利文獻(xiàn)3 :日本特開2008 - 012490號(hào)公報(bào)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供能夠縮短用于核酸擴(kuò)增的核酸的分離所需的時(shí)間且保存 性好的核酸提取用設(shè)備。
[0010] 本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是一種核酸提取用設(shè)備，具有管部，該管部具有長(zhǎng)邊方向， 在內(nèi)部依次配置有由蠟或油構(gòu)成的第1塞子、由第1清洗液構(gòu)成的第2塞子、由蠟構(gòu)成的第 3塞子、由溶出液構(gòu)成的第4塞子以及由蠟或油構(gòu)成的第5塞子。在第3塞子與第4塞子 之間，從第3塞子側(cè)可以進(jìn)一步具有由第2清洗液構(gòu)成的第6塞子、由蠟或油構(gòu)成的第7塞 子。上述蠟可以為固體石蠟，上述蠟的熔點(diǎn)可以為41°C以上。在此，優(yōu)選第7塞子為蠟。另 外，優(yōu)選第1塞子和第5塞子為蠟。上述管部的第5塞子側(cè)的端部可以開放，這種情況下， 可以進(jìn)一步具有密封上述管部的第5塞子側(cè)的端部的可自由拆卸的栓。
[0011] 在一個(gè)實(shí)施方式中，在上述管部的第1塞子側(cè)的端部可以進(jìn)一步具有可自由拆卸 的容器，上述容器的內(nèi)部可以與上述管部的內(nèi)部連通。上述容器可以具有撓性，通過使上述 容器在與上述管部連接的狀態(tài)下變形，能夠?qū)ι鲜龉懿康膬?nèi)部加壓。
[0012] 另外，在一個(gè)實(shí)施方式中，在上述管部的第1塞子側(cè)的端部可以具有儲(chǔ)液部，可以 進(jìn)一步具有密封上述儲(chǔ)液部側(cè)的端部的可自由拆卸的栓。上述儲(chǔ)液部可以具有撓性，通過 使上述儲(chǔ)液部在用上述栓密封上述儲(chǔ)液部的狀態(tài)下變形，能夠?qū)ι鲜龉懿康膬?nèi)部加壓。
[0013] 上述任一核酸提取用設(shè)備中，上述溶出液可以含有選自逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTP和逆轉(zhuǎn)錄 用引物中的至少1個(gè)。而且，優(yōu)選上述溶出液的體積為0. 5 y L~3. 0 y L，優(yōu)選上述管部的 內(nèi)徑為〇? 5謹(jǐn)~3. Ctam〇
【附圖說明】
[0014] 圖1是示意性地表示實(shí)施方式涉及的核酸提取用設(shè)備的主要部位的圖。
[0015] 圖2是示意性地表示實(shí)施方式涉及的核酸提取用設(shè)備的主要部位的圖。
[0016] 圖3是示意性地表示實(shí)施方式涉及的核酸提取用設(shè)備的主要部位的圖。
[0017] 圖4是示意性地表示實(shí)施方式涉及的核酸提取用設(shè)備的圖。
[0018] 圖5是示意性地表示實(shí)施方式涉及的核酸提取用設(shè)備的圖。
[0019] 圖6是示意性地表示實(shí)施方式涉及的核酸提取用設(shè)備的主要部位的圖。
[0020] 圖7是示意性地表示實(shí)施方式的核酸提取用試劑盒的一個(gè)例子的圖。
[0021] 圖8是示意性地表示實(shí)施方式的核酸提取用試劑盒的一個(gè)例子的圖。
[0022] 圖9是用于說明實(shí)施方式的核酸提取方法的變型例的示意圖。
[0023] 圖10是示意性地表示實(shí)施方式的管的變型例的圖。
[0024] 圖11是表示實(shí)施方式涉及的核酸提取用裝置的一個(gè)例子的立體圖。
[0025] 圖12是表示實(shí)施方式涉及的核酸提取用裝置的一個(gè)例子的立體圖。
[0026] 圖13是表不在實(shí)施例1中硅油和固體石賭的保存1周后的結(jié)果的圖表。
[0027] 圖14是表示在實(shí)施例1中礦物油的保存1周后的結(jié)果的圖表。
[0028] 圖15是表不在實(shí)施例1中固體石賭的保存2周后的結(jié)果的圖表。
[0029] 圖16是表不在實(shí)施例1中固體石賭的保存6周后的結(jié)果的圖表。
[0030] 圖17A是示意性地表示實(shí)施例2中使用的（A)核酸提取用設(shè)備的一個(gè)例子的圖。
[0031] 圖17B是示意性地表示實(shí)施例2中使用的（B)核酸提取用裝置的一個(gè)例子的圖。
[0032] 圖18是表示在實(shí)施例2中使用本發(fā)明涉及的核酸提取用設(shè)備進(jìn)行RT - PCR的結(jié) 果的圖表。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 以下對(duì)本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施方式進(jìn)行說明。以下說明的實(shí)施方式說明本發(fā)明的例 子。本發(fā)明完全不限于以下的實(shí)施方式，還包括在不變更本發(fā)明主旨的范圍內(nèi)實(shí)施的各種 變型方式。應(yīng)予說明，以下說明的構(gòu)成不一定全部是本發(fā)明的必要構(gòu)成要素。
[0034]1.核酸提取用設(shè)備
[0035] 本實(shí)施方式的核酸提取用設(shè)備1000具有管部100、第1塞子10、第2塞子20、第3 塞子30、第4塞子40以及第5塞子50。
[0036] 圖1是示意性地表示本實(shí)施方式的核酸提取用設(shè)備1000的主要部位的圖。
[0037] L L 管部
[0038] 管部100構(gòu)成核酸提取用設(shè)備1000的主要部位。核酸提取用設(shè)備1000除包括管 部100之外，還包括各種構(gòu)成。雖未圖示，但核酸提取用設(shè)備1000例如可以包括與管部100 連接的配管、容器、栓、接頭、泵、控制裝置等。
[0039] 管部100是在內(nèi)部具有空洞且能夠使液體在該空洞內(nèi)沿長(zhǎng)邊方向流通的筒狀的 部分。管部100具有長(zhǎng)邊方向，但是可以彎曲。管部100的內(nèi)部的空洞只要液體能夠在管部 100內(nèi)維持塞子形狀，其大小、形狀均沒有特別限定。另外，管部100的內(nèi)部的空洞的大小、 與長(zhǎng)邊方向垂直的截面的形狀可以沿管部100的長(zhǎng)邊方向變化。關(guān)于液體是否能夠在管部 100內(nèi)維持塞子形狀，取決于管部100的材質(zhì)、液體的種類等條件，因此管部100的與長(zhǎng)邊 方向垂直的截面的形狀可在液體能夠在管部100內(nèi)維持塞子形狀的范圍內(nèi)適當(dāng)?shù)卦O(shè)計(jì)。
[0040] 管部100的外形的與長(zhǎng)邊方向垂直的截面的形狀也沒有限定。此外，管部100的 壁厚（從內(nèi)部的空洞的側(cè)面到外部的表面的長(zhǎng)度）也沒有特別限定。管部100的內(nèi)部的空 洞的與長(zhǎng)邊方向垂直的截面為圓形時(shí)，管部100的內(nèi)徑（內(nèi)部的空洞的與長(zhǎng)邊方向垂直的 截面中的圓的直徑）例如可以為0.5mm~3_。如果管部100的內(nèi)徑為該范圍，則容易在對(duì) 于管部100的材質(zhì)、液體的種類而言廣泛的范圍容易形成液體的塞子，所以優(yōu)選。
[0041] 管部100的材質(zhì)沒有特別限定，例如，可以是玻璃、高分子、金屬等。但是，如果對(duì) 于管部100的材質(zhì)選擇玻璃、高分子等在可見光中具有透明性的材質(zhì)，則能夠從管部100的 外部觀察內(nèi)部（空洞內(nèi)），所以更優(yōu)選。另外，如果對(duì)于管部100的材質(zhì)選擇透過磁力的物 質(zhì)、非磁性體，則使磁性粒子通過管部100時(shí)等，容易通過從管部100的外部施與磁力來進(jìn) 行該動(dòng)作，所以優(yōu)選。
[0042] 在管部100的內(nèi)部依次配置由蠟或油構(gòu)成的第1塞子10、由第1清洗液構(gòu)成的第 2塞子20、由蠟構(gòu)成的第3塞子30、由溶出液構(gòu)成的第4塞子40以及由蠟或油構(gòu)成的第5 塞子50。在此，所謂蠟是室溫下為固體而加熱時(shí)成為液體的有機(jī)物，本發(fā)明中可使用的蠟具 有31°C以上、優(yōu)選具有36°C以上、更優(yōu)選具有41°C以上、進(jìn)一步優(yōu)選具有46°C以上，且具有 100°C以下、優(yōu)選具有90°C以下、更優(yōu)選具有80°C以下、進(jìn)一步優(yōu)選具有70°C以下的熔點(diǎn)， 優(yōu)選由中性脂肪、高級(jí)脂肪酸、烴等構(gòu)成。
[0043] 作為蠟，沒有特別限定，例如，可以使用石蠟、微晶蠟等來自石油的蠟，蜜蠟、羊毛 蠟、鯨蠟等來自動(dòng)物的蠟，巴西棕櫚蠟、松香蠟、小燭樹蠟、木蠟等來自植物的蠟，除此之外， 還可使用ELchrista(注冊(cè)商標(biāo)，出光興產(chǎn)）、Nissan Elector (注冊(cè)商標(biāo)，日油株式會(huì)社）、 POEM(注冊(cè)商標(biāo)，Riken Vitamin)、RIKEMAL(注冊(cè)商標(biāo)，Riken Vitamin)、Neowax(注冊(cè)商 標(biāo)，Yasuhara Chemical株式會(huì)社）、HI_WAX(注冊(cè)商標(biāo)，三井化學(xué)）、Silicone Wax (注冊(cè)商 標(biāo)，Dow Corning Toray)等。另外，作為油，例如，可舉出選自二甲基硅油等娃系油、石賭系 油和礦物油以及它們的混合物中的一種。
[0044] 1. 2.第1塞子、第3塞子和第5塞子
[0045] 第1塞子10、第3塞子30和第5塞子50由蠟或油構(gòu)成。第1塞子10、第3塞子 30和第5塞子50的蠟可以是相同種類的蠟，也可以是相互不同種類的蠟。另外，第1塞子 10和第5塞子50使用油時(shí)，可以是相同種類的油，也可以是不同種類的油。
[0046] 在第1塞子10與第3塞子30之間配置第2塞子20。在第1塞子10的與第2塞 子20相反側(cè)的區(qū)域可以配置其它液體的塞子。優(yōu)選第1塞子10中沒有氣泡、其它液體，但 只要吸附有核酸的粒子等能夠通過第1塞子10,也可以存在氣泡、其它液體。另外，優(yōu)選在 第1塞子10與第2塞子20之間沒有氣泡、其它液體，但只要吸附有核酸的粒子等能夠從第 1塞子10向第2塞子20通過，也可以存在氣泡、其它液體。同樣，優(yōu)選在第2塞子20與第 3塞子30之間沒有氣泡、其它液體，但只要吸附有核酸的粒子等能夠從第2塞子20向第3 塞子30通過，也可以存在氣泡、其它液體。
[0047] 在第3塞子30與第5塞子50之間配置第4塞子40。在第