一株枯草芽孢桿菌及發(fā)酵豆粕前處理工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體說涉及一株枯草芽孢桿菌及發(fā)酵豆柏前處理工 藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 豆柏是飼料工業(yè)中應(yīng)用最廣泛的植物性蛋白原料，營(yíng)養(yǎng)豐富，但由于存在多種抗 營(yíng)養(yǎng)因子，影響動(dòng)物對(duì)豆柏營(yíng)養(yǎng)的吸收率。采用微生物發(fā)酵處理后，不僅可以去除或降低豆 柏中抗?fàn)I養(yǎng)因子，還可以大大提高豆柏的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
[0003] 發(fā)酵豆柏品質(zhì)的優(yōu)劣、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的高低，除粗蛋白指標(biāo)外，小肽含量也是業(yè)內(nèi)人士 普遍關(guān)注的指標(biāo)，肽含量與酸溶蛋白含量存在顯著的正相關(guān)，所以使用酸溶蛋白含量指標(biāo) 評(píng)價(jià)發(fā)酵豆柏品質(zhì)時(shí)，既可以反映豆柏中抗原蛋白和其它抗?fàn)I養(yǎng)因子蛋白被水解的程度， 同時(shí)又可一定程度上反映肽含量，所以酸溶蛋白含量是評(píng)價(jià)發(fā)酵豆柏品質(zhì)較好且重要的指 標(biāo)。
[0004] 固態(tài)發(fā)酵由于成本低，工藝簡(jiǎn)單，國(guó)內(nèi)外豆柏發(fā)酵多采用固態(tài)發(fā)酵模式，但在短時(shí) 間內(nèi)獲得高酸溶蛋白存在一定難度。皮祖坤、梁運(yùn)祥等人曾提出"正常發(fā)酵豆柏產(chǎn)品小肽含 量一般在5%_8%之間，固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)發(fā)酵豆柏小肽含量一般不會(huì)超過10%，過高的小肽含量 只有通過液態(tài)酶解的方式才可以做到，但其成本遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品"。由此可見，在固 態(tài)發(fā)酵豆柏工業(yè)化生產(chǎn)過程中，生產(chǎn)高酸溶蛋白指標(biāo)的豆柏存在一定難度。本發(fā)明針對(duì)該 問題，通過篩選優(yōu)良菌株及優(yōu)化發(fā)酵豆柏前處理方式，實(shí)現(xiàn)顯著提高酸溶蛋白含量的目的。
[0005] 目前，關(guān)于發(fā)酵豆柏前處理方式主要有：
[0006] 1、原料豆柏中加入一定量的水，攪拌均勻，進(jìn)行熱處理；
[0007] 2、原料豆柏加入一定的水，攪拌均勻，不經(jīng)熱處理，直接接種發(fā)酵；
[0008] 但采用上述處理方式，豆柏經(jīng)發(fā)酵后，酸溶蛋白含量較低，或者酸溶蛋白含量增加 了，但發(fā)酵時(shí)間卻大大延長(zhǎng)。
[0009] 此外，近年來，國(guó)內(nèi)外大量研究表明，經(jīng)微生物發(fā)酵可使豆柏變成一種具有多種功 能的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)飼料。但目前，發(fā)酵豆柏采用的菌株往往不能在較短時(shí)間內(nèi)、全面、徹底地 降解抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高小肽含量。
[0010] 因此，有必要對(duì)提供更優(yōu)異的發(fā)酵菌株，以及對(duì)現(xiàn)有的生產(chǎn)方法加以改進(jìn)，以縮短 發(fā)酵時(shí)間，獲得良好的發(fā)酵豆柏。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的第一個(gè)目的在于，提供一種用于豆柏發(fā)酵的菌株。
[0012] 本發(fā)明提供的菌株為枯草芽孢桿菌，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通 微生物中心，其保藏號(hào)為CGMCC N0. 7641。
[0013] 本發(fā)明的第二個(gè)目的在于，提供一種發(fā)酵豆柏的預(yù)處理方法。
[0014] 本發(fā)明提供的發(fā)酵豆柏的預(yù)處理方法，包括以下步驟：
[0015] a、將豆柏于70_120°C滅菌；
[0016] b、調(diào)節(jié)滅菌后豆柏的水分。
[0017] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述滅菌時(shí)間為10-30min。
[0018] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述調(diào)節(jié)滅菌后豆柏水分為調(diào)節(jié)至水分含量為 45%-55%〇
[0019] 本發(fā)明提供的發(fā)酵豆柏的預(yù)處理方法，包括以下步驟：
[0020] a、調(diào)節(jié)豆柏水分為65-70% ;
[0021] b、將經(jīng)步驟a處理后的豆柏于70-120°C滅菌。
[0022] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述調(diào)節(jié)豆柏水分的方法為：添加過量水浸泡完全 后，去除多余水分。
[0023] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述滅菌時(shí)間為10_30min。
[0024] 本發(fā)明還提供了使用上述方法預(yù)處理的豆柏。
[0025] 本發(fā)明還提供了一種發(fā)酵豆柏的方法，所述方法為在經(jīng)上述方法預(yù)處理的豆柏中 加入豆柏發(fā)酵菌株，以發(fā)酵豆柏。
[0026] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述豆柏發(fā)酵菌株包括：枯草芽孢桿菌、釀酒酵母、 乳酸菌、地衣芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母中的一種或多種。
[0027] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述豆柏發(fā)酵菌株為枯草芽孢桿菌CGMCC N0. 7641。
[0028] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述發(fā)酵為于28_37°C發(fā)酵24_48h。
[0029] 本發(fā)明還有一個(gè)目的在于，提供一種使用前述的方法制備獲得的發(fā)酵豆柏。
[0030] 本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌CGMCC N0. 7641在24h內(nèi)，不僅將低聚糖、抗原蛋白、 TI等抗?fàn)I養(yǎng)因子降解殆盡，還能顯著提高酸溶蛋白含量，使發(fā)酵豆柏品質(zhì)明顯改善。使用本 發(fā)明提供的方法預(yù)處理豆柏在進(jìn)行發(fā)酵，所獲得的發(fā)酵豆柏，其粗蛋白含量、酸溶蛋白含量 提高明顯，胰蛋白酶抑制劑降低顯著。本發(fā)明提供的發(fā)酵豆柏，用于制備飼料濃縮料、寵物 飼料、水產(chǎn)、畜禽等多種動(dòng)物飼料中，由于大分子蛋白經(jīng)低分子化降解、酸溶蛋白含量顯著 提高，利于動(dòng)物吸收利用，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高消化利用率及轉(zhuǎn)化率，降低飼料成本易于工 業(yè)化實(shí)施。
【附圖說明】
[0031] 圖1顯示了實(shí)施例1中使用菌株WBRD00470-B3發(fā)酵豆柏前后的抗原蛋白的降解 情況，其中，泳道1為發(fā)酵前豆柏的電泳結(jié)果，泳道2為發(fā)酵后豆柏的電泳結(jié)果。
[0032] 圖2為枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis) WBRD00470-B3菌落形態(tài)照片。
[0033] 圖3為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis) WBRD00470-B3的系統(tǒng)發(fā)育樹。
[0034] 本發(fā)明的菌株WBRD00470-B3已于2013年05月24日保藏在"中國(guó)微生物菌種保 藏管理委員會(huì)普通微生物中心（CGMCC)"（北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微 生物研究所，郵編100101)，保藏號(hào)是CGMCC No. 7641，分類命名為：枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis。
【具體實(shí)施方式】
[0035]以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說明本 發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0036] 在本發(fā)明中，如果沒有特別的說明，百分?jǐn)?shù)（％ )或者份都指相對(duì)于組合物的重量 百分?jǐn)?shù)或者重量份。
[0037] 在本發(fā)明中，如果沒有特別的說明，所涉及的各組分或其優(yōu)選組分可以相互組合 形成新的技術(shù)方案。
[0038] 在本發(fā)明中，如果沒有特別的說明，本文所提到的所有實(shí)施方式以及優(yōu)選實(shí)施方 式可以相互組合形成新的技術(shù)方案。
[0039] 在本發(fā)明中，如果沒有特別的說明，本文所提到的所有技術(shù)特征以及優(yōu)選特征可 以相互組合形成新的技術(shù)方案。
[0040] 在本發(fā)明中，如果沒有相反的說明，組合物中各組分的含量之和為100%。
[0041] 在本發(fā)明中，如果沒有相反的說明，組合物中各組分的份數(shù)之和可以為100重量 份。
[0042] 在本發(fā)明中，除非有其他說明，數(shù)值范圍"a_b"表示a到b之間的任意實(shí)數(shù)組合的 縮略表示，其中a和b都是實(shí)數(shù)。例如數(shù)值范圍"0-5"表示本文中已經(jīng)全部列出了 "0-5" 之間的全部實(shí)數(shù)，"0-5"只是這些數(shù)值組合的縮略表示。
[0043] 在本發(fā)明中，除非有其他說明，整數(shù)數(shù)值范圍"a_b"表示a到b之間的任意整數(shù)組 合的縮略表示，其中a和b都是整數(shù)。例如整數(shù)數(shù)值范圍"1-N"表示1、2……N，其中N是 整數(shù)。
[0044] 在本發(fā)明中，除非有其他說明，"其組合"表示所述各元件的多組分混合物，例如兩 種、三種、四種以及直到最大可能的多組分混合物。
[0045] 如果沒有特別指出，本說明書所用的術(shù)語"一種"指"至少一種"。
[0046] 如果沒有特別指出，本發(fā)明所述的百分?jǐn)?shù)(包括重量百分?jǐn)?shù)）的基準(zhǔn)都是所述組合 物的總重量。
[0047] 本文所公開的"范圍"以下限和上限的形式?？梢苑謩e為一個(gè)或多個(gè)下限，和一個(gè) 或多個(gè)上限。給定范圍是通過選定一個(gè)下限和一個(gè)上限進(jìn)行限定的。選定的下限和上限限 定了特別范圍的邊界。所有可以這種方式進(jìn)行限定的范圍是包含和可組合的，即任何下限 可以與任何上限組合形成一個(gè)范圍。例如，針對(duì)特定參數(shù)列出了 60 - 120和80 - 110的 范圍，理解為60 - 110和80 - 120的范圍也是預(yù)料到的。此外，如果列出的最小范圍值1 和2,和如果列出了最大范圍值3,4和5,則下面的范圍可全部預(yù)料到：1 一 3、1 一 4、1 一 5、 2 - 3、2 - 4、和 2 - 5。
[0048] 在本文中，除非另有說明，各組分的比例或者重量都指干重。
[0049] 在本文中，除非另有說明，各反應(yīng)都在常溫常壓下進(jìn)行。
[0050] 在本文中，除非另有說明，各個(gè)反應(yīng)步驟可以順序進(jìn)行，也可以不按順序進(jìn)行。例 如，各個(gè)反應(yīng)步驟之間可以包含其他步驟，而且反應(yīng)步驟之間也可以調(diào)換順序。優(yōu)選地，本 文中的反應(yīng)方法是順序進(jìn)行的。
[0051] 菌株
[0052] 本發(fā)明的發(fā)明人從新疆古爾班通古特沙漠的梭梭樹的植物根系土壤中篩選獲得 了一種枯草芽孢桿菌，將該枯草芽孢桿菌用于豆柏發(fā)酵24h內(nèi)，其不僅將豆柏中的低聚糖、 抗原蛋白、TI等抗?fàn)I養(yǎng)因子降解殆盡，還能顯著提高豆柏中酸溶蛋白含量，使發(fā)酵豆柏品質(zhì) 明顯改善。因此，本發(fā)明提供