一種kf鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用
【專利說明】
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域 本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
[0002]
【背景技術(shù)】 微生物培養(yǎng)(microculture)是生物培養(yǎng)的中的一種。所培養(yǎng)的微生物主要有病毒、細(xì) 菌、放線菌、真菌等。微生物培養(yǎng)需要用到培養(yǎng)基，根據(jù)微生物的不同種類和生活習(xí)性來配 制特定的培養(yǎng)基。微生物培養(yǎng)成功的關(guān)鍵在于無菌操作，如果培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基不能徹底 滅菌、培養(yǎng)的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。
[0003] 腸球菌（Enterococcus)屬腸球菌屬，是人類和動物腸道正常菌群的一部分，通常 在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發(fā)現(xiàn)，既往認(rèn)為腸球菌是對人類無害的共棲 菌，但近年研究已證實了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽性球菌中，它是僅次于葡萄球菌的 重要院內(nèi)感染致病菌，腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織 感染，還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。
[0004] 溶血性鏈球菌，需氧或兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基上生長不良，需補 充血清、血液、腹水，大多數(shù)菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長因子。最適生長溫度為 37°C，在20-42°C能生長，最適pH為7. 4-7. 6。在血清肉湯中易成長鏈，管底呈絮狀或顆粒 狀沉淀生長。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊緣整齊、直徑0. 5-0. 75mm的細(xì) 小菌落，不同菌株溶血不一。
[0005] 糞腸球菌，根據(jù)最新分類原則，糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應(yīng)用C多糖抗原，根據(jù)蘭 氏（Lancefield)血清學(xué)分類，可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分 腸球菌和非腸球菌兩類。前者包括糞鏈球菌（S. faecalis)、屎鏈球菌（S. faecium)和堅忍 鏈球菌（S. durans),后者有牛鏈球菌（S. bovis)和馬腸鏈球菌（S. equinus)。
[0006] 其營養(yǎng)要求低，在普通營養(yǎng)瓊脂上也可生長。能在10°C或45°C pH 9. 6或含 6. 5%NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長，并能耐65°C 30分鐘。它可利用精氨酸為能源，發(fā)酵山梨醇， 不發(fā)酵阿拉伯糖。在簡單的培養(yǎng)基上生長不需葉酸。DNA-DNA雜交結(jié)果顯示，腸球菌與鏈球 菌屬同源程度低，故有學(xué)者建議另立腸球菌屬，與人類有關(guān)者為糞腸球菌（E.faecalis)和 屎腸球菌（E. faecium)。
[0007] 培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料， 一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng) 基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要 求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變 質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng) 基)，較長時間的貯存，必須放在:T6°C的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管，現(xiàn)在均改 制成粉末。
[0008] 培養(yǎng)基根據(jù)化學(xué)分類為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基；根據(jù)物理分類 為液體培養(yǎng)基、固定培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基；根據(jù)微生物分類為選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明運用生物化學(xué)，微生物學(xué)及無機、有機、分析化學(xué)和熒光技術(shù)的原理，對不 同的碳源、氮源、無機鹽類、維生素、生長促進(jìn)劑等諸類營養(yǎng)組分的組合進(jìn)行篩選，對培養(yǎng)基 的pH值、離子強度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進(jìn)行了比較，研究出了 本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0011] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為： 一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括20. 6g/L肉浸液肉湯、5. Og/L酵母 粉、2g/L乳糖、10.0g/L甘油磷酸鈉、2g/L磷酸氫二鉀、22g/L麥芽糖、0. 27g/L疊氮鈉、 0.015§/1溴甲酚紫、13.0 8/1瓊脂，口11值為7.0-7.4。
[0012] 所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、月示蛋白 胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0013] 本發(fā)明還公開了一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，用于鏈球菌的選擇性分離及 計數(shù)。
[0014] 月示胨和酵母粉提供氮源、維生素和生長因子；麥芽糖和乳糖為可發(fā)酵糖類；氯 化鈉維持均衡的滲透壓；疊氮化鈉可抑制革蘭氏陰性菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；溴甲酚 紫為指示劑染料。 稱取本品69. 4g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，121°C高壓滅菌15分鐘，冷卻至 50-60°C時，加入無菌1%TTC溶液10ml，混勻，傾入無菌平皿，備用。 本發(fā)明的有益效果： 1、 培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用； 2、 菌生長迅速，變異率低； 3、 便于觀察，分析。
[0015]
【具體實施方式】 實施例1: 一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括20. 6g/L肉浸液肉湯、5. 0g/L酵母 粉、2g/L乳糖、10.(^/1甘油磷酸鈉、2§/1磷酸氫二鉀、22§/1麥芽糖、0.27 §/1疊氮鈉、 0.015§/1溴甲酚紫、13.0 8/1瓊脂，口11值為7.0-7.4。
[0016] 所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、月示蛋白 胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0017] 稱取本品69. 4g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，121°C高壓滅菌15分鐘，冷卻 至50-60°C時，加入無菌1%TTC溶液10ml，混勻，傾入無菌平皿，備用。 在36±0. 5°C下培養(yǎng)48h
【主權(quán)項】
1. 一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括20. 6g/L肉浸液 肉湯、5.0g/L酵母粉、2g/L乳糖、10.0g/L甘油磷酸鈉、2g/L磷酸氫二鉀、22g/L麥芽糖、 0.278/1疊氮鈉、0.0158/1溴甲酚紫、13.0 8/1瓊脂，？!1值為7.0-7.4。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述的肉浸液肉湯為每升 肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、月示蛋白胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
3. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述的KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，其特征在于用于鏈球菌的 選擇性分離及計數(shù)。
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括20.6g/L肉浸液肉湯、5.0g/L酵母粉、2g/L乳糖、10.0g/L甘油磷酸鈉、2g/L磷酸氫二鉀、22g/L麥芽糖、0.27g/L疊氮鈉、0.015g/L溴甲酚紫、13.0g/L瓊脂，pH值為7.0-7.4。所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、月示蛋白胨12.0g、磷酸氫二鉀2.0g。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；菌生長迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【IPC分類】C12R1-46, C12Q1-14, C12N1-20, C12Q1-06
【公開號】CN104651251
【申請?zhí)枴緾N201310599727
【發(fā)明人】劉漢斌
【申請人】劉漢斌
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2013年11月25日