淋球菌ng的特異dna序列的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種生物醫(yī)學技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一段淋球菌NG的特異DNA序列。
【背景技術(shù)】
[0002] 淋球菌NG是一種泌尿系統(tǒng)經(jīng)常感染的病原物，可引發(fā)尿道炎、子宮頸炎、輸卵管 炎、菌血癥、關(guān)節(jié)炎等，在妊娠期間會導致自發(fā)流產(chǎn)、胎膜早破、早產(chǎn)和急性溶膜羊膜炎等疾 病，準確地診斷是進行即時而可靠的治療的依據(jù)，目前只能依據(jù)臨床指征進行診斷。PCR和 基因芯片診斷是一種快速而準確的檢測方法，而這一類的診斷方法依賴于獲得特異的核苷 酸序列。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明在于通過生物信息學和分子生物學技術(shù)，確定了一段淋球菌NG特異核苷 酸序列及其PCR引物，該序列和相應(yīng)的PCR引物可用于建立基因芯片和PCR方法進行淋球 菌疾病的診斷。
[0004] 本發(fā)明的技術(shù)方案為：本發(fā)明確定了一段淋球菌NG的特異DNA序列及其PCR引 物，用引物進行PCR擴增，測序結(jié)果通過手工校對、序列拼接，并在NCBI中進行Blast相似 性搜索，確保所得序列為目標序列，其特征在于，其序列如下：
[0005] tcaccgtcta tatggaaacc gccgccgcac aaagcgacag cgataccgta cgcagcctgc 60
[0006] tgacgcgcga taaacggctc gacaacatcc gcttcatcgg caaggaagac ggtttggcgg 120
[0007] aattacagtc caacctcg 138
[0008] 引物的序列：
[0009] 正向引物：tcaccgtctatatggaaa [0010]反向引物：gaggttggactgtaattc
[0011] 探針的序列：
[0012] accgtcttccttgccgatga
[0013] 所述淋球菌NG的特異DNA序列用于診斷淋球菌的基因芯片的探針序列，并通過上 述的引物序列進行PCR擴增，標記后進行雜交檢測或直接用于PCR診斷。
[0014] 本發(fā)明的有益效果是：本序列的獲得不僅為研究淋球菌類分子的作用機理奠定基 礎(chǔ)，且本發(fā)明建立的臨床檢測技術(shù)所使用的方法具有快速、準確、操作簡便等優(yōu)點，且成本 也較低。
【具體實施方式】
[0015] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明：
[0016] 1、引物設(shè)計：
[0017] (1)、序列查找：通過NCBI查找到相關(guān)的序列
[0018] (2)、引物探針設(shè)計：通過引物探針設(shè)計軟件，在目的基因序列特異性較強的一段 進行設(shè)計。
[0019] 2、引物合成：
[0020] 引物探針均是在生工生物工程（上海）股份有限公司進行合成的；
[0021] 3、提取
[0022] (1)、臨床標本DNA模板的制備：
[0023] 取少許病人尿液或分泌物作為樣品，加適量生理鹽水充分混均，2000r/min低速離 心5min除去上清液，留沉淀備用；
[0024] (2)、樣本 DNA 提取：
[0025] a、取少許作過前處理的樣品加入50ul裂解液（1 XPCR Buffer，0. 45 % NP-400. 45 % Tween-20, 200ug/ml蛋白酶K)，將標本放人55 °C水浴1小時，100°C水浴 lOmin ；
[0026] b、12000r/rain條件下離心5min，取上清備用；
[0027] 4、擴增
[0028] a、擴增試劑：Anstart Taq Master Mix (菲鵬生物，貨號A6120)，NG的引物探針 (濃度均稀釋到10P)，熒光定量PCR儀（stepone，ABI);
[0029] b、試劑配制：見表1
[0030] 表1試劑配制表
[0031]
【主權(quán)項】
1. 淋球菌NG的特異DNA序列，其特征在于，其序列如下： tcaccgtcta tatggaaacc gccgccgcac aaagcgacag cgataccgta cgcagcctgc 60 tgacgcgcga taaacggctc gacaacatcc gcttcatcgg caaggaagac ggtttggcgg 120 aattacagtc caacctcg 138 引物的序列： 正向引物：tcaccgtctatatggaaa 反向引物：gaggttggactgtaattc 探針的序列： accgtcttccttgccgatga。
2. 如權(quán)利要求1所述的淋球菌NG的特異DNA序列的應(yīng)用，其特征在于，所述淋球菌NG 的特異DNA序列用于診斷淋球菌的基因芯片的探針序列，并通過上述的引物序列進行PCR 擴增，標記后進行雜交檢測或直接用于PCR診斷。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一段淋球菌NG的特異DNA序列，通過對人類生殖道淋球菌NG感染標本的PCR擴增，獲得該序列，所得的測序序列進行blast比對，確信均為目的基因序列無疑，本序列的獲得不僅為研究淋球菌類分子的作用機理奠定基礎(chǔ)，且本發(fā)明建立的臨床檢測技術(shù)所使用的方法具有快速、準確、操作簡便等優(yōu)點，且成本也較低。
【IPC分類】C12Q1-68, C12R1-01, C12N15-11, C12Q1-04
【公開號】CN104673791
【申請?zhí)枴緾N201510104122
【發(fā)明人】張貽琛, 李雷
【申請人】普生（天津）科技有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年3月10日