一種小而密低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒及其制備
【技術領域】：
[0001] 本發(fā)明提供一種小而密低密度脂蛋白膽固醇（SdLDL-C)檢測試劑盒，所述試劑盒 為液體雙試劑，包括試劑R1與R2,所述試劑R1含MOPS緩沖液（PH7. 0) 20~80mmol/L，膽 固醇酯酶1400~1800U/L，膽固醇氧化酶2300~2600U/L，磷脂酶2500~3000U/L，過氧 化氫酶1000~1300U/L，作為表面活性劑A的聚乙二醇烷基苯基醚（JK-14)1.0~3.0g/ L，作為保護劑的聚氧乙烯芐基苯乙烯醚（A3PK)0. 1~0. 5g/L，N-乙基N-(2-羥基-3-磺 丙基）-3_甲基苯胺鈉鹽（T00S)0. 3~0. 7mmol/L ;試劑R2含MOPS緩沖液（PH7. 0)20~ 80mmol/L，過氧化物酶2000~5000U/L，作為表面活性劑B的聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100) 5~18g/L，4-氨基安替比林（4-AA) 25~60mmol/L，疊氮鈉0. 05 %。本試劑靈敏度 高，特異性強，試劑配制簡單，無需預處理樣本，值得進一步推廣使用。
【背景技術】：
[0002] 低密度脂蛋白（LDL)具有異質性，由一系列大小、密度和化學組成各異的顆粒組 成。應用非變性梯度凝膠電泳法或密度梯度超離心法可將LDL分為3種或更多亞組分，其名 稱也因實驗方法而異。在LDL亞組分中有一部分LDL的顆粒較?。ㄖ睆?lt; 26nm)，密度較大 (1.04 ~1.06kg/L)，稱為小而密低密度脂蛋白（small dense Low-Density Lipoprotein， sdLDL)，亦稱B型LDL ;-部分LDL的顆粒較大（直徑> 27nm)，密度較?。?. 02~1. 03kg/ L)，稱為大而輕低密度脂蛋白（large，buoyant LDL，lbLDL)，亦稱A型LDL;介于兩者之間的 亞組分稱中間型低密度脂蛋白。近來研宄發(fā)現sdLDL與普通LDL相比，其致動脈粥樣硬化能 力更強，與冠心?。–HD)有著密切關系，已被美國膽固醇教育計劃（National Cholesterol Education Program，NCEP)委員會成人治療組列入新發(fā)現的重要心血管病危險因素之一。
[0003] 小而密低密度脂蛋白膽固醇可通過梯度密度超速離心法，梯度凝膠電泳法，化學 沉淀法，分子篩色譜分析法，毛細管電泳法，核磁共振光譜法，指標評估法，動態(tài)光散射法， 均相法等多種方法進行測定。梯度密度超速離心法、分子篩色譜分析法、毛細管電泳法、動 態(tài)光散射法操作繁瑣，對實驗室條件和實驗操作人員要求較高，梯度凝膠電泳法耗時，特異 性差，化學沉淀法測定值不精確，核磁共振光譜法需要配備貴重的實驗設備，指標評估法只 能粗略估計，不能準確測定其濃度。目前采用最多的sdLDL-C檢測方法為均相法。使用特 殊的表面活性劑選擇性地將非LDL解離，其解離釋放出來的膽固醇酯被膽固醇酯酶和膽固 醇氧化酶分解掉，使其不參與顯色反應，通過磷脂酶分解表面富含磷脂質的lbLDL，剩余的 sdLDL就可以通過參與完整的Trinder反應進行顯色測定sdLDL-C，具有快速、特異的優(yōu)點。
【發(fā)明內容】
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[0004] 本發(fā)明的目的在于，搭配使用幾種特殊的表面活性劑、保護劑和酶，進行SdLDL-C 檢測試劑盒制備。
[0005] 本發(fā)明的技術方案：使用一種特殊的表面活性劑A和保護劑，以及磷脂酶，選擇性 地將高密度脂蛋白（HDL)、極低密度脂蛋白（VLDL)及乳糜微粒（CM)解離，磷脂酶分解表面 富含磷脂質的lbLDL，保護劑保護sdLDL組分不與磷脂酶、膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶反 應，使sdLDL完整保留下來。HDL、VLDL、CM被解離后釋放出來的膽固醇酯被膽固醇酯酶和 膽固醇氧化酶分解掉，使其不參與顯色反應，lbLDL被磷脂酶分解。剩余的sdLDL通過表面 活性劑B解除保護，參與完整的Trinder反應進行顯色測定sdLDL-C。
[0006] 本檢測試劑盒的檢測原理：
【主權項】
1. 本發(fā)明提供一種小而密低密度脂蛋白膽固醇（sdLDL-C)檢測試劑盒，所述試劑盒為 液體雙試劑，包括試劑R1與R2,所述試劑R1含MOPS緩沖液（PH7. 0)，膽固醇酯酶，膽固醇 氧化酶，磷脂酶，過氧化氫酶，作為表面活性劑A的聚乙二醇烷基苯基醚（JK-14)，作為保護 劑的聚氧乙烯芐基苯乙烯醚（A3PK)，N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺鈉鹽 (T00S);試劑R2含MOPS緩沖液（PH7. 0)，過氧化物酶，作為表面活性劑B的聚乙二醇辛基 苯基醚（Triton X-100)，4-氨基安替比林（4-AA)，疊氮鈉。
2. 根據權利要求1所述試劑R1中，MOPS緩沖液（PH7. 0)的濃度范圍為20~80mmol/ L〇
3. 根據權利要求1所述試劑R1中，膽固醇酯酶的濃度范圍為1400~1800U/L ;膽固醇 氧化酶的濃度范圍為2300~2600U/L ;磷脂酶的濃度范圍為2500~3000U/L過氧化氫酶 的濃度范圍為1000~1300U/L。
4. 根據權利要求1所述試劑R1中，表面活性劑A :聚乙二醇烷基苯基醚（JK-14)的濃 度范圍為1.0~3.0g/L。
5. 根據權利要求1所述試劑R1中，保護劑：聚氧乙烯芐基苯乙烯醚（A3PK)的濃度范 圍為 0. 1 ~0. 5g/L。
6. 根據權利要求1所述試劑R1中，N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺鈉 鹽（T00S)的濃度范圍為0. 3~0. 7mmol/L。
7. 根據權利要求1所述試劑R2中，MOPS緩沖液（PH7. 0)的濃度范圍為20~80mmol/ L〇
8. 根據權利要求1所述試劑R2中，過氧化物酶的濃度范圍為2000~5000U/L。
9. 根據權利要求1所述試劑R2中，表面活性劑B :聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100)的濃度范圍為5~18g/L。
10. 根據權利要求1所述試劑R2中，4-氨基安替比林（4-AA)的濃度范圍為25~ 60mmol/L〇
11. 根據權利要求1所述試劑R2中，疊氮鈉的濃度范圍為0. 05%。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種小而密低密度脂蛋白膽固醇(sdLDL-C)檢測試劑盒，所述試劑盒為液體雙試劑，包括試劑R1與R2，所述試劑R1含MOPS緩沖液(PH7.0)，膽固醇酯酶，膽固醇氧化酶，磷脂酶，過氧化氫酶，作為表面活性劑A的聚乙二醇烷基苯基醚(JK-14)，作為保護劑的聚氧乙烯芐基苯乙烯醚(A3PK)，N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS)；試劑R2含MOPS緩沖液(PH7.0)，過氧化物酶，作為表面活性劑B的聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)，4-氨基安替比林(4-AA)，疊氮鈉。本試劑靈敏度高，特異性強，試劑配制簡單，無需預處理樣本，值得推廣使用。
【IPC分類】C12Q1-26, C12Q1-30, C12Q1-44, C12Q1-28, C12Q1-60
【公開號】CN104673879
【申請?zhí)枴緾N201510111190
【發(fā)明人】王賢俊
【申請人】王賢俊
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年3月7日