一種愛啡肽的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及多肽藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種愛啡肽的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 愛啡肽，又名依非巴特、埃替非巴肽，英文名：Eptifibatide，分子式：C35H49Nn09S2， CAS登錄號為148031-34-9,其氨基酸序列如SEQIDNO: 1所示，其結(jié)構(gòu)為：
【主權(quán)項】
1. 一種愛啡肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟 1 :合成Fmoc-Cys (x)-Rink amide Resin； 步驟2 :按照愛啡肽的肽序，采用固相合成法在所述Fmoc-Cys(x) -Resin依次偶 聯(lián)-Pro、-Trp、-Asp、-Gly、-Har、-Mpr制得愛啡肽線性樹脂，經(jīng)裂解制得線性愛啡肽； 步驟3 :取所述線性愛啡肽，經(jīng)氧化制得愛啡肽粗品，經(jīng)純化，即得； 其中，所述合成的Fmoc-Cys(x)-RinkamideResin中，x為Cys的側(cè)鏈保護基，所述 合成Fmoc-Cys(x)-RinkamideResin的溫度為 _10°C~10°C; 所述偶聯(lián)中，-Gly的偶聯(lián)反應(yīng)溫度為-10°C~10°C，-Pro、-Trp、-Asp、-Har、-Mpr的偶 聯(lián)反應(yīng)溫度為15°C~30°C; 所述氧化采用液相氧化，氧化液的pH值為7. 0~8. 0。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述合成Fmoc-Cys(x)-Rinkamide Resin的溫度為-5°C~5°C。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述-Gly的偶聯(lián)反應(yīng)溫度為-5°C~ 5。。。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述氧化液的pH值為7. 2~7. 5。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯(lián)的偶聯(lián)試劑為HOBt與DIC的混合物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述裂解的裂解液為三氟乙酸、水和 二異丙基硅烷的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯(lián)中，-Trp采用的側(cè)鏈保護基 為Boc、-Asp采用的側(cè)鏈保護基為OtBu、-Har采用的側(cè)鏈保護基為Pbf、-Mpr采用的側(cè)鏈 保護基為Trt。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述Fmoc-Cys (x)-Rink amide Resin中-Cys的側(cè)鏈保護基為Trt。
【專利摘要】本發(fā)明涉及多肽藥物制備領(lǐng)域，尤其涉及一種愛啡肽的制備方法。該方法包括：合成Fmoc-Cys（x）-Rink amide Resin；按照愛啡肽的肽序，采用固相合成法在Fmoc-Cys（x）-Resin依次偶聯(lián)-Pro、-Trp、-Asp、-Gly、-Har、-Mpr制得愛啡肽線性樹脂，經(jīng)裂解制得線性愛啡肽；取線性愛啡肽，經(jīng)氧化制得愛啡肽粗品，經(jīng)純化，即得。通過低溫反應(yīng)使單雜含量在低于0.15%。通過液相氧化，調(diào)整pH值為7.2～7.5，既可保證氧化速率又可降低愛啡肽產(chǎn)品在氧化液中的溶解度，避免因大量溶解而產(chǎn)生的回收困難的問題。以該方法制備愛啡肽純度＞99%，其中，單雜含量＜0.15%。
【IPC分類】C07K1-06, C07K7-06, C07K1-04, C07K1-02
【公開號】CN104710509
【申請?zhí)枴緾N201310676431
【發(fā)明人】肖慶, 劉建, 馬亞平, 袁建成
【申請人】深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2013年12月11日