一種糖基化多肽及其制備方法和其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具有涉及一種抗HIV多膚及其制備方法和其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 從1981年美國首次發(fā)現(xiàn)并報(bào)導(dǎo)艾滋病至今，艾滋病的防治一直沒有得到有效解 決。艾滋病由人類免疫缺陷病毒（HIV)感染引起，目前上市的HIV的治療性藥物多為針對(duì) 病毒逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶、蛋白酶等的一些小分子酶抑制劑，由于HIV的超高突變性，使得該 些小分子特效藥物正在逐漸退化為常效、甚至無效藥物。近年來，隨著HIV入侵宿主細(xì)胞分 子機(jī)制的逐步闡明，抑制該過程的多膚藥物逐漸成為艾滋病防治領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，該種多 膚藥物可特異性結(jié)合HIV囊膜上的融合蛋白從而抑制病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞，瑞± Roche和美 國Trimeris公司共同研制的T-20 (商品名：化zeon)是目前唯一上市的抗HIV多膚藥物， 與傳統(tǒng)的小分子抗HIV藥物相比較，T-20具有很強(qiáng)的對(duì)抗突變株的能力，且無毒副作用，自 2003年上市至今已在艾滋病治療中占有不可替代的位置。
[0003] 近年來，隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，越來越多的多膚藥物在疾病的預(yù)防和治療中 得到應(yīng)用。雖然多膚類藥物的作用位點(diǎn)專一、療效確切，但溶解度低、免疫原性高、易被蛋白 酶降解和被腎臟清除等缺陷嚴(yán)重地制約了其臨床應(yīng)用?？笻IV多膚也存在同樣問題，T-20 注射后很快會(huì)被患者體內(nèi)血漿蛋白酶降解，患者通常需要1天多于2次的注射治療，在美國 注射T-20-年要花費(fèi)兩萬美元，在歐洲一年要花費(fèi)兩萬五千美元，昂貴的藥費(fèi)使得T-20的 應(yīng)用受到極大限制。因此，研究并建立延長T-20和皿212體內(nèi)半衰期、提高其生物利用率 的化學(xué)修飾方法與技術(shù)對(duì)于抗HIV多膚藥物的臨床應(yīng)用至關(guān)重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種糖基化多膚及其制備方法和其應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明提供的一種糖基化多膚，具有式I所示結(jié)構(gòu)：
[0006]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種糖基化多肽，具有式I所示結(jié)構(gòu)：
式I中，X為1)或2)所述的多肽：1)具有序列表中SEQ ID Ns . 1所示的氨基酸序列 的多肽；2)將序列表中的SEQ ID N2 . 1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取 代和/或缺失和/或添加且具有抗HIV活性的由1)衍生的多肽；Y取代基選自式II所示取 代基，式II中R取代基選自任意糖取代基，a和b為大于零的整數(shù)；
式I中Z選自含有巰基的氨基酸；m為O或I ;n為O或I ;p為O或I ;q為O或I ;p和 q不同時(shí)為〇 ;m和η不同時(shí)為O ;p為O時(shí)，m也為O ;q為O時(shí)，η也為O ;優(yōu)選的，式I中m 為O或l;n為O或l;p為O或l;q為O或l;p和q不同時(shí)為1或0;m和η不同時(shí)為O或 I ;ρ為O時(shí)，m也為O ;q為O時(shí)，η也為O ;再優(yōu)選的，式I中m為I ;η為O ;ρ為I ;q為0。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖基化多肽，其特征在于：所述式I中，Z選自半胱氨酸；Y取 代基中，式II中a為1，b為3。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的糖基化多肽，其特征在于：所述式II中，R取代基選自乳糖 Lac取代基或唾液酸乳糖SiaLac取代基，所述SiaLac取代基的結(jié)構(gòu)式為，式中的Ac表示乙 ?；?br>4. 一種多肽定點(diǎn)糖基化修飾方法，所述方法包括：將式III所示化合物同式IV所示化合 物反應(yīng)即可：
式III中，Y取代基選自式II所示取代基，式II中R取代基選自任意糖取代基，a和b為大 于零的整數(shù)；
式IV中，X為1)或2)所述的多肽：1)具有序列表中SEQ ID Ns . 1所示的氨基酸序列 的多肽；2)將序列表中的SEQ ID N2 . 1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取 代和/或缺失和/或添加且具有抗HIV活性的由1)衍生的多肽；Z選自含有巰基的氨基酸； P為O或I ;q為O或I ;p和q不同為0。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述式III所示化合物的制備方法為：將式 V所示化合物與式VI所示化合物反應(yīng)生成式W所示化合物，式W所示化合物再與式VDI所示 化合物反應(yīng)即得式III所示化合物；其中，式VDI所示化合物中R取代基選自任意糖取代基，a 為任意整數(shù)；式V和式W所示化合物中，b為任意整數(shù)：
6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于： 所述式IV中，Z選自半胱氨酸； 所述式III所示化合物的制備方法為：將化合物3與化合物11反應(yīng)生成化合物4,化合 物4再與式IX所示化合物反應(yīng)即得式III所示化合物；其中，式IX所示化合物中R取代基選自 任意糖取代基；
所述方法制備得到的式III所示化合物的具體結(jié)構(gòu)式如下所示，其中，R取代基選自任意 糖取代基：
7. 根據(jù)權(quán)利要求4-6所述的方法，其特征在于：所述式II中，R取代基選自乳糖Lac取 代基或唾液酸乳糖SiaLac取代基，所述SiaLac取代基的結(jié)構(gòu)式為，式中的Ac表示乙?；?br>8. 根據(jù)權(quán)利要求4-7任一所述的方法，其特征在于：所述式III所示化合物同式IV所示 化合物反應(yīng)的pH范圍為7. 2-9. O ;優(yōu)選7. 2、8. O或9. O ;最優(yōu)選7. 2。
9. 權(quán)利要求1-3任一所述的糖基化多肽或由權(quán)利要求4-9任一所述的方法制備得到的 糖基化多肽在制備下述至少一種產(chǎn)品中的應(yīng)用： 1) 抗HIV產(chǎn)品； 2) 治療和/或預(yù)防艾滋病的產(chǎn)品。
10. 下述式W所示化合物、化合物4、化合物8或化合物10,其中，式W所示化合物中，b 為任意整數(shù)：
或，式W所示化合物的制備方法，其中，式W所示化合物中，b為任意整數(shù)，所述制備方 法包括：將式V所示化合物與式VI所示化合物反應(yīng)生成式W所示化合物；
或，化合物4的制備方法，所述制備方法包括：將化合物3與化合物11反應(yīng)生成化合物 4；
或，化合物8或10的制備方法，所述制備方法包括：將化合物4與化合物7或化合物9 反應(yīng)即得；
或，式W所示化合物、化合物4、化合物8或化合物10在制備權(quán)利要求1-3任一所述的 糖基化多肽或權(quán)利要求10所述的糖基化多肽中的應(yīng)用，其中，式W所示化合物中，b為任意 整數(shù)。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種糖基化多肽及其制備方法和其應(yīng)用。該糖基化多肽的結(jié)構(gòu)式如式Ⅰ所示：式Ⅰ中X基團(tuán)優(yōu)選抗HIV多肽T-20，Y選自任意糖鏈化合物，Z優(yōu)選為含巰基的半胱氨酸。本發(fā)明的部分糖基化多肽與T-20相比，抗HIV活性增強(qiáng)，體內(nèi)半衰期延長、藥效長、穩(wěn)定性高。本發(fā)明公開的多肽定點(diǎn)糖基化修飾方法，可在溫和的反應(yīng)條件下進(jìn)行，方法簡單高效。
【IPC分類】C07H1-00, A61P31-18, C07H15-26, C07K1-107, C07K14-00, A61K38-16, C07D207-452, C08G65-00
【公開號(hào)】CN104725484
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310704596
【發(fā)明人】李學(xué)兵, 程水紅, 馬麗英, 邵一鳴
【申請(qǐng)人】中國科學(xué)院微生物研究所, 中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心
【公開日】2015年6月24日
【申請(qǐng)日】2013年12月19日